分子生物学技术在植入前诊断中的应用

植入前诊断是产前诊断非常早的一种方法，目的是放弃携带严重遗传病的胚胎，将健康胚胎植入母体。两种主要的方法是聚合酶链反应（PCR）和荧光原位杂交（FISH）。PCR用于单基因病诊断，FISH用于染色体异常诊断。临床主要应用于存在遗传风险的患者如携带单基因病和染色体易位的患者。随着分子生物学技术的飞速发展，如比较基因组（CGH），全基因组扩增技术（WGA），引物延伸预扩增（PEP），间期核转换技术及DNA芯片技术（DNAchip）等PGD先进检测手段的应用，单细胞用于诊断单基因或多基因突变及染色体疾病，为期不远。     

急性白血病病人GST-π、MRP1表达及其相关性的临床研究

目的：检测急性白血病（acute leukemia，AL）病人谷胱甘肽硫转移酶-π（glutathione—S—transferltse-π，GST-π）、多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance relevant protein 1，MRP1）的表达，探讨二者与AL多药耐药（multi—drug resistance，MDR）的关系及临床意义，明确二者在AL中的表达有无相关性以及两者表达与AL病人临床特征的关系。方法：采用免疫组织化学S—P法检测80例AL病人及30例正常人外周血单个核细胞GST-π、MPP1表达。运用SPSS10．0统计软件，采用X^2检验、四格表精确概率法、t检验、直线相关分析方法统计结果。结果：GST-π、MRP1在难治组的阳性率均高于初治组和完全缓解组；在初治组的阳性率均高于对照组。GST-π、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。GST-π、MRP1表达阳性组完全缓解率低于阴性组。GST-π、MRP1的表达与AL难治组病人年龄、性别、骨髓幼稚细胞比例及外周血白细胞计数无关。且两者在急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）组、急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphoblastic leukemia，ANLL）组表达无差别。结论：GST-π和MRP1的高表达与AL临床耐药有关；GST-π和MRP1在难治组中的表达密切相关；GST-π和MRP1表达阳性的AL病人的完全缓解率明显降低，两者可能是影响AL疗效的重要指标；GST-π和MRP1在难治组表达阳性率与年龄、性别、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例可能无关，且在ALL组与ANLL组中差别无统计学意义。     

氟伐他汀对心衰大鼠基质金属蛋白酶、转化生长因子及左室重构的影响

目的:了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及转化生长因子-β1(TGF-β1)在心肌梗死大鼠左室重构及心衰发展过程中的改变,以及氟伐他汀的干预作用,探讨心梗后心衰的发生机制。方法:选用雄性SD大鼠67只随机分为假手术组、心梗组和心梗他汀组,经冠状动脉前降支结扎术建立心肌梗死后心衰模型,手术24 h后心梗他汀组大鼠管饲氟伐他汀4 mg·kg-1·d-1,假手术组和心梗组大鼠管饲安慰剂。术后3 d、4周、8周检测大鼠非梗死区心肌MMP-2的含量(Western-blot法)、胶原、TGF-β1的改变(免疫组化法),压力传感器记录左室血流动力学改变。结果:术后各时点非梗死区心肌的MMP-2含量,心梗组及心梗他汀组显著高于假手术组(P<0.05),而心梗他汀组显著低于心梗组(P<0.05);术后各组各时点非梗死区心肌TGF-β1表达的变化趋势与MMP-2相同;与心梗组比较,心梗他汀组术后4周和8周的心功能明显改善,胶原容积分数(CVF)及Ⅰ／Ⅲ型胶原比值(Ratio of type Ⅰ／Ⅲ)降低(P<0.05)。结论:氟伐他汀通过减少非梗死区心肌MMP-2和TGF-β1的含量,而减轻心梗后非梗死区心肌胶原网络的破坏及反应性胶原的过度沉积,从而预防和逆转心室重构,改善心脏功能。     

金牛草药材质量标准研究

提高金牛草药材质量标准,为评价和控制金牛草药材质量提供依据。修订金牛草的性状及显微鉴别特征,参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对金牛草药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物进行测定。以粉背蕨素A和对照药材为对照,采用薄层色谱法进行定性鉴别;制备粉背蕨素A标准品,建立金牛草指标成分粉背蕨素A的含量测定方法。建立的性状、显微、薄层鉴别方法易于操作,具有较强的专属性;样品测定结果:水分8.8%~10.9%,总灰分7.6%~11.4%,酸不溶性灰分2.5%~4.2%,醇溶性浸出物9.3%~10.2%,粉背蕨素A质量分数0.56%~0.71%。通过完善金牛草的药材质量标准,能够更有效地评价其内在质量,保证用药品质。     

易感小鼠花生过敏诱导的中毒反应

花生过敏是造成人ＩｇＥ诱导中毒反应的主要原因之一,本试验组制作Ｃ３Ｈ小鼠动物模型,并给其口服花生蛋白（ＰＮ）及霍乱毒素（ＣＴｘ）,然后在腹腔内注射ＰＮ（溶于明矾中的ＰＮ）,使这种鼠即刻发生高度敏感症状（包括致死性的中毒反应）及花生特异性ＩｇＥ水平增高,血浆息斯地明水平、脱颗粒肥大细胞及血管渗漏水平也大幅度升高。对照组小鼠未给药或仅仅接受了ＣＴｘ,则未显示出花生特异性ＩｇＥ水平升高及中毒症状。本文又分析了几种与中毒反应有关的参数。结果证明,小鼠花生过敏中毒反应与人花生过敏类似,同时小鼠花生过敏中毒反应模型,为研究中毒性免疫病理发生机制及研究更有效的治疗方案提供了一个有用的工具。     

青海高原地区胃癌患者MICA基因在mRNA及其蛋白水平表达

目的:研究青海高原地区胃癌组织中MICA基因在mRNA水平与其蛋白表达及相关关系.方法:采用RT-PCR技术检测41例高原地区胃癌组织和相应的癌旁粘膜组织中MICA mRNA表达,采用免疫组化SP法检测MICA蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达,Spearman相关关系检验分析它们之间的相关性.结果:青海高原地区胃癌组织MICA mRNA的表达水平高于癌旁组织(P＜0.05).胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁组织中为(26.9%,11/41)与胃癌组织阳性率为87.8%(36/41),高分化组(75.0%,6/8),中分化组(83.3%,10/12),低分化组(95.2%,20/21),之间差异有统计学意义(P＜0.05),而与肿瘤发生的性别、年龄、淋巴结转移无关(P＞0.05).Spearman相关分析显示,MICA蛋白表达水平与mRNA的表达水平呈正相关(P＜0.01).结论:MICA的过度表达在青海高原地区胃癌的发生发展过程中起着重要作用,胃癌组织中MICA mRNA以及蛋白水平的升高之间存在密切正相关.     

Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞的转染表达及增殖效应

目的:观察Ad-HGF对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)的转染表达及增殖效应.方法:以不同转染强度(50,100,200 MOI)Ad-GFP转染原代培养大鼠ATⅡ细胞,感染后48 h用流式细胞仪检测转染效率.并以最佳感染强度Ad-HGF转染ATⅡ细胞,ELISA方法检测转染后48, 72 h上清中HGF的表达水平.用MTT法检测表达产物对肺泡上皮细胞的效应.结果:感染强度为100 MOI时,对ATⅡ细胞的转染效率已达89.61%,以100 MOI的Ad-HGF转染6×105细胞后48, 72 h上清中HGF的表达分别为(249.4±1.8) ng和(168.0±26.1)ng,且表达产物对ATⅡ细胞有明显的促增殖作用.结论:Ad-HGF可有效转染ATⅡ细胞并在细胞中表达,表达产物对该细胞有明显的促增殖作用.     

携带HGF基因的减毒沙门氏菌对大鼠胃溃疡愈合及CD34表达的影响

目的:通过对乙酸性胃溃疡大鼠口服携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒鼠伤寒沙门氏菌(St)后检测胃溃疡愈合情况及局部和CD34蛋白表达的研究,探讨基因药物St-HGF对乙酸性大鼠胃溃疡的治疗作用.方法:建立乙酸性胃溃疡大鼠77只,并随机选出5只,给予携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的st后观察GFP在大鼠胃壁中的分布,剩余大鼠随机分为3组(n=24):St-HGF治疗组,St治疗组,NaHCO3对照组;增菌后各组动物于造模第2日起灌胃相应药物,隔日一次,分别于给药后7,14,21 d取胃溃疡组织行HE病理组织学观察,免疫组化法检测CD34蛋白的表达.结果:给药后7 d光镜下溃疡部位黏膜消失,局部有大量坏死组织,各组胃黏膜上皮爬行不明显;给药后14,21 d,St-HGF组黏膜上皮增生较另两组快(P<0.01);给药后7,14,21 d,CD34蛋白在St-HGF组的表达高于另两组(P<0.05),组间有统计学差异.结论:St-HGF可促进实验性大鼠胃溃疡黏膜上皮修复和溃疡面血管增生,加快溃疡愈合.     

Evaluation of multifunctional synthetic tetralone derivatives for treatment of Alzheimer's disease

Neurodegeneration, a complex disease state, comprises several pathways that contribute to cell death. Conventional approach of targeting only one of these pathways has not been proven to be entirely successful and has demanded a hypothetical change as to how researchers design and develop new drugs. In this study, effects of a series of α, β‐unsaturated carbonyl‐based tetralone derivatives against Alzheimer's disease (AD) were investigated. Moreover, their activity toward amyloid β‐induced cytotoxicity was also studied. Six compounds including 3f , 3o , 3u , 3ae , 3af , and 3ag were discovered to be most protective against Aβ‐induced neuronal cell death in PC12 cells. The findings of in vitro experiment revealed that most of these compounds exhibited potent inhibitory activity against MAO‐B, AChE, and self‐induced Aβ_1–42 aggregation. The compound 3f exhibited best AChE (IC₅₀ = 0.045 ± 0.02 μm ) inhibitory potential in addition to potent inhibition of MAO‐B (IC₅₀ = 0.88 ± 0.12 μm ). Furthermore, compound 3f disassembled the Aβ fibrils produced by self‐induced Aβ aggregation by 78.2 ± 4.8%. Collectively, these findings suggest that some compounds from this series have potential to be promising multifunctional agents for AD treatment.