靶向STAT3的慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响

目的 构建大鼠STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响.方法 针对STAT3基因的不同部位设计4对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO.1中,构建靶向STAT3基因的慢病毒载体PLK0.1-STAT3-shRNA,检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体.并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用噻唑蓝法和流式细胞仪检测沉默STAT3基因后对血管平滑肌细胞增殖和凋亡能力的影响.结果　靶向STAT3慢病毒表达载体构建成功.转染PLKO.1-STAT3-shRNA后,STAT3蛋白表达明显下降,其中以PLKO.1-STAT3-S1最为明显,达到90%以上;转染PLKO.1-STAT3-S1的细胞增殖能力(A值=0.25±0.05)明显低于未转染组(A值=0.62±0.12)和阴性对照组细胞(A值=0.59±0.11)(P＜0.05);而早期细胞凋亡率(26.9±2.8)%和晚期细胞凋亡率(9.5±1.6)%均明显高于未转染组和阴性对照组(P＜0.01).结论　成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向STAT3慢病毒表达载体PLKO.1-STAT3-S1,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To construct a recombinant short hairpin RNA (shRNA) lentiviral vector carrying STAT3 gene in rats, and to investigate its effects on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells by silencing STAT3. Methods Four oligonucleotides targeting STAT3 gene were synthesized and cloned into lentivirus vector PLKO. 1. The shRNA lentiviral vector with best transfection efficiency was detected and identified, which was transfected into vascular smooth muscle cells in rats, and its effects on proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells were measured by MTT and flow cytometry after silencing STAT3. Results The recombinant lentivirus vector PLKO. 1-STAT3-shRNA was constructed successfully. PLKO. 1-STAT3-shRNA knocked down the expression of STAT3 protein dramatically, especially PLKO. 1-STAT3-S1, whose transfection efficiency was more than 90%. The proliferation capacity of vascular smooth muscle cells transfected with PLKO. 1-STAT3-S1 (A value =0. 25 ±0. 05 ) was significantly lower than no-transfected group (A value =0. 62 ±0. 12) and negative control group (A value =0. 59 ±0. 11 )(P ＜ 0. 05). Meantime the early apoptosis rate (26. 9 ± 2. 8 ) % and late apoptosis rate (9. 5 ± 1.6 ) % in PLKO. 1-STAT3-shRNA-transfected group were significantly higher than in no-transfected group and negative control group (P ＜ 0. 01 ). Conclusion The recombinant lentivirus shRNA vector targeting STAT3,PLKO. 1-STAT3-S1, with best transfection efficiency, is constructed successfully. PLKO. 1-STAT3-S1 can inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells, and promote the cell apoptosis. This study lays the foundation for further studying on targeting treatment of vascular restenosis.     

Sirtl在肝癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的：研究肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法：应用包含44000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测肝癌组织与癌旁组织的基因表达谱,并比较两者之间存在明显上、下调的表达差异基因,随后用RT—PCR和Western blot方法进行验证分析。结果：基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中沉默信息调节因子1（Sirtl）在肝癌组织与癌旁组织中的表达差异明显,在肝癌组织中明显升高,经RT—PCR和Western blot证实与基因芯片结果一致。结论：Sirtl基因的表达可能与肝癌的发生发展密切相关。     

兔阴茎海绵体平滑肌细胞的体外培养及其生物学特性

目的 :研究体外培养的新西兰白兔阴茎海绵体平滑肌细胞的生物学特性。　方法 :采用组织块培养法 ,对兔阴茎海绵体平滑肌细胞进行活细胞观察 ,并测定其细胞生长曲线、贴壁率、细胞分裂指数。　结果 :①兔阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形 ,呈长轴平行排列 ,具有明显的方向性 ;②体外贴壁快 ,生长迅速 ,体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性。　结论 :体外培养的兔阴茎海绵体平滑肌细胞模型可用于检测某些药物对阴茎勃起的影响。     

基层医院开展腹腔镜胆总管切开取石“T”管引流术35例报告

目的:总结基层医院初期开展腹腔镜胆总管切开取石"T"管引流术(laparoscopic choledochotomy T-tube drainage,LCTD)的临床经验。方法:回顾分析我院为35例胆管结石患者行LCTD的临床资料。结果:29例(82.9%)顺利完成手术,6例(17.1%)中转开腹,2例(5.7%)术后发生胆漏。术后"T"管造影无结石残留。结论:严格掌握手术适应证,选择合适的病例,基层医院开展LCTD治疗胆管结石安全、可行。     

异氟醚延迟相预处理对兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨异氟醚延迟相预处理对兔心肌缺血-再灌注损伤的保护及对炎性细胞因子的影响。方法30只健康新西兰雄性大白兔随机均分成三组:缺血-再灌注组(I/R组)、2.0%异氟醚延迟相预处理组(S组)、假手术组(C组)。I/R组吸入100%氧气2h,24h后行左冠状动脉前降支阻断40min,再灌注120min;S组吸入2.0%异氟醚 100%氧气2h,24h后处理同I/R组;C组吸入100%氧气2h,24h后仅行左冠脉套线而不阻断160min,各组分别于阻断前20min(T1)、阻断后20min(T2)、40min(T3)、再灌注1h(T4)、2h(T5)五个时点取颈内动脉血测定血清中肌钙蛋白(cTnI)、白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。再灌注结束后观察心肌细胞超微结构的变化,用伊文思蓝和TTC染色法测心肌梗死面积。结果与C组比,I/R组与S组cTnI、IL-10和TNF-α含量均升高(P<0.05),但与I/R组比,S组IL-10明显升高(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05),cTnI和TNF-α明显降低(P<0.05)。结论异氟醚延迟相预处理通过调控炎性细胞因子平衡发挥心肌保护作用。     

胸骨后甲状腺肿的诊断与手术治疗

目的 分析胸骨后甲状腺肿的临床表现,比较各种诊断方法的敏感性、特异性,总结手术治疗要点和病理类型.方法 回顾性分析2001年-2005年间59例经手术治疗的胸骨后甲状腺肿患者的临床资料.结果 本组中胸骨后甲状腺肿主要表现为无症状颈部肿物(39例),其他表现包括憋气13例、甲亢症状4例、声音嘶哑3例、哽咽感3例、饮水呛咳1例等.胸片、B超、CT及核素显像对胸骨后甲状腺肿诊断的敏感性分别为:62.8%,15.8%,85.7%和50.0%;特异性分别为99.4%,99.8%,99.5%和99.0%.57例胸骨后甲状腺肿经颈切除,1例颈胸联合切除,1例开胸切除.术后病理:结节性甲状腺肿48例,Grave's病1例,腺瘤2例,甲状腺癌8例.结论 CT、胸片是胸骨后甲状腺肿诊断敏感性较高的检查方法,绝大多数胸骨后甲状腺肿可经颈部完成切除.     

颈前路空心加压螺钉治疗Ⅱ型齿状突骨折

目的探讨前路单枚空心加压螺钉内固定治疗Ⅱ型齿状突骨折的临床疗效。方法 C臂X线机透视下采用前路单枚空心加压螺钉内固定治疗AndersonⅡ型齿状突骨折24例。结果 24例均获随访,时间12-48（24±12）个月。患者全部骨性愈合。无术中及术后并发症。末次随访时无内固定螺钉松动、移位或断裂,颈椎活动无明显受限。结论前路空心加压螺钉固定治疗齿突骨折既可提供良好的稳定性,又能保留寰枢关节活动性,骨折愈合率较高,并发症低,是治疗Ⅱ型齿突骨折有效的方法。     

从脾肾论治脂溢性脱发

脂溢性脱发好发部位多为头顶、前额两侧等处.此病多发于青壮年男性,近年来发现女性患者人数有增加的趋势.中医认为,脂溢性脱发,其病位在发与肾,而与脾关系密切,当针对其湿热内盛,邪气循经上传,侵蚀发根毛囊以及阻遏肾中精血滋养发根毛囊的病机特点,采用清热利湿、活血通络、补肾填精等治法,内外合治,方能收到较好的治疗效果.     

老年食管癌三维适形放疗与调强放疗同步奈达铂化疗疗效观察

目的:观察老年食管癌三维适形放疗与调强放疗同步奈达铂化疗的临床治疗效果及长期生存率。方法:68例初治食管癌患者为研究对象,按照数字表随机分为三维适形放疗(A组)34例,调强放疗(B组)34例,两组均给予奈达铂25 mg·m-2·周-1同步化疗,每周1次,放疗d 1、8、15、22、29、36用药,共6周,在此基础上A组给予三维适形放疗,B组给予调强放疗。观察两组临床治疗效果及长期生存率情况。结果:A组有18例完成了同步放化疗,其余患者因副反应重未继续给予奈达铂,但均完成了放疗。B组有20例完成了同步放化疗,其余患者未继续给予奈达铂,完成了单纯放疗。放疗结束疗效评价,A、B组分别为CR 17.6%vs23.5%,PR 52.9%vs 58.8%,总有效率(CR+PR)为70.6%vs 82.4%。两组疗效比较差异无统计学意义(P>0.05);两组毒性反应比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组1、2、3年生存率分别为63.0%、41.0%和31.2%,64.3%、42.7%和33.0%,两组患者生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:老年食管癌患者行三维适形放疗或调强放疗近期疗效及远期生存率无明显差异,但放射性食管炎及放射性肺炎B组更低,提示调强放疗似乎在老年食管癌中可能更具有优势。     

老年人妇科恶性肿瘤50例临床分析

目的 对接受手术治疗的老年妇科恶性肿瘤患者的基本情况进行分析,不断提高医疗诊断水平.方法 方便选择于2010年1月—2015年12月期间该院收治的老年人妇科恶性肿瘤患者50例,通过对其临床基本资料、手术情况及疾病预后情况进行分析,找出其中的问题,分析原因并提出解决对策.结果 在上述50例患者中卵巢癌疾病的发病率最高,约占48.0％,治疗效果显著为100.0％,老年患者不易出现术后应激反应,手术前后生命体征的变化情况差异无统计学意义,手术后不良反应的发生率较低,总发生率为14.0％,但是患者伤口愈合时间较长,为(17.85±0.69)d,术中出血量也较大,为(298.31±56.87)mL.结论 加强对卵巢癌疾病的诊断和筛查能够有效提高治疗效果,选择综合素质和专业技能较高的手术人员能够有效促进患者病情的恢复和疾病预后改善情况.