Toll样受体4在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系.方法 采用免疫组化SP法检测62例经病理证实的胰腺癌手术切除标本及35例癌旁正常胰腺组织中TLR4蛋白表达,采用CD31抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析TLR4蛋白表达与胰腺癌临床病理特征以及MVD的相关性.结果 胰腺癌组织TLR4蛋白阳性表达率和MVD分别为74.2％ (46/62)和47.3±13.5,均显著高于正常胰腺组织的17.1％ (6/35)和12.6±4.8(P值均＜0.01).有淋巴结转移的胰腺癌组织中TLR4蛋白阳性表达率为83.8％,显著高于无淋巴结转移的60.0％(P=0.036);TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的胰腺癌组织中TLR4蛋白阳性表达率为85.3％,显著高于Ⅰ+Ⅱ期的60.7％(P =0.028).MVD与肿瘤的大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P值分别为0.008、0.036、0.010).胰腺癌TLR4蛋白表达与MVD呈显著正相关(Υ=0.534,P＜0.01).结论 TLR4参与胰腺癌的发生、发展,其机制可能与促进肿瘤血管生成有关.     

埃索美拉唑对健康志愿者抑制胃泌酸的药效学研究

目的　比较埃索美拉唑与雷贝拉唑对健康志愿者抑制胃泌酸的效果及安全性。方法　 36名健康志愿者随机分为两组 ,分别口服埃索美拉唑 4 0mg或雷贝拉唑 10mg ,每日 1次 ,连续 5d ,经过14d的洗脱期后 ,交叉口服雷贝拉唑 10mg或埃索美拉唑 4 0mg ,每日 1次 ,连续 5d。分别于服药首日及第 5天连续测定 2 4h胃内 pH ,并以PCR方法鉴定细胞色素 (CYP) 2C19基因型。 结果　埃索美拉唑组服药后首日最初 4、2 4h和第 5天 2 4h胃内pH >4 .0的时间百分比分别为 5 8.9%、73.7%和 84 .2 % ,显著高于雷贝拉唑组 (32 .1%、5 4 .8%和 76 .2 % ,P <0 .0 0 1) ;胃内 pH中位值分别为 4 .2 9、5 .6 0和 6 .38,亦显著高于雷贝拉唑组 (2 .88、4 .2 6和 5 .77,P≤ 0 .0 0 1)。服药后首日及第 5天pH >4 .0超过 16h的志愿者埃索美拉唑组百分率分别为 6 3.9%和 88.9% ,亦显著高于雷贝拉唑 (33.3%和 6 1.1% ,P <0 .0 5 )。36名志愿者中 2 8名CYP 2C19基因型为强代谢型 ,8名为弱代谢型。两药对强代谢型或弱代谢型者胃泌酸的抑制差异无显著性 (P >0 .0 5 )。服药期间两组均未发生明显不良反应。结论　埃索美拉唑和雷贝拉唑均具有较强的抑制胃酸分泌效应 ,但在抑酸速度、抑酸强度和维持时间方面 ,4 0mg埃索美拉唑优于 10mg雷贝拉唑。两药     

胰腺细针穿刺标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的临床意义

目的 检测胰腺细针穿刺标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的临床意义.方法 对54例胰腺占位病变的EUS-FNA活检标本采用SP免疫组化法检测粘蛋白MUC1、MUC5AC表达,根据临床综合判断的诊断,与细胞学和组织学检查结果比较,评价其诊断价值.结果 54例患者最后确诊为胰腺癌38例,胰腺良性肿瘤6例,慢性胰腺炎10例.细胞学和组织学的诊断敏感性分别为31.6%和47.4%.MUC1、MUC5AC、MUC1 + MUC5AC在胰腺癌EUS-FNA标本组织中的阳性表达率为81.6%、84.2%和76.3%,显著高于胰腺良性疾病的25%、43.8%和6.3%的表达(P ＜ 0.01).细胞学和组织学检查结合MUC1和MUC5AC的检测诊断胰腺癌的敏感性可提高到84.2%,特异性达100%.结论 检测胰腺FNA标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的表达有助于提高对胰腺癌的诊断.     

芍药甙对急性坏死性胰腺炎大鼠NF-κBp65及细胞因子表达的影响

目的观察芍药甙对ANP大鼠的治疗效果及对NF-κB、TNF-α、IL-6表达的影响。方法40只大鼠随机分为正常组、ANP 24h、72h组和芍药甙24h、72h治疗组(芍药组),每组8只。采用L -精氨酸腹腔内注射法诱发ANP模型,芍药组于造模后即刻用2ml芍药甙药液灌胃,11次/2h。各组采血检测血清淀粉酶,取胰腺组织行病理检查,Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达。结果造模后24h ANP组和芍药组血清淀粉酶分别为(3569±516)U/L和(2994±370)U/L,明显高于正常组的(1136±107)U/L(P<0.05);病理学分值分别为4.25±0.63和3.06±0.49,也明显高于正常组的0分(P<0.05);芍药组24h的NF-κB p65蛋白及TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达相对值分别为0.230±0.044,0.141±0.018和0.017±0.029,72h分别为0.040±0.006、0.078±0.017和0.008±0.001,均显著低于同时间点的ANP组(P<0.05)。结论芍药甙能减轻ANP大鼠胰腺的病理损害程度,其机制可能与抑制NF-κB活化、抑制TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达有关。     

幽门螺杆菌hpaA核酸疫苗的构建及免疫原性检测

目的 构建含幽门螺杆菌(Hp)hpaA基因的核酸疫苗。方法 抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA，应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增hpaA基因，克隆入pUCmT载体，检测hpaA基因序列，经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体plRES，转入大肠杆菌，筛选阳性克隆，通过PCR和酶切反应鉴定。通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES-hpaA转染COS-7细胞，SDS-PAGE及Western印迹法检测pIRES-hpaA表达HpaA蛋白的免疫原性。结果 成功扩增出长约750bp的hpaA基因．测序结果表明扩增出的hpaA基因与Hp hpaA序列一致，PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES，成功构建了含hpaA基因的Hp核酸疫苗pIRES-hpaA，并经Western印迹法检测到特异性蛋白条带。结论 构建了hpaA基因的Hp核酸疫苗，为进一步探索其免疫作用奠定了基础。     

SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义

目的检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用。方法收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达。结果6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P<0.01)。SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性。结论胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件。     

躯体性及心理性应激状态下大鼠胃粘膜NOS活性与胃粘膜损伤

目的：探讨躯体性及心理性应激状态下大鼠胃粘膜ＮＯＳ活性变化及其与胃粘膜损伤的关系。方法：将９６只雄性ＳＤ大鼠随机分为３组：对照组,规则光（Ｒ）组及不规则光（Ⅰ）组,采用高压恒流脉冲刺激器制备躯体性和心理性应激模型。分光光度法检测胃粘膜组织的ＮＯＳ活性和Ｎｉｌｓ Ｌａｍｂｅｃｈｔ法测定胃粘膜损伤指数。结果：正常情况下ＮＯＳ活性平稳,应激氏大鼠胃粘膜ＮＯＳ活笥均明显升高,Ⅰ组升高程度更明显;与对照组比     

人、鼠胰星状细胞3种细胞标志物desmin、GFAP、α-SMA的表达

目的 研究人和大鼠胰星状细胞(PSCs)在培养过程中细胞标志物表达的动态变化。方法 人和大鼠胰腺组织经胶原酶、链霉蛋白酶E和DNase Ⅰ联合消化后，采用Nycodenz不连续密度梯度离心方法分离PSCs，获得的细胞采用离心淘洗技术进行纯化。用激光共聚焦扫描显微镜观察新鲜分离细胞的维生素A(VitA)自发荧光现象，用免疫组化法检测细胞标志物——结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达。细胞接种培养后，观察细胞形态和生长特性，采用Western和Northem分析分别检测细胞标志物和Ⅰ型前胶原α1链基因表达的动态变化。结果 采用离心淘洗技术获得的人和大鼠PSCs纯度分别可达85％以上和95％以上。新分离的人和大鼠PSCs胞浆内有VitA自发性蓝绿色荧光。新分离大鼠PSCs表达desmin和GFAP，不表达α-SMA，而人PSCs均不表达desmin、GFAP或α-SMA。在体外培养过程中，大鼠PSCs表达desmin和GFAP逐渐减弱，但人和大鼠PSCs均开始大量表达α-SMA蛋白和Ⅰ型前胶原基因。结论 利用离心淘洗技术可获得高纯度的人和大鼠PSCs。人和大鼠PSCs细胞标志物表达存在种属差异，但它们活化后均高表达α-SMA蛋白和Ⅰ型前胶原基因。     

基质金属蛋白酶3和9在溃疡性结肠炎中表达的研究

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)参与组织的修复 ,在炎症性疾病中具有非常重要的意义。Ａｒｉｈｉｒｏ等[1] 研究提示 ,ＭＭＰｓ参与炎症性肠病 (ＩＢＤ)患者溃疡基底部炎症区组织修复、血管形成和白细胞的趋化。ＭＭＰ 9在炎症性肠病的发展过程中起非常重要的作用。然而 ,ＭＭＰ 9在炎症性肠病炎症区的来源还不清楚[2 ] 。本实验通过免疫组化方法研究ＭＭＰ 9和ＭＭＰ 3在溃疡性结肠炎患者肠黏膜炎症区和非炎症区的表达情况。一、材料和方法1.组织来源 :从 2 0 0 1年 5月到 10月共留取肠镜及病理证实的溃疡性结肠炎活检标本 31例 ,包括炎症区和…