小鼠精原细胞的分离和纯化

目的　探讨小鼠精原细胞的分离纯化。　方法　用组合酶消化法制备 7～ 8d小鼠的生殖细胞悬液 ;用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。　结果　所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90 .0 8%、9.92 %及 8.91% ;平均每个睾丸可获得 4.136× 10 5 个细胞 ;精原细胞主要分布于位于 2 7%～ 35 %间的Percoll梯度中 ,其超微结构与 7～ 8d小鼠睾丸切片内精原细胞的超微结构一致 ,经纯化后其纯度达 6 8.76 %。　结论　用组合酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的 7～ 8d小鼠的精原细胞能满足体外培养的需要     

人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选

目的　构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体。方法　用RTPCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体。结果　17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为693×107的抗体库,滴度为8×1014PFU/ml,Fab基因重组率为40%。以单抗捕获的甲肝抗原淘洗3轮,出现特异性富集;阳性克隆经直接ELISA和竞争抑制性ELISA实验证实具有良好的抗甲肝抗原特异性,无交叉反应性。结论　成功构建了抗体组合文库,从中获得抗甲肝抗原的特异性人抗体。     

基于独立成分分析的遗尿症儿童脑功能网络研究

目的:用独立成分分析（ICA）的方法对原发性单症状夜间遗尿症（PMNE）儿童的脑功能网络成分间连接进行研究。方法:采集35例PMNE儿童和25例健康儿童脑功能磁共振图像,通过ICA获得每个被试的脑功能网络成分,然后计算每个被试脑功能网络成分间的功能连接强度,比较PMNE儿童与健康对照组的强度差异。结果:与对照组对比,PMNE患者的右侧执行控制网络与默认模式网络、左侧执行控制网络均存在功能连接异常（FDR, P<0.05）。结论:PMNE儿童存在脑功能网络成分间的连接异常,这可能为理解PMNE儿童的病理机制提供一些新的影像学依据。     

职业铅接触工人外周血T细胞Vβ基因谱系明显缺失

目的:分析职业铅接触工人外周血中T细胞受体Vβ基因(TCR Vβ)谱系分布和克隆性特点,进一步了解铅接触后对T细胞免疫的影响。方法:利用RT-PCR分别检测6例职业铅接触工人和6例健康体检者的外周血中各TCR Vβ亚家族的表达情况;阳性产物经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度以了解T细胞克隆性。结果:所有健康体检者均可检测到24个Vβ亚家族并呈多克隆,而6例职业铅接触工人外周血TCR Vβ亚家族表现明显的限制性利用,仅能检测到1～7个,并且多数所检测到的Vβ亚家族T细胞呈现为寡克隆或双克隆增殖,发生克隆性改变的亚家族主要集中在Vβ1和Vβ16。结论:职业铅接触可能在不同程度上影响机体TCR Vβ谱系的利用和克隆性改变,可能与铅的免疫毒性有关。     

先天性肥厚性幽门狭窄的诊断标准与B超评分系统

目的　探讨一种可靠的先天性肥厚性幽门狭窄 (HPS)的诊断标准。方法　在本研究中测量了 30例正常婴幼儿和 77例HPS患儿的幽门管直径、长度和幽门部肌层厚度 ,通过半效数量分析法 ,得出相对应的评分数值。结果　 30例正常婴幼儿通过B超检查幽门大小 ,平均为 (11.16±1.2 9)mm ,范围 9.0～ 13.0mm ,肌层厚度为 (2 .12± 0 .31)mm ,范围 1.5～ 3.1mm ,幽门管长度 (13.9± 1.4 6 )mm ,范围 10 .0～ 16 .0mm。而 77例HPS婴幼儿B超检查如下 :幽门直径平均 (15 .7± 2 .2 3)mm ,范围 11.0～ 18.0mm ,肌层厚度平均为 (4.90± 0 .85 )mm ,范围 4 .0～ 6 .0mm ,幽门长度平均为18.9± 3.12 ,范围从 15 .0～ 2 2 .0mm。通过建立一个B超评分系统 ,评分≥ 4则为HPS ,若评分≤ 2则排除HPS ,评分 =3则需进一步检查 ,如上消化道造影 (UGI)。结论　B超是一种有效的检查手段 ,建立一个评分系统 ,对HPS的诊断起决定性作用     

内源性一氧化碳/血红素氧合酶体系在缺氧性肺动脉高压形成中的作用

目的 研究内源性一氧化碳／血红素氧合酶（CO／HO）体系在慢性低氧环境中的变化规律，探讨CO／HO体系在缺氧性肺动脉高压形成中的作用。方法 将第1批大鼠随机分为对照组、低氧1d组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组；第2批大鼠随机分为对照组、低氧组、低氧＋锌原卟啉（ZnPP）均。均以右心导管法测定肺动脉压力；称量并计算右心室与左心室加室间隔的比例；应用双波长分光光度法间接测定大鼠血浆及肺组织匀浆中CO含量；应用免疫组织化学技术对第一批大鼠肺内HO－1蛋白表达进行定位及半定量分析。结果 大鼠低氧7－14d开始形成稳定的肺动脉高压，伴右心室肥大；血浆及肺组织心浆中CO含量分别于低氧1d和低氧14d时两次明显增高（P＜0．01）；低氧1－3d肺泡及肺泡间质巨噬细胞和炎性细胞（F＝8．72，P＜0．001）；低氧＋ZnPP组大鼠肺动脉平均压明显高于对照组及低氧组，血浆及肺组织匀浆中CO含量明显 于氏氧组（P均＜0．01）。结论 内源性CO／HO体系在慢性低氧刺激下明显增高，且呈时间依赖性的双峰现象，其中第2次代偿性增高与肺动脉压力的变化密切相关，HO－1抑制剂的干预研究进一步表明，内源性CO／HO体系对缺氧性肺动脉高压形成具有积极的调节作用。     

高蛋白质喂养对生后早期营养不良的宫内生长迟缓大鼠糖代谢的远期影响

目的：探讨高蛋白质喂养对生后早期营养不良的宫内生长迟缓(IUGR)大鼠糖代谢的远期影响。方法：采用被动吸烟方法制备胎儿宫内生长迟缓大鼠模型。正常新生鼠仔42只和IUGR新生鼠仔129只随机分为以下4组：①正常对照组,②IUGR模型组,此两组均予20%常规蛋白饲料喂养至实验结束。③IUGR低蛋白组,④IUGR高蛋白组,此两组生后均予8%低蛋白饲料喂养4周,然后分别给予常规蛋白,或30%高蛋白饲料喂养至实验结束。各组大鼠分别在第4,6,48周做糖耐量和胰岛素释放试验,并计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果：①IUGR高蛋白组和IUGR低蛋白组大鼠至48周时空腹血糖均呈上升趋势,分别为(5.97±0.88) mmol/L和(5.24±1.35) mmol/L,胰岛素水平明显升高,分别为(42.28±13.36) μU/ml和(31.22±3.36) μU/ml,ISI进一步下降,尤以IUGR高蛋白组改变为明显(1.32±0.56),两组与正常对照组［空腹血糖(4.46±1.11) mmol/L、胰岛素水平(15.82±1.63) μU/ml和ISI(2.80±0.15)］比较差异均有显著性(P<0.05或P<0.01 ;②IUGR模型组大鼠至48周时空腹血糖正常,胰岛素亦基本恢复正常,但糖负荷后血糖和胰岛素高峰浓度仍明显升高,分别为(11.39±1.23) mmol/L和(32.16±4.76) μU/ml,与正常对照组(7.99±0.92) mmol/L和(21.70±2.09) μU/ml比较差异有显著性 (P<0.05)。结论： 宫内和生后早期营养不良大鼠,若长期摄入高蛋白饮食,可出现明显的糖耐量减低和胰岛素抵抗,提示宫内和生后早期的营养状况对机体糖代谢均具有重要的远期影响。     

分化型甲状腺癌手术中暴露并保护甲状旁腺的必要性分析

目的探讨分化型甲状腺癌手术中暴露并保护甲状旁腺的必要性。方法对首次收治的两组分化型甲状腺癌患者进行手术,第1组243例患者保留甲状腺后被膜,未寻找甲状旁腺;第2组260例患者暴露并保护甲状旁腺,保留甲状旁腺的血供,两组患者再依据病灶情况采用3种术式,分别为术式1、2、3组,观察术后甲状旁腺的功能情况。结果在术中暴露并保护甲状旁腺组中,采用术式2和术式3的患者,术后甲状旁腺功能低下的发生率较未寻找甲状旁腺组患者明显降低,两组比较有统计学意义（P〈0.05）。结论在分化型甲状腺癌手术中,尤其是甲状腺叶全部切除和单侧甲状腺叶切除加对侧甲状腺叶大部分或次全切除术中,暴露并保护甲状旁腺,可有效降低术后甲状旁腺功能低下的发生率。     

急性重症胰腺炎内科规范化治疗的临床分析

目的探讨急性重症胰腺炎不同时期的治疗方式,观察治疗效果以及治疗前后的临床表现。方法回顾性分析2006年1月2009年1月收治的34例急性重症胰腺炎患者的临床资料,患者给予内科规范化治疗,并对比治疗前、后的APACHE-Ⅱ评分、主要的实验室检查指标以及CT检查表现。结果 31例治愈,2例中途转外科治疗,1例死亡。所有患者治疗后APACHE-Ⅱ评分较治疗前减小（P〈0.01）,治疗后血清淀粉酶和白细胞计数较治疗前明显降低（P〈0.05）,而治疗后短期内CT检查表现无明显变化。结论内科规范化治疗能有效地治疗急性重症胰腺炎,适当的肠内外营养和预防性使用抗生素可有效地减少急性重症胰腺炎并发症的发生。APACHE-Ⅱ评分可作为判断急性重症胰腺炎患者预后的指标。     

Toll样受体4信号途径在大鼠中耳积液中的表达

目的探讨Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）信号途径在中耳积液大鼠的作用机制。方法采用听泡内注入纤维蛋白封闭剂和脂多糖制作大鼠中耳积液模型。分别于3、5、7、9、11、13天处死大鼠,每次5只。取中耳黏膜检测TLR4、诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）mRNA的表达;免疫组化检测核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）表达情况。结果对照组中耳黏膜内有少量的TLR4、iNOS和IL-8mRNA的表达,中耳积液时表达量明显增高（P〈0.05）。免疫组化检测显示大鼠中耳黏膜内NF-κBp65的表达在中耳积液时明显提高。结论中耳积液时TLR4表达明显升高,并伴有NF-κB活化,促进下游IL-8等的表达,可能是引发大鼠分泌性中耳炎的机制之一。