一种核酸适配体高敏检测方法的建立及应用评价

本文建立一种基于免疫印迹的核酸适配体高敏定量分析的检测方法,并探讨其在适配体药物靶向性研究中的应用价值。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸适配体的分离,然后利用电转的方法将凝胶上的核酸适配体转移至PVDF膜上,先后孵育Rabbit Anti-Biotin和HRP-Streptavidin抗体,最后利用化学发光仪进行成像。结果显示核酸适配体可以通过该方法进行定量检测分析,且该方法检测灵敏度高,能够识别荧光染料法检测不到的浓度范围。此外,该方法只识别被生物素修饰的核酸适配体,特异性强。结果提示,核酸免疫印记法可以作为核酸适配体药物靶向性研究的一个定量检测手段。     

GPBB、cTnI、CK、CKMB在急性心肌梗死伴糖尿病早期诊断中的临床应用价值

分析心肌梗死伴糖尿病患者血清中糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)、肌钙蛋白I (cTnI)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)水平的变化。结果显示糖尿病组、单纯急性心肌梗死组及急性心肌梗死伴糖尿病组患者血清中GPBB、cTnI、CK、CKMB、BNP及超敏C反应蛋白(Hs-CRP)水平明显升高(P<0.05),且急性心肌梗死伴糖尿病组患者与其他组相比差异均有显著性(P<0.05);与GPBB、cTnI、CK、CKMB单独检测相比,各项目联合检测急性心肌梗死伴糖尿病敏感度和特异性均明显升高(P<0.05)。因此, GPBB、cTnI、CK、CKMB联合检测在急性心肌梗死伴糖尿病早期诊断中具有重要的参考价值。     

辛弗林对CUMS大鼠抑郁样行为和血清代谢组学的影响

目的 通过观察分析大鼠慢性应激引起的行为学和血清代谢组变化以及辛弗林抗抑郁的有效治疗,发现潜在的抗抑郁新药先导化合物和生物标志物。方法 将24只大鼠分为正常组、模型组和辛弗林组。模型组为6周慢性温和不可预知应激(CUMS)模型大鼠,用体质量变化、糖水偏好、开场实验作为抑郁评估指标,后2周辛弗林(Syn 20 mg/kg)干预治疗后采集大鼠血清进行气相色谱-质谱联用(GC-MS/MS)测定,研究CUMS大鼠血清内源性代谢物变化,以及辛弗林的干预作用,寻找其抗抑郁潜在的先导化合物和生物标志物,并找到相关靶向代谢通路。结果 辛弗林干预后,在增加CUMS大鼠体质量、提高糖水偏好率、增加开场运动总距离和理毛次数的同时,还能逆转CUMS大鼠血清中磷酸乙醇胺、苯甲酸、胆固醇、谷氨酸等14种代谢物的变化使其趋于正常组,并发现谷氨酰胺和谷氨酸的代谢、缬氨酸和异亮氨酸的生物合成等9条主要牵涉辛弗林的靶向代谢通路。结论 辛弗林可能通过调节谷氨酰胺和谷氨酸的代谢、缬氨酸和异亮氨酸的生物合成等生物学途径发挥对CUMS大鼠抑郁样行为的调正作用。      

Effect and Mechanism of Ganoderma lucidum Polysaccharides on Human Fibroblasts and Skin Wound Healing in Mice

Objective: To investigate the effects of Ganoderma lucidum polysaccharides(GL-PS) on human fibroblasts and skin wound healing in Kunming male mice and to explore the putative molecular mechanism. Methods: Primary human skin fibroblasts were cultured. The viability of fibroblasts treated with 0, 10, 20, 40, 80, and 160 μg/mL of GL-PS, respectively were detected by 3-4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide(MTT). The migration ability of fibroblasts treated with 0, 10, 20, and 40 μg/mL of GL-PS were measured by transwell assay. The secretion of the C-terminal peptide of procollagen type Ⅰ(CICP) and transforming growth factor-β1(TGF-β1) in the cell supernatant was tested by enzyme-linked immunosorbent assay. The expression of β-catenin was detected by Western blot. Furthermore, the Kunming mouse model with full-layer skin resection trauma was established, and was treated with 10, 20, and 40 mg/mL of GL-PS, respectively as external use. The size of the wound was measured daily, complete healing time in each group was recorded and the percentage of wound contraction was calculated. Results: Compared with the control group, 10, 20, and 40 μg/mL of GL-PS significantly increased the viability of fibroblasts, promoted the migration ability of fibroblasts, and up-regulated the expressions of CICP and TGF-β1 in fibroblasts(P0.05 or P0.01). The expression of β-catenin in fibroblasts treated with 20 and 40 μg/mL of GL-PS was significantly higher than that of the control group(P0.01). Furthermore, after external use of 10, 20, and 40 mg/mL of GL-PS, the rates of wound healing in mice were significantly higher and the wound healing time was significantly less than the control group(P0.05 or P0.01). Conclusion: A certain concentration of GL-PS may promote wound healing via activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway and up-regulation of TGF-β1, which might serve as a promising source of skin wound healing.     

肝细胞癌NF κ-B表达与CT表现的相关性

目的 探讨核因子（NF κ-B）在肝细胞癌组织中的表达与CT影像特点间的关系。方法 收集华西医院有完整临床资料和全肝CT扫描图像并经手术完整切除的肝癌组织标本患者80例,采用免疫组织化学方法染色定量分析癌组织中NF κ-B表达情况和在不同的临床参数中表达的差异;再分别以肿瘤坏死、血供、瘤体直径和瘤周子灶的有无分四组,探讨NF κ-B表达量在不同CT影像特征中有无差异。结果 CT检测80例患者中肝癌细胞核内NF κ-B表达阳性有74例（92.5%）。肝细胞癌NF κ-B表达与临床参数,包括性别、肝炎病史无相关性,瘤体大小与NF κ-B表达无统计学差异。CT检测肿瘤血供、坏死及瘤周子灶的有无与NF κB表达相关（P＜0.05）,富血供肝细胞癌NF κ-B表达较乏血供者明显增高,而瘤体有坏死者较未发生坏死者低,瘤周出现子灶的病例NF κ-B表达也增高,且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 肝癌血供、坏死及瘤周子灶CT影像特点与NF κ-B水平密切相关。瘤体血供丰富、瘤内无坏死、瘤周伴有子灶的肝癌组织NF κ-B表达水平明显增高,NF κ-B表达水平量可能与肿瘤的生物学特性,疾病的转归和预后相关,CT检测可为肝癌的治疗及预防评估提供重要依据。     

胆肠吻合术后吻合口结石的原因及预防

【摘要】 胆肠吻合术是重建胆道通路,使胆汁通畅引流的一种手术方式。术后吻合口结石成因复杂,治疗起来相对困难,且容易复发,这已经成为普外科医师亟待解决的临床难题之一。本文综述了胆肠吻合术后吻合口结石形成的原因,包括胆道系统术后病理生理改变、手术适应证的选择不当、原发病处理不充分以及术中操作不当及相应的预防措施,为今后胆肠吻合术后吻合口结石的防治提供参考。     

鼻腔泪囊吻合术中填充美乐胶治疗小泪囊泪囊炎

目的：观察美乐胶(MeroGel)在经鼻内镜下鼻腔泪囊吻合术(EN-DCR)治疗小泪囊泪囊炎的疗效。

方法：选取2014-06/2018-12我院收治的小泪囊泪囊炎患者185例185眼,鼻腔泪囊吻合术(DCR)中分别使用MeroGel、明胶海绵、膨胀海绵和凡士林纱条,观察各组患者术后并发症和造口恢复情况。

结果：使用MeroGel的患者术后眼角和鼻腔渗血少,后期复查无痛苦,造口恢复情况较其他各组更佳(P<0.05)。

结论：MeroGel减少了DCR术后渗血,同时其可降解性有助于EN-DCR术后造口黏膜上皮化,尤其在小泪囊泪囊炎术后,能抑制造口粘连及周边肉芽组织增生,大大提高小泪囊泪囊炎的成功率,相比于其他填塞材料,使用MeroGel后并发症更少,患者更舒适。     

Peters异常PITX2及PAX6基因型表型分析

目的：分析中国人Peters异常(PA)患者的临床特征,研究Peters异常患者PITX2及PAX6基因变异情况。

方法：选取2016/2019年在常州市第二人民医院及第三人民医院眼科就诊的15例Peters异常患者,并收集详细的相关临床资料。征得患者及其家系成员的同意后抽血制备基因组DNA,用聚合酶链反应(PCR)对致病基因PITX2及PAX6的编码区及其临接内含子进行扩增后,直接测序筛查中国人群Peters异常患者PITX2及PAX6基因变异,异源双链-单链构象多态性分析(HA-SSCP)的方法对突变患者及其家系成员及80例正常对照进行验证; 分析比较国内已报道的Peters异常患者PITX2及PAX6基因突变并研究其相关表型。

结果：Peters异常患者15例PITX2基因突变筛查结果发现了1种新PITX2的突变c.296delG(P.R99fsx56),导致该基因的功能异常,分析突变患者临床特征,该患者右眼诊断为Axenfeld-Rieger综合征(ARS),左眼诊断为Peters异常。而家系成员中该患者父母及无亲缘关系的正常对照者均未发现相同突变,故此突变为新生突变。PAX6基因突变筛查未能发现突变。

结论：PA患者15例中检测到1个新PITX2基因突变,丰富了PITX2基因突变频谱,进一步明确了PA合并ARS眼病的临床特点,为该种少见眼病的临床诊断和发病原因提供了依据。     

基于双通道技术的视觉质量分析系统在评估轻度圆锥角膜视觉质量中的应用

探讨视觉质量分析系统（OQAS）测量圆锥角膜眼与正常角膜眼之间视觉质量的差异。方法：横断面研究。选取正常角膜屈光不正患者32例（32眼）作为对照组,圆锥角膜患者27例（27眼）作为圆锥角膜组。采用OQAS测量每组在3、4、5 mm的人工瞳孔直径下的视觉质量参数调制传递函数截止频率（MTFcutoff）、Strehl比、不同对比度下的OQAS值（OV-100、OV-20、OV-9）,组间差异采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验,组内差异采用重复测量资料方差分析及Bonferroni校正。结果：圆锥角膜组在人工瞳孔分别为3、4、5 mm时的MTFcutoff、Strehl比、OV-100、OV-20、OV-9均低于对照组（3 mm：t=6.658、6.695、6.660、6.493、6.778;4 mm：t=7.106、6.567、7.109、6.802、6.788; 5 mm：t=6.148、7.254、6.158、6.446、7.210;P均<0.001）。对照组及圆锥角膜组内MTFcutoff、Strehl比、 OV-100、OV-20、OV-9 在不同人工瞳孔大小的组内比较差异有统计学意义（对照组：F=42.205、 28.335、42.559、32.621、30.372;圆锥角膜组：F=15.732、11.533、15.625、13.870、10.495;均 P<0.001）。结论：双通道OQAS测量结果表明圆锥角膜的视觉质量较正常眼明显下降,圆锥角膜及正常眼的视觉质量均随着瞳孔增大而下降。