胰腺癌细胞株原钙黏附蛋白8基因的甲基化状态

目的 分析原钙黏附蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因在胰腺癌细胞株的甲基化状态.方法 抽提6株胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990和2例正常胰腺组织的总RNA,以甲基化特异性PCR(MSP)法检测PCDH8甲基化情况.应用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理6株胰腺癌细胞株,采用实时定量PCR法检测处理前后细胞的PCDH8 mRNA表达.结果 2例正常胰腺组织PCDH8基因未发生甲基化,PANC1、BxPC3、CFPAC胰腺癌细胞株PCDH8基因部分甲基化,而PaTu8988、ASPC1、SW1990细胞完全甲基化.PCDH8mRNA在PANC1、SW1990、PaTu8988胰腺癌细胞株中有表达,表达的相对值(RQ)分别为1.576±0.648、0.013±0.008、0.002±0.001;BxPC3、CFPAC、ASPC1细胞株无PCDH8 mRNA表达.5-Aza-dC处理后,胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990均有PCDH8 mRNA表达,表达量较处理前明显升高,相对表达量分别为7.463±2.628、10.696±1.539、7.852±2.762、421.815±1.493、118.595±4.089、6.690±1.884.结论 PCDH8基因启动子高甲基化是导致该基因在胰腺癌细胞株表达下降的主要原因之一.     

吉法酯对伴有消化不良症状慢性胃炎的临床研究

背景 胃黏膜保护剂对伴有症状的慢性胃炎的作用尚不明确。本研究是一项多中心、开放、随机试验,比较吉法酯和硫糖铝对伴消化不良症状的慢性胃炎的综合疗效。 方法 共有来自国内6家中心的253例证实有慢性胃炎的消化不良患者进入研究,被随机分为两组,分别接受6周的300mg/d吉法酯或3.0/d的硫糖铝治疗。研究终点是6周的内镜学改变。 结果 吉法酯对于内镜下评分和症状改善的有效率分别为72%和67%,显著高于硫糖铝组（40.1%和39.3%,P<0.001,ITT）。在组织学评价上,吉法酯和硫糖铝相比,对减轻黏膜的慢性炎症（57.7% vs 24.8%, P<0.001）和炎症活动（36.4% vs 23.1%, P<0.05）都有效。同时,吉法酯可以显著增加黏膜的前列腺素水平,降低MPO水平。黏膜糜烂的程度与症状无关,但Hp的状态影响到吉法酯的疗效。 结论 吉法酯对慢性糜烂性胃炎的黏膜炎症有显著疗效,内镜和炎症评分应该作为胃炎相关临床研究的主要评价指标。     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变,探讨其诊断价值.方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步K-ras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值.结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中K-ras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型K-ras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h.而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测.结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的K-ras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段.     

MUC2基因甲基化在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的检测及意义

目的 检测MUC2基因在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的甲基化情况,探讨MUC2基因甲基化对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集长海医院消化内科实验室保存的人胰腺癌细胞系SW1990、ASPC、PANC1、BxPC3、PaTu8988、CFPAC1及40例胰腺癌、15例慢性胰腺炎患者和25例正常对照者外周血标本,应用甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction endonuelease,MS-RE)为基础的PCR法检测MUC2基因甲基化.结果 人胰腺癌细胞系PANC1、BxPC3、PaTu8988未发生MUC2基因甲基化;ASPC、CFPAC1、SW1990胰腺癌细胞系发生MUC2基因甲基化.外周血标本中,40例胰腺癌标本甲基化率为40.0%(16例),15例慢性胰腺炎无甲基化,25例正常对照甲基化率4.0%(1例).胰腺癌与慢性胰腺炎、正常对照之间的甲基化率有显著差异(P＜0.01).外周血标本MUC2基因启动子CpG岛甲基化检测诊断胰腺癌的敏感性为40%、特异性为97.5%、诊断准确性68.8%、阳性预测值94.1%、阴性预测值61.9%.结论 用甲基化限制性酶切PCR法对外周血进行MUC2基因启动子区高甲基化检测可望成为新的胰腺癌诊断的重要实验室辅助手段.     

过氧化物酶增殖物激活受体激动剂(罗格列酮)在大鼠急性坏死性胰腺炎中的防治作用

目的:研究PPAR-γ增殖物激动剂(罗格Yqm)对ANP及合并肺损伤大鼠是否有保护作用.方法:50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,正常对照组、假手术组、ANP组、罗格列酮预防组,罗格列酮治疗组.正常对照组,未做任何处理;假手术组,腹腔内注射同等剂量生理盐水;采用大剂量精氨酸腹腔注射诱导ANP模型,预防组于造模前60 min给予罗格列酮10ms/kg,2次,每次间隔30 min,治疗组于造模后60 min给予罗格列酮10 ms/kg,2次,每次间隔30 min.各组于造模后24 h处死大鼠,观察大鼠血清AMY、TNF-α和IL-1β水平变化,同时检测胰腺和肺的组织病理变化和肺组织髓过氧化物酶(MPO)的变化.结果:ANP组AMY、TNF-α、IL-1β和MPO均较对照组和假手术组明显升高(P<0.001);罗格列酮预防和治疗组血清AMY、TNF-α、IL-1β、肺组织中MPO水平较ANP组明显下降,且胰腺和肺的病理损伤也明显减轻(P<0.001)结论:罗格列酮能明显降低ANP的炎症,能明显减少TNF-α、IL-1β的产生,能降低肺组织中MPO含量,对ANP及合并的肺损伤具有保护和治疗作用.     

肝胆胰疾病患者十一种血清蛋白质定量测定及其临床意义

收集114例临床确诊肝胆胰疾病患者血清,应用贝克曼全自动免疫分析仪(Array Protein Systen m)联合定量检测11种血清蛋白质,发现胆管结石及胆囊疾病患者血清IgG、IgA,IgM、AAT和AMG升高,TRF和CER降低,而C3、C4、AAG和CRP正常;胰腺疾病IgG、IgA和AAT升高,TRF和CER降低,IgM、C3、C4、AAG、AMG及CRP正常;肝癌患者IgG、IgA、IgM、AMG、AAT和CRP升高,TRF降低,C3、C4、AAG和CER正常;肝硬化患者IgG、IgA、IgM、AMG和AAT升高,C3、C4、TRF、AAG和CER降低,CRP正常.肝胆结石与非肝胆结石患者比较,血清IgG、IgA、IgM、CER和AMG降低,C3和C4升高,这对临床鉴别诊断有一定意义.肝胆结石患者手术后CRP、IgA和AAG明显升高,是术后观察的有用指标.11种血清蛋白质分别与Bil-T、ALP和ALT测定结果作相关性分析,发现C3与ALP、TRF与ALT呈正相关,其余蛋白质与Bil-T、ALP和ALT则相关不显著(P>0.05).     

携带幽门螺杆菌ureB和IL-2质粒DNA的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建

目的　构建编码幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (ureB)基因和小鼠IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,体外转染Cos 7细胞 ,鉴定其表达蛋白的免疫性。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)技术从H .pylori标准菌株CCUG1 7874基因组DNA扩增ureB基因 ,从重组质粒 pCIneo IL 2扩增小鼠IL 2基因 ,通过T A克隆分别插入 pUCmT载体 ,检测ureB及IL 2的核苷酸序列 ,通过酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体 pIRES ,PCR和酶切反应进行鉴定 ;重组载体 pIRES ureB和 pIRES ureB IL 2转入减毒鼠伤寒沙门菌LB50 0 0 ,抽提质粒 ,再次转入SL72 0 7,反复传代 ,鉴定核酸疫苗载体菌的稳定性。通过脂质体法将重组载体 pIRES ureB和pIRES ureB IL 2转染Cos 7细胞 ,SDS PAGE及Westernblot法检测表达蛋白的免疫性。结果　扩增出长约 1 70 0bp的ureB基因和 51 0bpIL 2 ,测序结果表明 ,扩增出的ureB基因与基因库H .pyloriureB序列一致 ,IL 2序列和小鼠的IL 2序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实ureB和IL 2基因克隆入真核表达载体 pIRES ,并成功构建了稳定的幽门螺杆菌ureB和IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,并且以Westernblot检测到特异性的相对分子质量 (Mr)为 6 6× 1 0 3的UreB蛋白     

13C-尿素呼气试验及其临床应用

幽门螺杆菌(Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病菌,并与胃癌、MALT淋巴瘤的发生发展密切相关.Hp感染的诊断方法中血清学检查和尿素呼气试验具有非侵入性、无痛苦和检查相对简单等优点 [1].为评价13C呼气试验(13CUBT)对Hp感染的诊断价值,我们引入深圳市微侵袭医疗技术有限公司提供的HeliView气相层析/核素比率质谱仪(韩国产),对2 010例在我科门诊或住院的患者进行检测分析,现将结果报告如下.     

细胞外信号调节激酶在应激性溃疡发病中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)在实验性应激性溃疡发病中的作用.方法:采用浸水束缚(water-immersion restraint,WIR)应激实验复制大鼠应激性溃疡模型.检测WIR应激5 min、15 min、30 min、1 h、2 h和3.5 h各时间点的胃黏膜ERK1/2活化情况,并观察特异性ERK1/2抑制剂PD98059预处理(1 mg/kg,iv.)对胃黏膜损伤的影响.采用Western印迹检测ERK1/2和caspase-3表达,激酶活性分析方法检测ERK1/2活性,电泳迁移率变动分析(EMSA)检测转录因子活化蛋白1(AP-1)和核因子κB(NF-κB)DNA结合活性,Northern印迹检测TNF-α和IL-1β mRNA表达,采用溃疡指数(UI)计分和病理学检查评价胃黏膜病变程度, TUNEL技术检测和定量细胞凋亡.结果:正常大鼠胃黏膜仅检测到极微弱的磷酸化ERK1/2表达,WIR应激15 min后胃黏膜ERK1/2即发生活化并于3.5 h后达到峰值.PD98059抑制ERK活化后,胃黏膜AP-1和NF-κB活性及TNF-α和IL-1β mRNA表达显著下调,胃黏膜损伤程度也明显减轻,同时伴有胃黏膜caspase-3活化和凋亡轻度增加.结论:ERK1/2活化在浸水束缚应激诱导的胃黏膜损伤中发挥了重要作用.     

糖尿病等病史、家族史与胰腺癌关系的研究

探讨中国人胰腺,癌的发生与糖尿病等疾病及家族史的关系。以493例病理确诊的胰腺癌患者作为病例组，1031例非肿瘤患者年龄和性别、经济收入频数匹配的同来源病例为对照组，用病例对照研究的方法比值比（OR）及95％可信区间（CI），以估计糖尿病等病史及家族史的相对危险性。结果表明，诊断胰腺癌2年以上患糖尿病、胆石症、慢性胰腺炎、癌症、肺结核病、丝门螺杆菌感染、癌症家族史和糖尿病家族史的OR值（95％CI）分别为4.64(2.05-10.49）、4.12(2.81-6.04)、18.38(6.33-53.35)、9.47(4.97-18.06）、4.21(2.30-7.72）、1.14(0.45-2.89）、2.01(1.29-3.14)、0.83(0.15-4.56）。糖尿病和胆石症Logistic回归分析P＜0.05。因此糖尿病、胆石症、胰腺炎、癌症史、肺结核病史及癌症家族史是胰腺癌的危险因素，而糖尿病和胆石症是其独立危险因素。