抗牛安氏隐孢子虫单克隆抗体的研制与初步鉴定

通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidiumandersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3~4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11)。5株单抗的染色体数目平均在96~98条之间,上清效价分别在1∶100和1∶12800之间,腹水效价分别在1∶12800和1∶204800之间。采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗。对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52·7kDa,轻链分子量约为24kDa。     

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究

目的：研究LAIR-1（CD305）及LAIR-2（CD306）推定配体在多种细胞系上的分布，为鉴定LAIR-1／LAIR-2推定配体提供了实验依据。方法：建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系。以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色，用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达，并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点。结果：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达，在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达。LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合，可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体（mAb）FMU-LAIR-2．2和FMU-LAIR-2．1阻断。结论：LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致，主要表达于WISH、C32、293T和ECV304细胞系。LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体。     

共表达HIV-1 gag-gp120与白细胞介素6重组鸡痘病毒的筛选

目的构建共表达中国株HIV1gaggp120与白细胞介素6(IL6)的重组鸡痘病毒(FPV)。方法分别将HIV1gaggp120基因和IL6基因插入到FPV表达质粒pUTAL复合启动子和单一启动子下游,构建重组FPV表达质粒pUTAGEIL6。利用脂质体法将重组质粒和FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,经BUdR加压筛选,重组病毒分别用SDSPAGE和WesternBolt进行鉴定,观察病毒样粒子的形成和重组病毒在哺乳动物细胞中的表达,并分析其免疫原性。结果阳性重组病毒基因组点膜处有显色斑点,WesternBolt结果显示重组病毒表达了gaggp120嵌合蛋白和IL6,在病毒感染细胞中有反转录病毒样粒子形成,且重组病毒可在哺乳动物细胞中表达目的蛋白。小鼠免疫指标检测表明该重组病毒具有很好的免疫原性。结论成功构建了共表达中国株HIV1gaggp120与IL6的重组FPV,为HIV-1基因工程活载体疫苗和巨分子颗粒化疫苗的制备奠定了基础。     

小鼠BCMA基因启动子活性研究

目的:探索B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)基因5′上游序列的启动子活性, 为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据.方法:构建由BCMA基因5′上游-820～ 145、 -607～ 145、 -359～ 145、 -157～ 145、 -93～ 145 5个片段驱动的荧光素酶报告载体pGL3-B820、 pGL3-B607、 pGL3-B359、 pGL3-B157、 pGL3-B93, 通过转染J558L、 293T、 HeLa细胞检测荧光素酶的表达, 观察荧光素酶相对活性.结果:5种5′删除体的转录激活性由大到小为pGL3-B157>pGL3-B607>pGL3-B359>pGL3-B93>pGL3-B820.pGL3-B157在3种细胞中的转录激活能力为J558L>HeLa>293T, 且在J558L中的转录激活能力明显强于Hela和293T细胞.结论:BCMA基因5′上游序列"-820 bp～ 145 bp"具有启动子活性, 核心启动子可能位于-93～ 145区域中.     

藤黄微球菌Rpf结构域多肽诱导小鼠免疫应答的实验研究

目的:研究藤黄微球菌Rpf结构域多肽的免疫学特性.方法:用原核表达的藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫哌BALB/c小鼠3次,每次间隔2周.用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度.分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增值指数.ELISA方法检测淋巴淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10和IL-12产生水平.另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后,计数脾脏细菌负荷数.结果:藤黄微球菌Rpf结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶128 000,淋巴细胞增殖指数为(2.10±0.12),明显高于生理盐水对照组(0.90±0.21).ELISA方法检测Rpf结构域多肽免疫组IFN-γ,IL-10和IL-12水平为(1 126±36) ng/L,(368±13)ng/L和(289±14)ng/L,明显高于生理盐水对照组(P<0.01).与生理盐水免疫组(细菌负荷6.64±0.13)相比较,Rpf结构域多肽免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有明显作用(细菌负荷为5.03±0.11,P<0.05).结论:藤黄微球菌Rpf结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分.     

血清C-反应蛋白在尿毒症血液透析病人中的意义

目的 探讨血清C-反应蛋白(CRP)在尿毒症血液透析病人中的意义.方法 选取58例规律血液透析的尿毒症病人,测定其CRP、血肌酐(Cr)、血浆白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb)及重组人促红细胞生成素(EPO)用量,将上述结果与50例健康人比较.结果 尿毒症血液透析病人血清CRP高于正常对照组(P=0.0364),且其变化与病人血肌酐值以及EPO用量呈正相关(P =0.0082;P =0.0072),与AIb、Hb值呈负相关(P =0.0383;P =0.0084).结论 尿毒症血液透析病人普遍存在慢性低度炎症,此炎症反应是尿毒症血液透析病人贫血、营养不良及EPO抵抗的原因之一.     

广州市白云区2001年～2010年围产儿死亡分析及干预措施

目的对广州市白云区围产儿死亡相关因素进行分析和总结,探讨围产儿死亡率的变化及其影响因素,为降低围产儿死亡率制定相关的干预措施提供科学依据。方法回顾性分析广州市白云区2001年～2010年共10年间围产儿死亡评审资料。结果共有1653例围产儿死亡,平均死亡率为7.98‰,其中户籍人口为5.4‰,流动人口为8.8%（χ2=57.432,P〈0.001）;围产儿死亡率呈逐年下降趋势。影响围产儿死亡的因素有：覆盖全民的医疗保障系统不全面、产、儿科诊疗知识技能和医疗系统管理存在薄弱环节、孕期保健意识薄弱,围产保健管理有待加强。结论通过加强政府投入,建立健全孕产妇三级网络保健系统,特别加强对农村地区和流动人口的孕产妇管理;提高医疗机构产、儿科诊疗技能水平;提高产前诊断技术,减少出生缺陷;加强流动人口管理等措施,有效降低围产儿死亡率。     

一氧化氮合成酶在培养海马神经细胞上的分布及其激活对细胞兴奋性的影响

目的：观察一氧化氮合成酶（NOS）在培养海马神经细胞上的分布情况和酶激活时对细胞兴奋性的影响。方法：NOS的分布情况采用免疫荧光标记方法，细胞兴奋性的变化采用膜片钳全细胞的模式来记录膜电位的变化。结果：发现两种结构型NOS包括nNOS和eNOS均分布在神经元上。另外，eNOS还分布在胶质细胞上。当给予NOS的底物L-精氨酸时，海马神经元的膜电位出现去极化，并产生动作电位。结论：以上结果显示NOS广泛分布在海马神经细胞中，当其激活时对海马神经元有兴奋作用。     

人性的哲学修订量表用于中国大学生的信度效度研究

目的：探讨人性的哲学修订量表的信度和效度。方法：用人性的哲学修订量表调查驻济四所高校的1155名本科1-4年级大学生，评定该量表的内部一致性、重测信度、结构效度和效标效度。结果：人性的哲学修订量表具有较好的信度和效度，量表总分及两个因子的Cronbaeh’s α理系数均达0．7以上，验证性因素分析表明测量数据与量表结构拟合良好。结论：人性的哲学修订量表可用于评定我国大学生人际信任度。     

高强度聚焦超声热疗技术的发展和应用

高强度聚焦超声热疗技术以其微创、精确度高、副作用小且并发症少而被应用于临床治疗。目前,该技术主要用于前列腺癌、肝癌、原发性恶性骨肉瘤及乳腺癌等疾病的治疗。主要论述高强度聚焦超声热疗的现状、临床应用及进展。