Crouzon综合征基因突变检测

目的 研究1个Crouzon综合征家系及1例散发的Crouzon综合征患者的成纤维生长因子受体2(fibroblast growth factors receptor 2,FGFR2)基因突变情况.方法 在1个Crouzon综合征家系的10名成员,和另一例散发者的外周血提取基因组DNA,PCR扩增FGFR2基因的第8和10外显子(部分家族成员仅扩增第8外显子),产物纯化后直接进行DNA测序检测突变.结果 家系中3名成员及另1例散发者FGFR2基因第8外显子的833位核苷酸发生G→T的转换突变,该突变为错义突变,使该位点所编码的氨基酸由半胱氨酸变为苯丙氨酸(C278F).该突变为杂合子突变.结论 FGFR2基因突变是Crouzon综合征致病原因.     

人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达

目的 构建HPV 18 L1－E6，L1－E7嵌合基因的表达载体，并在CHO细胞中表达。方法 克隆HPV18 L1－E6和L1－E7基因，插入中介载体pGEMT-Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法，突变L1－E6，L1－E7基因序列中与转化作用相关的位点，分别与L1基因连接后插入真核表达载体pVAX1，构建真核表达质粒pVAX-1L1 E6Mxx,L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法，转染CHO细胞，以抗HPV－18L1，抗E6和抗E7特异性单克隆抗体（mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果 ELISA检测显示，转染各种pVAX1-LIE6Mxx-L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P－N值均＞2．1；免疫细胞化学检测，在胞浆，胞核可见棕黄色颗粒。结论 我建的pVAX1-L1E6Mxx-E7Mxx融合蛋白质表达质粒，可在转当细胞内表达相应的L1－E6Mxx和L1－E7Mxx蛋白，为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。     

妊娠17～37周胎儿可溶性白介素2受体和NK细胞含量的变化

目的：探讨妊娠17～37周正常和宫内感染时胎儿外周血可溶性白介素2受体（Soluble interleuldn-2 receptor，sIL-2R）和自然杀伤细胞（Natural killer，NK）含量的变化。方法：超声引导下行脐带穿刺术，收集129例胎儿外周血，包括97例正常对照组胎儿血，32例宫内感染组（单纯疱疹病毒感染、弓形虫感染、风疹病毒感染）胎儿血，采用双色免疫荧光标记流式细胞仪技术测定胎JLPF周血NK细胞百分率，双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定胎JLPF周血中sIL-2R的含量，分析生理状态下胎儿外周血NK细胞、sIL-2R的状况和宫内感染时NK细胞和sIL-2R含量的变化。结果：妊娠17—37周胎儿外周血NK细胞、sIL-2R含量不随孕周改变，r（NK）=-0．03，P〉0．05；r（sIL-2R）=0．167，P〉0．05，宫内感染时NK细胞含量减少，sIL-2R含量增多，与正常对照组相比差异有显著意义；t（NK）=4．29，P〈0．01；t（sIL-2R）=-5．833，P〈0．01。结论：妊娠17—37周胎儿外周血有一定量的NK细胞和sIL-2R存在，但机体免疫功能仍不完善，宫内感染时机体容易出现免疫抑制状态。     

应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位

目的 筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法 以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果 经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论 用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

PI3-K/Akt信号通路对阿尔茨海默病神经元凋亡的调节作用

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K/Akt)途径是细胞内重要的促细胞存活通路之一,PI3-K被细胞外信号活化后,激活下游蛋白激酶Akt。在阿尔茨海默病(AD)的发病过程中,凋亡相关基因Bad、GSK-3、转录因子家族、caspases家族等参与了神经元的凋亡,导致神经元的大量丢失。而活化的Akt通过磷酸化Bad、GSK-3、转录因子家族、IB、caspases等使促凋亡基因失活,从而起到抑制神经元凋亡及促进神经元存活的作用,进而减少AD神经元的大量丢失,改善AD的病理变化。     

胰岛素样生长因子结合蛋白与胰岛素抵抗的关系

胰岛素样生长因子系统是一个由配体、受体、结合蛋白及蛋白酶构成的复杂网络,会受到诸多因子的调节.该系统中的胰岛素样生长因子结合蛋白在不同细胞的增殖和分化中起着重要的作用.临床及体内外研究表明胰岛素抵抗形成过程中,IGFBP出现异常表达.IGFBP通过不同机制抑制或促进胰岛素抵抗的形成.     

槲皮素对柔红霉素所致心肌损伤的保护作用

目的观察槲皮素(QUE)对柔红霉素(DNR)所致小鼠心肌损伤的保护作用.方法 52只小鼠分5个实验组,1组作为空白对照组.1组用DNR诱导小鼠心肌损伤;1组用QUE灌胃给药后再用DNR诱导心肌损伤作为保护组;1组只给QUE灌胃作为保护对照组;1组给予DMSO灌胃作为溶剂对照组.观察各组小鼠的血清心肌酶谱、心肌和血清中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.观察心脏大体改变,并制备病理切片,HE染色后,光镜下观察心肌形态学变化.结果 DNR组小鼠的血清心肌酶谱显著升高,血清和心肌中MDA含量显著增高,SOD活性降低,引起心脏充血、水肿,心肌颗粒变性,灶性出血、坏死.而QUE保护组的心肌酶升高程度明显降低、血清和心肌组织中MDA含量无明显增加,SOD活性不降低,心肌无明显出血灶及颗粒变性.结论槲皮素对柔红霉素诱导的小鼠心肌损伤有保护作用.其机理可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关.     

嗜酸粒细胞性支气管炎气道炎症病理特征的探讨

目的： 观察嗜酸粒细胞性支气管炎（EB）气道粘膜炎症的病理特征，并与咳嗽变异型哮喘（CVA）进行比较。 方法： 对11例EB患者行纤支镜支气管粘膜活检，并以10例正常对照、10例CVA和14例典型支气管哮喘的支气管粘膜标本作对照。光镜下测量各组气道粘膜上皮的基底膜厚度，并通过免疫组化和特殊染色技术，计算EB和CVA组气道粘膜固有层中炎症细胞（嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞）的浸润密度。 结果： EB组支气管粘膜基底膜厚度［2.92 μm(2.10-6.50)μm］显著高于对照组［2.08 μm(1.62-3.40 μm)］, P<0.05，同时显著低于CVA组［5.64 μm (3.23-8.48 μm)］, P<0.05，而CVA组的基底膜厚度又显著低于典型哮喘组［9.08 μm (6.61-11.99 μm)］, P<0.01；EB组气道粘膜固有层可见肥大细胞和嗜酸粒细胞散在分布，浸润密度分别为［75 cells/mm2(35-112 cells/mm2)］和［7 cells/mm2(0-31 cells/mm2)］，显著低于CVA组［148 cells/mm2(34-200 cells/mm2)，114 cells/mm2(1-768 cells/mm2)］, P<0.05，淋巴细胞浸润密度无显著差异。 结论： EB是以嗜酸细胞浸润为特征，涉及多种炎症细胞的慢性气道炎症性疾病，但气道粘膜基底膜厚度显著低于CVA和典型哮喘，炎症细胞浸润程度低于CVA，均可能是EB缺乏气道高反应性的重要机制。     

滋养层侵袭力及其调控因素

滋养细胞的有限侵袭对于正常的妊娠至关重要,其侵入机制与肿瘤细胞的转移相似,但与肿瘤细胞不同的是滋养层细胞的侵袭受母体及自身的多种旁分泌和自分泌因子的严格网络级联调控[1,2],要成功地侵入,绒毛外滋养层必须执行大量功能:母体螺旋动脉改建;耐受低氧,增殖、凋亡、分化,黏附并消化细胞外基质,移动并和母体免疫系统相互作用。其中每一种功能都具有错综复杂的控制系统,因此,滋养层的侵入是一个对抗机制精细调控的平衡。