含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段.方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP).将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PCR和R.luc检测技术对复制子进行鉴定.结果:所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子,均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白.DEN-R.luc2A-RP可持续表达外源R.luc报告基因21 d,在转染后24~96 h R.luc荧光信号呈线性增强.在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化.结论:获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子,为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础.     

登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用.方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6).将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测.结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调.结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用.     

钙转运蛋白基因siRNA表达载体的构建及鉴定

目的：构建针对钙转运蛋白（CaT1）特异性干扰RNA（siRNA）及其表达载体，并检测其对CaT1基因的干扰作用。方法：设计CaT1靶向的发夹状siRNA，合成两条互补的寡核苷酸链，退火后连接人pSilencer3．1-H1载体，转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染人类胃癌细胞BGC，通过RT-PCR检测CaT1基因表达水平的变化。结果：酶切鉴定与DNA测序分析证明CaT1基因的siRNA载体构建正确，RT-PCR结果表明CaT1基因的表达水平明显降低。结论：成功地构建了针对CaT1基因的siRNA载体，转染细胞后可抑制CaT1基因表达。     

IGT和糖尿病视网膜病变关系的研究进展

糖耐量低减(i mpaired glucose tolerance,IGT)是介于正常和糖尿病之间的中间状态,其所致的糖尿病视网膜病变越来越受到人们的关注。本文主要叙述了IGT患者糖尿病视网膜病变的发病率,从高血糖、胰岛素抵抗和高胰岛素血症、游离脂肪酸和脂肪细胞因子释放增多这几个方面阐述了IGT时糖尿病视网膜病变的发病机理,强调对IGT患者进行早期干预的重要性。     

药用微乳处方设计概述

综述了影响药用微乳处方设计的各种因素，介绍了药用微乳的形成机制、组成成分、制备方法、微乳结构的检测技术及计算机辅助微乳处方设计的探索。     

Clinical benefit of COX-2 inhibitors in the adjuvant chemotherapy of advanced non-small cell lung cancer: A systematic review and meta-analysis

BACKGROUNDLung cancer is a major cause of death among patients, and non-small cell lung cancer (NSCLC) accounts for more than 80% of all lung cancers in many countries.AIMTo evaluate the clinical benefit (CB) of COX-2 inhibitors in patients with advanced NSCLC using systematic review.METHODSWe searched the six electronic databases up until December 9, 2019 for studies that examined the efficacy and safety of the addition of COX-2 inhibitors to chemotherapy for NSCLC. Overall survival (OS), progression free survival (PFS), 1-year survival rate (SR), overall response rate (ORR), CB, complete response (CR), partial response (PR), stable disease (SD), and toxicities were measured with more than one outcome as their endpoints. Fixed and random effects models were used to calculate risk estimates in a meta-analysis. Potential publication bias was calculated using Egger’s linear regression test. Data analysis was performed using R software.RESULTSThe COX-2 inhibitors combined with chemotherapy were not found to be more effective than chemotherapy alone in OS, progression free survival, 1-year SR, CB, CR, and SD. However, there was a difference in overall response rate for patients with advanced NSCLC. In a subgroup analysis, significantly increased ORR results were found for celecoxib, rofecoxib, first-line treatment, and PR. For adverse events, the increase in COX-2 inhibitor was positively correlated with the increase in grade 3 and 4 toxicity of leukopenia, thrombocytopenia, and cardiovascular events.CONCLUSIONCOX-2 inhibitor combined with chemotherapy increased the total effective rate of advanced NSCLC with the possible increased risk of blood toxicity and cardiovascular events and had no effect on survival index.     

微嵌合体的研究进展

微嵌合体是指具有遗传差异的两个个体之间,其中某个体的微量细胞或DNA成分在另一个体内存在的状态.微嵌合体的发现及研究的历史表明,尽管研究微嵌合体的关注点已经囊括了形成、来源、分布、类型、与疾病的关系等多个方面,但研究对象均为自然获得的微嵌合体.众所周知,在某些临床治疗手段中,比如移植和输血的过程中也会产生微嵌合体,但相比于自然获得微嵌合体,对这些治疗中形成的医源性微嵌合体的研究显然不够详细.微移植是刚刚兴起的治疗白血病新方法,其效果明显,但机制尚不清楚,是否与微嵌合体相关仍需进一步研究.本文通过总结文献资料对微嵌合体的研究历史、发展前景略作综述,为有关微嵌合体在微移植中作用机制的研究提供参考思路.     

高血脂对脉络膜VEGF表达的影响

目的：研究高血脂动物模型脉络膜组织学改变及VEGF的表达,初步探讨高血脂在年龄相关性黄斑变性（AMD）患者脉络膜新生血管（CNV）形成中的作用及其机制。方法：新西兰大白兔36只随机分为正常对照组与实验组,分别喂养普通饲料与高脂饲料。分别于1,2,3mo后应用免疫组织化学法和RT-PCR法对脉络膜VEGF表达进行检测。结果：免疫组织化学结果显示对照组视网膜和脉络膜各层VEGF弱表达;实验组1mo时脉络膜组织中VEGF表达与对照组差异无统计学意义（t=0.442,P=0.668）;2mo时脉络膜组织中VEGF表达较对照组明显增强（t=2.330,P=0.042）;3mo组脉络膜组织中VEGF表达较对照组明显增强（t=3.542,P=0.005）。RT-PCR示对照组脉络膜组织中可以检测到微弱的VEGFmRNA表达;实验组1mo时脉络膜组织中VEGFmRNA的表达与对照组差异无统计学意义（t=1.703,P=0.119）;2mo组脉络膜组织中VEGFmRNA表达较对照组明显增强（t=14.138,P〈0.001）;3mo组脉络膜组织中VEGFmRNA表达较对照组明显增强（t=15.240,P〈0.01）。结论：高血脂通过直接损害脉络膜血管和增强VEGF的表达可能诱导CNV的发生。     

玻璃体切割术后无晶状体眼行前房灌注下Ⅱ期IOL缝线固定术

目的：探讨前房灌注下玻璃体切割术后无晶状体眼Ⅱ期人工晶状体(IOL)缝线固定术的方法及疗效。

方法：对30例30眼玻璃体切割术后6～12mo无晶状体眼的患者行前房灌注下后房人工晶状体缝线固定术,术后随访1.5a。

结果：患者30例30眼在前房灌注下,成功实施了后房缝线固定IOL植入术,术中出现睫状体出血1例,术后玻璃体出血1例,脉络膜脱离2例。所有患者术后视力均得到提高,视力≥0.3者24例(80%),其中视力≥0.5者8例(27%); 视力<0.3者6例(20%),其中视力<0.1者2例(7%)。

结论：前房灌注下行此类手术,术中眼压控制稳定,手术效果可靠,术后并发症少,是治疗玻璃体切割术后无晶状体眼、恢复视功能的可靠手术方法。