海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊的毒性试验研究

为了考察海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊的毒性特征,我们利用MTT比色法和小鼠尾静脉注射法,分别考察了该微胶囊的细胞毒性和急性全身毒性。结果表明：微胶囊浓度≤1.0mg/mL时,材料对L929细胞生长无明显抑制作用;微胶囊浸提液即使在高浸提比（10.0mg/mL）下,浸提产物也无细胞毒性作用。急性全身毒性试验结果显示：微胶囊浸提液不引起急性全身毒性反应,表明微胶囊浸提液无有毒的沥滤物和降解产物产生。说明海藻酸钙/聚组氨酸微胶囊无明显毒性。     

细菌对噬菌体感染的抵抗

噬菌体对其宿主菌具有特异性感染力,反之,宿主菌对噬菌体的感染具有抵抗现象.根据噬菌体侵入宿主的不同阶段,可以将宿主菌对噬菌体的天然抵抗机制分为4个主要的类别吸附抑制,流产感染,限制-修饰系统和穿入阻滞.此外,还有源于噬菌体的抗性作用以及通过人工插入突变获得的广谱噬菌体抗性菌株等.     

借助移相法采用多部CCD数码相机提高帧率的技术

对于科学研究工作来说，时间分辨率和空间分辨率都是十分重要的，在设计相应的图像处理系统时必须两者兼顾。对于生命科学及工业等领域而言，希望图像处理系统不仅有较高的时间分辨率，还要有较高的空间分辨率。本文提出一种利用多部CCD数码相机、采用移相法获取高分辨牢和高摄录帧率的技术，此技术可应用于普通CCD数码相机组成的复合摄录系统。     

组织工程血管基质的制备与改性

目的：完全脱除猪胸主动脉细胞，对脱细胞血管基质进行改性，增强基质的力学强度，制备组织工程血管支架材料。方法：取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉20根，随机分成4组，分别采用胰蛋白酶、TritonX-100及十二烷基硫酸钠（SDS）作为脱细胞试剂对猪胸主动脉进行脱细胞处理，并对脱细胞后的血管基质进行改性，采用HE染色、弹力纤维染色、力学性能测试，以评价脱细胞效果以及材料的力学性能。结果：采用1％TritonX-100单独作用84h既能完全脱除细胞，同时又可完整保留血管基质的三维结构，对胶原纤维、弹力纤维的损伤小，是一种较理想的脱细胞方法。对脱细胞后的基质进行冷冻干燥及真空热交联处理，能有效提高材料的机械强度，冷冻干燥24h后真空120℃下热交联处理12h所获得的材料的机械强度最好，断裂强度可达到1．70MPa。结论：以脱细胞血管基质经冷冻干燥和真空热交联处理后，可以作为血管组织工程的支架材料。     

Fas cDNA克隆、表达及重组蛋白纯化的研究

目的:获得高质量及充足的Fas重组蛋白。方法:采用PCR构建表达重组质粒,亲和层析纯化Fas重组蛋白,ELISA检测其免疫学功能。结果:①PCR扩增获得目的片段约 470 bp。②Sanger双脱氧链终止法测序表明,该 DNA序列仅 174位由A→G突变,属于同义突变,与已知的Fas膜外区氨基酸完全一致。③重组质粒经IPTG诱导有一蛋白得以表达,其目的融合蛋白占细菌总蛋白的17. 4%,分子量约为 34．3 kD。④经 Factor Xa切割 Fas融合蛋白,纯化获得 Fas重组蛋白,Western印迹出现特异性Fas蛋白带,分子量为21．3kD,与预测结果相吻合。⑤ELISA检测 Fas重组蛋白,具有抗体的免疫学活性。结论:成功地表达并纯化了Fas重组蛋白,解决了Fas不易获得的难题,为研究Fas提供了良好的实验材料。     

Rp-cAMP与缺氧神经元Bcl-2表达和细胞凋亡关系的研究

目的探讨培养神经元缺氧后蛋白激酶A(PKA)活性变化及其与神经元缺氧凋亡的关系。方法建立体外培养W istar大鼠胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用不同浓度的PKA抑制剂(Rp-cAMP),在不同的缺氧时相点观察神经元细胞膜和细胞质中PKA的活性、Bc l-2和TUNEL表达的规律。结果随着缺氧时间的延长,培养神经元细胞膜PKA的活性显著增加,Bc l-2表达降低,TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度显著升高。而应用Rp-cAMP后细胞凋亡情况显著减轻。结论PKA和Bc l-2均参与了缺氧神经元凋亡;PKA抑制剂Rp-cAMP可减轻缺氧神经元凋亡,且该作用与Bc l-2表达降低有关;PKA的激活在缺氧神经元凋亡中起促发作用。     

IFN-γ在沙眼衣原体呼吸道感染中免疫防御机制的探讨

目的:检测与IFN-γ作用相关的酶吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(ox)gp91在沙眼衣原体呼吸道感染中的表达及与机体防御的关系,探讨衣原体感染中IFN-γ免疫防御作用的机制.方法:用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染C57BL/6(H-2b)小鼠,用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色HeLa 229细胞,检测衣原体在肺组织的生长;用RT-PCR检测衣原体感染后第7及14天小鼠肺组织IFN-γ、IDO、iNOS和gp91NADPH ox mRNA表达.结果:MoPn呼吸道感染后小鼠肺组织匀浆衣原体活性测定,于感染后第2天,HeLa 229细胞内可见有衣原体包涵体生长,IFU值增高,于感染后第7天IFU达最高水平,以后逐渐下降,至感染后21天基本恢复到基线水平.与未感染的对照组比较,Th1细胞因子IFN-γ于感染后第7天表达显著增高,感染后14天有所降低,但仍维持较高水平;同时衣原体感染可显著诱导与IFN-γ作用相关的三种酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox在小鼠肺组织的表达,感染后第7及14天,IDO,iNOS及gp91 NADPH ox的表达与对照组比较均有显著差异,其中IDO和gp91 NADPH ox于感染后第7天mRNA表达增高显著(P＜0.01),14天略有下降(P＜0.05).结论:衣原体呼吸道感染诱导Th1细胞因子IFN-γ mRNA高表达,参与宿主对衣原体的清除及机体免疫防御,此作用可能与其相应的酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox表达增高有关.     

TCRVβ7.1基因修饰T细胞对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的：观察TCPVβ7．1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性的影响。方法：脂质体包裹PdWA3.1vβ7.1后转染健康人PBMC，流式细胞仪检测PdWA3.1Vβ7.1基因表达，改良MIT法检测TCRVβ7．1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性。结果：TCRVβ7．1基因转染可显著增加正常人PBMC该基因表达，转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性有显著性差异。结论：用TCR基因修饰可明显提高正常人PBMC对乳腺癌细胞杀伤作用。     

抗SARS-CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库的构建

目的 :利用抗SARS冠状病毒IgG抗体阳性的SARS康复患者外周血淋巴细胞 ,构建人源Fab段抗体文库。方法 :制备外周血淋巴细胞总RNA ,逆转录成cDNA。以其为模板 ,利用针对家族特异性Ig基因的引物扩增重链Fd段和轻链基因 ,并重组到噬菌粒载体pComb3中 ,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL 1Blue,酶切鉴定抗体库的重组率 ,并测定噬菌体抗体库的库容量。结果 :构建了源于SARS康复患者血清中抗Fab段的抗体文库 ,轻链、重链Fd段基因的重组率分别为91%和 75 % ,库容量为 7.2 3× 10 7。结论 :成功地构建了抗SARS CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库     

恒河猴tPA基因的克隆、测序与真核表达

本试验采用高浓度乙二醇（EG-8）作为胚胎冷冻保护剂,以高浓度的半乳糖作为解冻稀释液,对MMTV-Wnt-1转基因小鼠的早期囊胚进行玻璃化冷冻保存。结果在EG-2中平衡4-6min和解冻时间为3-5min时获得了最佳冷冻效果。此条件下冷冻胚胎的总回收率为88.61%（109/123）;回收胚胎在体外发育率达88.99%（97/109）;孵化率达81.65%（89/109）;发育胚胎的移植出生率为38.36%（69/181）;冷漠胚胎移植出生后经PCR检测一半小鼠整合阳性。结果表明使用高浓度的乙二醇作为冷冻保护剂和以高浓度的半乳糖作为冻稀释液能有效地保存转基因小鼠胚胎。