胚胎干细胞源性肝干细胞在治疗性肝再生中的应用

目的： 应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞(ESC)源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性等情况，为ESC移植在难治性肝病治疗中的临床应用提供实验依据。方法： 倒千里光碱+70%肝部分切除建立BALB/c小鼠的治疗性肝再生模型。用荧光示踪剂CFDA SE 标记移植细胞，将经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞经门静脉移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内。然后荧光显微镜下观察，检测移植细胞体内分布、整合与肝细胞替代、体内生长分化等情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况。并通过观察其体内成瘤性对筛选出的ESC源性肝干细胞的安全性进行评估。结果： CFDA SE标记的ESC源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布。2周后，肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大，且可见类似肝索样结构排列。共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明，受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号（呈黄色荧光），血清白蛋白水平则无明显差异（P>0.05）。6周内未见畸胎瘤形成，而将未分化的ESC移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成。结论： 经淤胆血清“病理微环境”筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效整合入宿主肝板、在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能。其安全性较好，6周内未见畸胎瘤形成。     

Toll样受体2在人胎盘和胎膜组织中的表达

目的 检测正常胎盘和胎膜组织中Toll样受体2(TLR2)的表达.方法 收集5例足月剖宫分娩胎盘和胎膜样本,运用RT-PCR法检测胎盘和胎膜组织中TLR2 mRNA的表达,运用免疫组织化学和Westen blot印迹方法检测TLR2蛋白质在胎盘和胎膜组织中的表达.结果 RT-PCR显示在mRNA水平,胎盘和胎膜组织中均有TLR2表达;Westen blot印迹显示TLR2抗体在胎盘和胎膜组织中相对分子质量为50000左右的位置有一条明显的条带;免疫组化研究显示TLR2在胎盘的合体滋养细胞、胎膜的羊膜上皮细胞及平滑绒毛膜滋养细胞中有表达.结论 TLR2在人胎盘和胎膜组织中的表达,提示其在妊娠期先天性免疫中可能发挥重要作用.     

大学生寻求专业性心理帮助态度的预测因素研究

目的:探讨大学生寻求专业性心理帮助态度的预测因素。方法:选取700名不同年级、不同专业的大学生作样本,进行问卷调查。结果:以寻求专业性心理帮助态度为因变量,进行性别(2)×专业(2)的方差分析。结果发现,性别的主效应显著,F(1,615)=3.294,P=0.050。专业的主效应显著,F(1,615)=20.896,P=0.001。性别和专业的交互效应没达到显著性水平,F(1,615)=1.890,P=0.170。以寻求专业性心理帮助态度为因变量,回归分析结果得出R=0.636,R2=0.405,F=29.641,P=0.001,说明建立的回归方程是有意义的。结论:①对寻求专业性心理帮助态度有显著预测作用的变量按预测作用大小排序依次是:是否求助过、依赖的自我结构、自我隐藏度、专业、内控性和性别。②女生的寻求专业性心理帮助的态度比男生积极。③文体艺术类学生的寻求专业性心理帮助的态度比非文体艺术类学生积极。④自我结构是相互依赖的人寻求专业性心理帮助的态度积极。⑤自我隐藏度高的人寻求专业性心理帮助的态度消极。⑥内控者寻求专业性心理帮助的态度消极。     

转染反义磷脂酶A2寡核苷酸抑制LPS诱导Hela细胞分泌IL-1β和IL-6

目的：研究脑浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2,85—kD PLA2)在脂多糖诱导Hela细胞释放细胞因子IL-1β、IL-6的信号机制中的作用。方法：①利用脂质体将cPLA2的反义寡核苷酸转染入Hela细胞，通过聚合酶链式反应(RT—PCR)及Western杂交印迹分析检验胞浆中cPLA2人水平的变化；②用放免方法检测不同时间培养上清中的IL-1β、IL-6浓度。结果：①转染后cPLA2的蛋白表达明显减少，但mRNA水平未见显著改变；②Hela细胞释放IL-1β、IL-6随cPLA2人反义寡核苷酸浓度的增加而减少。结论：cPLA2人LPS刺激的Hela细胞释放炎性细胞因子IL-1β、IL-6的过程中可能发挥重要的信号传递作用。     

Sonic Hedgehog蛋白在帕金森病模型大鼠黑质中的表达

目的检测Sonic Hedgehog蛋白(Shh)在帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质的表达。方法将健康SD大鼠(雌雄不拘)随机分成3组:正常组大鼠不实施任何处理;应用脑立体定位技术,在大鼠右侧纹状体两针道内4点定位注射含0.2g/L抗坏血酸的生理盐水4μL(假手术组)或6-羟基多巴(6-OHDA)12μg/4μL(模型组)。术后1、2、4、6周以阿朴吗啡检测其异常旋转行为,左侧旋转的圈数大于7r/min者为合格的帕金森病模型大鼠。6周后在激光共聚焦显微镜下观察黑质Shh及酪氨酸羟化酶(TH)的免疫荧光双重染色结果,用Leica Confocal Software对Shh的荧光强度进行定量分析。结果Shh蛋白在正常对照组和假手术组大鼠中脑黑质中无明显表达,而在模型组表达显著。结论PD模型大鼠黑质中Shh蛋白的明显表达,提示Shh在PD模型大鼠中脑多巴胺能神经元(DA神经元)修复过程中可能发挥着一定的作用。     

细菌脂多糖诱导小鼠DC2.4细胞TLR7蛋白的表达

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4 TLR7蛋白表达的诱导作用.方法:用RPMIl640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达.结果:LPS刺激前后,细胞中均有TLR7 mRNA转录.LPS刺激前,细胞较小而透亮,树突较少,无,TLR7蛋白表达;LPS刺激后,细胞体积增大,树突增粗增多,刺激后12 h、24 h、48 h,TLR7蛋白均有表达,且在3个时间点的表达量基本一致.结论:LPS可诱导DC2.4中TLR7蛋白的表达.     

复苏早期应用氨茶碱对腺苷及血管活性因子的影响

目的： 观察心搏骤停大鼠复苏早期应用氨茶碱对复苏成功率、血浆去甲肾上腺素(NE)、腺苷、一氧化氮(NO)水平及心肌组织内皮素-1(ET-1)、腺苷水平的影响。方法: 选60只SD大鼠，随机分为3组：手术对照组、肾上腺素治疗组和肾上腺素+氨茶碱治疗组各20只。分别测定治疗组自主循环恢复30 min后及手术对照组的血浆NE、腺苷、NO及心肌组织ET-1、腺苷的水平。结果: 肾上腺素+氨茶碱治疗组自主循环恢复时间明显少于肾上腺素治疗组(P＜0.05)。肾上腺素+氨茶碱治疗组自主循环恢复率为75%，30 min存活率为70%，肾上腺素治疗组分别为60%和55% (P>0.05)。2个治疗组自主循环恢复大鼠的血浆腺苷、NE水平及心肌组织ET-1、腺苷水平均明显高于手术对照组(P<0.05)，肾上腺素治疗组血浆NO水平也显著高于手术对照组(P＜0.01)，肾上腺素+氨茶碱治疗组血浆NO及心肌组织ET-1水平低于肾上腺素治疗组(P＜0.05)。结论: 在复苏早期应用腺苷受体拮抗剂氨茶碱不仅可提高复苏成功率，并且降低血浆NO和心肌组织ET-1水平，有利于减轻复苏后综合征。     

NF-κB的活性和iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压中的变化

目的：探讨NF-κB的活性及iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压（HPH）发病过程中的变化。方法：复制低氧性肺动脉高压大鼠模型，用免疫组化、原位杂交、半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blot等方法进行检测。结果：iNOS mRNA在腺泡内肺动脉（IAPA）的表达，低氧28 d（H28d）组染色强于正常（N）组、低氧5 d（H5d）组和低氧14 d（H14d）组。半定量RT-PCR证实低氧肺组织iNOS mRNA含量在H28d组分别是N组、H5d组和H14d组的2.1倍、1.9倍和1.8倍。H28d组肺组织NF-κB的核染色增多，I-κBα的含量在N组、H5d组和H14d组分别是H28d组的2.7倍、2.8倍和2.5倍。结论：在HPH中NF-κB的激活可能与低氧肺血管构建及iNOS mRNA的表达有关。     

NG-硝基-L-精氨酸对大鼠内毒素性肺线粒体损伤的影响

目的： 观察非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对急性肺损伤大鼠肺线粒体功能的影响，并探讨其改善急性肺损伤的作用机制。方法: 将SD大鼠随机分为空白对照组、急性肺损伤组、L-NA治疗组，采用舌静脉注射脂多糖(LPS)复制大鼠急性肺损伤模型，于大鼠急性肺损伤3h后给L-NA治疗3h，断头放血处死大鼠，迅速取出肺脏，匀浆器混匀后，低温差速离心法提取肺线粒体，测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总一氧化氮合酶（T-NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的活性，以及线粒体肿胀度、膜流动性和线粒体一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量；电镜观察大鼠肺线粒体超微结构的改变及治疗药对此改变的影响。结果: 在大鼠内毒素性急性肺损伤后，肺脏组织中线粒体表现为肿胀、膜流动性降低，线粒体中的T-NOS和iNOS活性显著升高，线粒体NO生成明显增加，而cNOS活性无明显变化；线粒体总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均明显下降，线粒体MDA含量明显升高。急性肺损伤3h给予L-NA治疗3h,与急性肺损伤组相比，一氧化氮合酶活性有所改变，NO生成显著下降，总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA含量下降。电镜结果显示内毒素性急性肺损伤后肺脏组织细胞水肿，线粒体肿胀、嵴断裂、溶解、消失；L-NA能改善内毒素性急性肺损伤引起的细胞水肿、线粒体肿胀和空泡化。结论: L-NA能明显抑制急性肺损伤后线粒体一氧化氮合酶活性，减少NO生成，改善线粒体能量供应，增加线粒体抗氧化作用，从而减轻急性肺损伤。