芍药甙对急性坏死性胰腺炎大鼠NF-κBp65及细胞因子表达的影响

目的观察芍药甙对ANP大鼠的治疗效果及对NF-κB、TNF-α、IL-6表达的影响。方法40只大鼠随机分为正常组、ANP 24h、72h组和芍药甙24h、72h治疗组(芍药组),每组8只。采用L -精氨酸腹腔内注射法诱发ANP模型,芍药组于造模后即刻用2ml芍药甙药液灌胃,11次/2h。各组采血检测血清淀粉酶,取胰腺组织行病理检查,Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达。结果造模后24h ANP组和芍药组血清淀粉酶分别为(3569±516)U/L和(2994±370)U/L,明显高于正常组的(1136±107)U/L(P<0.05);病理学分值分别为4.25±0.63和3.06±0.49,也明显高于正常组的0分(P<0.05);芍药组24h的NF-κB p65蛋白及TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达相对值分别为0.230±0.044,0.141±0.018和0.017±0.029,72h分别为0.040±0.006、0.078±0.017和0.008±0.001,均显著低于同时间点的ANP组(P<0.05)。结论芍药甙能减轻ANP大鼠胰腺的病理损害程度,其机制可能与抑制NF-κB活化、抑制TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达有关。     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法。方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株，分别制备组织、细胞匀浆，提取蛋白质组分，进行双向电泳。结果加大蛋白酶抑制剂，应用两性电解质，可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分，并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱。结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中，样本的制备和双向电泳的条件是关键因素。     

人胰腺癌相关蛋白质的差异表达研究

胰腺癌5年存活率不超过5％，蛋白质组学（proteomics）的出现为寻找一种特异性高、敏感性强的胰腺癌肿瘤标志物带来了希望。蛋白质组学技术改变传统的分割式研究单个蛋白质的模式，建立全面、立体、快速的分析方法．以透视全体基因在特定细胞或组织的表达。本研究针对人正常胰腺、胰腺癌、胰腺癌旁组织，利用双向凝胶电泳（2-DE）技术以及质谱技术和生物信息学，分析胰腺组织不同生理状态下蛋白质的差异表达，旨在寻找胰腺癌早期诊断的肿瘤标志物．为早期诊断奠定基础。     

幽门螺杆菌依赖丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导SGC7901细胞表达分泌白细胞介素-8

背景:已知前炎症细胞因子白细胞介素(IL)鄄8在慢性活动性胃炎、消化性溃疡等幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关疾病的发生、发展中起重要作用,但H.pylori诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8的分子机制尚不明确。目的:通过体外实验了解H.pylori对人胃癌细胞株SGC7901表达、分泌IL鄄8的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在H.pylori诱导SGC7901细胞IL鄄8mRNA表达和IL鄄8蛋白分泌中的作用。方法:SGC7901细胞经p38MAPK特异性抑制剂SB203580预作用2h,再加入H.pylori标准菌株CCUG17874共培养。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测IL鄄8mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL鄄8蛋白的分泌,观察SB203580对H.pylori诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8的影响。结果:H.pylori能诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8。SB203580能以剂量依赖的方式抑制H.pylori诱导的SGC7901细胞IL鄄8蛋白分泌,经终浓度为0.3、1、3和10μmol/L的SB203580预作用2h,SGC7901细胞的IL鄄8蛋白分泌与未经SB203580预作用组相比分别减少了26%、51%、64%和73%(P<0.05);SB203580也能使H.pylori诱导的IL鄄8mRNA表达显著减弱。结论:H.pylori能诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8,该作用在一定程度上依赖于MAPK信号通路。     

人胰腺癌细胞株MUC2基因启动子区甲基化状态检测和分析

近年表观遗传学修饰方式之-的DNA甲基化成为肿瘤研究的热点。目前已发现胰腺癌中存在MUC2表达异常。目的：探讨人胰腺癌细胞株MUC2表达与其基因启动子区甲基化的关系，以了解胰腺癌的发生机制。方法：以人胰腺癌细胞株AsPC-1、BxPC-3、CFPAC-1、PANC-1、SW1990和PaTu8988s为研究对象，以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测去甲基化制剂DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理前后各胰腺癌细胞株MUC2 mRNA／蛋白表达的变化，以甲基化特异性PCR（MSP）结合测序检测MUC2基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果：5-Aza-CdR处理前．胰腺癌细胞株AsPC．1、CFPAC-1和SW1990无MUC2mRNA／蛋白表达或低表达：经5-Aza-CdR处理后，MUC2mRNA／蛋白重新表达。MSP结合测序显示上述胰腺癌细胞株MUC2基因启动子区CpG岛存在高甲基化。结论：人胰腺癌细胞株MUC2表达抑制与其基因启动子区CpG岛高甲基化相关。MUC2基因启动子区CpG岛高甲基化可能在胰腺癌的发生、发展中起-定作用。     

Toll样受体4在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系.方法 采用免疫组化SP法检测62例经病理证实的胰腺癌手术切除标本及35例癌旁正常胰腺组织中TLR4蛋白表达,采用CD31抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析TLR4蛋白表达与胰腺癌临床病理特征以及MVD的相关性.结果 胰腺癌组织TLR4蛋白阳性表达率和MVD分别为74.2％ (46/62)和47.3±13.5,均显著高于正常胰腺组织的17.1％ (6/35)和12.6±4.8(P值均＜0.01).有淋巴结转移的胰腺癌组织中TLR4蛋白阳性表达率为83.8％,显著高于无淋巴结转移的60.0％(P=0.036);TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的胰腺癌组织中TLR4蛋白阳性表达率为85.3％,显著高于Ⅰ+Ⅱ期的60.7％(P =0.028).MVD与肿瘤的大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P值分别为0.008、0.036、0.010).胰腺癌TLR4蛋白表达与MVD呈显著正相关(Υ=0.534,P＜0.01).结论 TLR4参与胰腺癌的发生、发展,其机制可能与促进肿瘤血管生成有关.     

p38MAPK抑制剂对大鼠急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的保护作用

目的 探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠合并肺损伤的保护作用.方法 54只雄性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组和SB203580(干预)组,每组18只.以左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立大鼠ANP模型,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,干预组在制模前腹腔注射SB203580(用二甲基亚枫溶解配制成10 μmol/L)5 mg/kg体重.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血测淀粉酶、TNF-α和IL-6含量,行胰腺及肺组织病理学检查,计算肺组织湿/干重比,测髓过氧化酶(MPO)含量,RT-PCR法检测中性粒细胞趋化因子(C1NC) mRNA表达,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.结果 术后6h,对照组的血淀粉酶、TNF-α和IL-6含量、肺组织湿/干重比、MPO活性、CINC mRNA及p-p38MAPK蛋白表达量分别为(1035±73) U/L、(0.94±0.16) μg/L、(4.77±0.86) μg/L、3.92±0.29、(0.39±0.02) U/g、0.28 ±0.04、0.09±0.04;ANP组分别为(5848±656)U/L、(3.84±0.32) μg/L、( 103.54±15.32) μg/L、4.97±0.47、(1.03±0.08) u/g、0.62±0.06、0.52±0.14;干预组分别为(4259±286) U/L、(1.64±0.21) μg/L、(76.56±11.46) μg/L、4.32±0.34、(0.78±0.05)U/g、0.37±0.04、0.27 ±0.08.ANP组的各项指标均显著高于对照组,干预组的各项指标均显著低于ANP组,但仍显著高于对照组(P值均＜0.01).结论SB203580可通过阻断p38MAPK信号通路,在一定程度上减少炎症因子的产生,减轻ANP大鼠胰腺及肺组织损伤.     

APC蛋白在胰腺癌及其癌前病变中的表达差异分析

背景：APC基因突变致Wnt／β-catenin信号通路异常活化可促进肿瘤发生。目的：分析APC蛋白在胰腺导管腺癌（PDAC）和胰腺癌前病变中的表达差异,探讨APC在PDAC发生中的作用。方法：以免疫组化方法检测APC蛋白在正常胰腺、胰腺上皮内瘤变（PanINs）、胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤（IPMNs）、PDAC中的表达,分析其在PanIN-1、-2、-3、IPMN腺瘤（IPMA）、IPMN交界性肿瘤（IPMB）、IPMN腺癌（IPMC）、PDAC中的表达差异,以及APC蛋白表达与PDAC临床病理特征和患者预后的关系。结果：正常胰腺导管上皮APC表达阴性。由PanIN-1、PanIN-2至PanIN-3,APC免疫组化评分（IHCS）逐渐增高（P〈0．05）,PanIN-1APC阳性表达率显著低于PanIN-2、PanIN-3（P〈0．05）;IPMA、IPMB、IPMC间APCIHCS和APC阳性表达率均无明显差异。APC在PDAC和IPMNs中的表达具有明显不均一性,PDAC的APCIHCS和APC阳性表达率均显著低于各级别PanINs（P〈0．05）,与各级别IPMNs无明显差异。APC阳性表达与PDAC患者术后生存期短显著相关（P=0．003）。结论：APC蛋白表达异常是PDAC发生过程中的早期事件,其表达阳性提示患者预后不良。APC在胰腺癌中的具体作用机制有待进一步研究。