肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

siRNA干扰铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达的研究

目的 探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响.方法 设计并合成4条小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4)序列,构建干扰RNA( short hair pin RNA,shRNA)表达载体,将带有siRNA质粒电转入PAO1和临床耐药株PAO3.应用E-test方法检测PAO1和PAO3抗生素MIC的变化.用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化.结果 经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功,并明显提高PAO和临床耐药株PAO3对抗生素的敏感性.RT-PCR结果显示干扰后的PAO1和临床耐药株PAO3 mexB基因表达明显下降(P＜0.05).结论 siRNA成功干扰MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性,为临床上治疗铜绿假单胞菌感染,降低其耐药性提供了新的思路.     

IFN-γ上调Th17/IL-17应答介导衣原体呼吸道感染免疫保护

目的 探讨IFN-γ在小鼠沙眼衣原体感染中对Th17/IL-17应答的调节作用.方法 利用沙眼衣原体鼠肺炎株小鼠呼吸道感染模型,用抗鼠IFN-γ单克隆抗体吸入中和肺组织IFN-γ,对照组给予同等剂量的独特型抗体IgG2a,于感染后7 d处死小鼠.免疫酶法检测小鼠肺组织衣原体生长;利用RT-PCR技术检测衣原体感染小鼠肺组织中Th17相关因子IL-17及其上游因子IL-23 mRNA的表达;细胞内细胞因子染色检测衣原体感染小鼠脾脏IL-17-CD4+T细胞的扩增.结果 与对照组相比,IFN-γ抗体中和小鼠有严重的疾病状态,包括明显的体重下降、肺组织更高的衣原体负荷和肺组织更严重的病理损伤;肺组织IL-17和IL-23 mRNA的表达水平显著降低;脾脏IL-17-CD4+T细胞百分率也显著降低.结论 小鼠衣原体感染中,IFN-γ通过上调Th17/IL-17应答起保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the regulation of IFN-γ to Th17 response in Chlamydia muridarum (Cm) lung infection in mice. Methods A murine model of pneumonia induced by intranasal inoculation of Cm was used for this study. Anti-mouse IFN-γ McAbs were used to neutralize endogenous IFN-γfollowing Cm lung infection. Control group received the same dose of isotype antibody (IgG2a). Mice were sacrificed at day 7 postinfection. Chlamydial growth in the lung was assessed by immunoenzyme technique.IL-17 and IL-23 mRNA expression in the lung was assayed by RT-PCR and the proliferation of IL-17 + CD4 +T cells in the spleen was assayed by intracellular cytokine staining. Results IFN-γ-neutralized mice exhibited serious disease course, include greater body weight loss, higher organism growth and much more severe pathological changes in the lung compared with control mice. The mRNA expression of IL-17 and IL-23 in the lung and the proliferation of IL-17 + CD4 + T cells in the spleen significantly decreased in the IL-17- neutralized mice. Conclusion IFN-γ was protective in Cm lung infection through up-regulating the antigen specific Th17 responses.     

HPLC分离异亚丙基莽草酸的有关物质

目的:建立异亚丙基莽草酸有关物质分离的HPLC方法。方法:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水(7∶93)为流动相,检测波长220 nm,流速:1.0 mL·min-1,柱温30℃。结果:样品中各成分的分离度及检出灵敏度能满足有关物质限度的测定要求。最小检出量为1 ng。结论:本法简便、专属、可用于检测莽草酸的有关物质。     

大肠癌裸鼠移植瘤实验模型的建立及T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1封闭载体的治疗作用

目的 通过建立大肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1( Tiam1)封闭载体在动物体内的治疗作用.方法 构建编码一条短发夹RNA的Tiam1质粒表达封闭载体,并用之转染SW620细胞;应用Hoechst 33342荧光染色技术观察细胞形态学变化.将皮下接种SW620细胞的裸鼠分为3组,每组8只,在接种后第2周分别瘤内注射生理盐水(对照组)、HK错配链(HK组)和Tiam1封闭载体(Tiam1组).第16天处死各组裸鼠,取出移植瘤移重.结果 通过DNA测序证实封闭载体构建成功.SW620细胞经Tiam1封闭载体转染后,细胞核可见凋亡小体.对照组平均移植瘤重量(2.84±0.27)g,HK组(2.89±0.18)g,Tiam1组(1.47±0.20)g,Tiam1组与其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而HK组和对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 所构建的Tiam1封闭载体能有效抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长.     

远端缺血预适应对肠缺血再灌注损伤防护作用的研究

目的 通过建立大鼠远端缺血预适应(RIPC)和肠缺血再灌注损伤模型,探讨RIPC对肠缺血再灌注损伤是否有防护作用.方法 雄性SD大鼠分为肠缺血再灌注(L/R)组(8只)、RIPC组(8只)和假手术组(Sham组,5只).用充气套囊加压阻断右侧上下肢体血供5 min后放气恢复血供5 min的方法重复3次首先建立大鼠肢体缺血预适应模型.后经正中剖腹,阻断腹腔干动脉和肠系膜上动脉30 min后,恢复血运2h制作鼠肠缺血再灌注模型.取肠组织分别作苏木素-伊红染色、聚腺苷二磷酸核糖(PAR)免疫组织化学染色、原位凋亡检测、髓过氧化酶( MPO)活性和丙二醛检测.结果 肠组织损伤评分、PAR阳性表达率、MPO活性和丙二醛水平,I/R组均较Sham组明显增高[(4.65±0.82)分比(0.56±0.48)分,(23.8±2.8)％比(5.1±0.8)％;(330±15)U/g比(24±5)U/g;(248±15)μmol/( L· mg)比(36±7)μmol/(L·mg),均P＜0.05];RIPC组上述指标[(2.92±0.74),(16.8±3.1)％,(218±17) U/g,(121±13) μmol/(L· mg)]均明显低于I/R组,但仍高于Sham组(P＜0.05).结论 RIPC可能会通过抑制肠炎症反应、脂质过氧化和降低PARP激活程度来减轻I/R后小肠组织损伤.     

社区居民骨科疾病相关知识的健康教育干预研究

目的 调查社区居民对于骨科疾病及其相关知识的了解程度,并采取相关的健康教育措施,从而提高社区居民的健康知识水平.方法 设计调查问卷对2个社区居民骨科疾病及其相关健康知识的认识情况进行调查,对社区居民进行有针对性的健康教育讲座并发放宣传教育材料的形式进行干预研究,之后对相同问题再次调研,观察提高情况.干预前后分别发出问卷220份.结果 干预前后分别回收调查问卷208、212份.干预前后被访者的性别及文化程度差异均无统计学意义(P＞0.05).被调查者干预前平均得分(46.1 ±18.8)分,干预后平均得分(60.1±14.2)分,干预后得分明显高于干预前(P＜0.01).干预后大学本科及以上文化程度得分(68.6±9.0)分,大专(61.9±12.5)分,中学或中专(59.6±15.0)分,小学及以下(58.1±13.6)分,大专及以上文化程度人群得分高于中学及以下文化程度人群.结论 采用社区健康知识教育讲座及发放宣传教育材料的方法可以切实提高社区居民的健康知识水平,对于文化程度较高的人群提高更为明显.     

面部皮炎斑贴试验98例分析

目的:探讨面部皮炎接触性变应原的特点.方法:采用"百亿"斑贴试验变应原对98例面部皮炎患者进行皮肤斑贴试验检测.结果:98例患者总阳性率为58.16%.阳性率位居前3位的变应原依次为硫酸镍、白降汞、橡胶4.结论:面部皮炎可能与刺激、光照及Ⅰ型、Ⅳ型变态反应有关,斑贴试验有助于明确面部皮炎患者的接触性变应原,对预防具有重要意义.     

序贯机械通气治疗COPD呼吸衰竭的临床研究

目的研究序贯机械通气治疗COPD呼吸衰竭的临床应用前景。方法将慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者55例,给予抗感染和平喘等治疗;采用气管插管进行有创机械通气。待"肺感染控制窗"出现后随机分为两组,其中治疗组22例,对照组33例,治疗组拔除气管导管,改用无创正压通气;对照组继续有创机械通气,以(SIMV+PSV)方式分别减少到7～9次/min和5～8cmH2O水平时直至脱机。比较两者患者总机械通气时间、总住院时间及呼吸机相关性肺炎发生率。结果序贯治疗组与对照组的总机械通气时间[(11.33±2.62)dvs(13.91±4.52)d,P<0.01],总住院时间[(18.63±3.62)dvs(21.20±6.42)d,P<0.05],呼吸机相关性肺炎发生率[5.86%vs28%,P<0.01]不同,差异均有统计学意义。结论采用序贯机械通气治疗COPD呼吸衰竭较传统的有创通气方式更优越,能够有效缩短总通气时间和住院时间,降低呼吸机相关性肺炎发生率。     

结核病患者及家属疾病危害认知与自我防护现状的调查分析

目的了解初诊居家治疗的结核病患者及其家属的现有疾病危害认知水平和自我防护现状,为结防工作者制定宣传计划提供依据。方法 2009年1月3日-2010年3月31日采用自编问卷形式对在枣庄市王开传染病医院结防门诊确诊的结核病患者及其家属3100例回访调查。内容涉及结核病患者及其家属基本情况、结核病疾病知识知晓现状和结核病的知、信、行。结果结核病患者及家属疾病认知水平偏低。结论结防工作者须加强对农村居民、流动人口的结核病健康宣传频率和力度,控制传染源,更好地保护易感者。