血清白细胞介素1β与溃疡性结肠炎的关系

目的 :测定溃疡性结肠炎 (U C)患者血清中白细胞介素 1β(IL - 1β)的含量 ,并分析其与 U C病变范围、病变程度和复发与否的关系 ,以及治疗前后的变化。方法 :收集经内镜证实的 UC患者血清 6 4例 ,采用 EL ISA法测定血清中 IL - 1β的含量 ,正常对照为健康献血者血清。 结果 :UC患者 IL - 1β的含量 (10 .8± 14 .0 ) pg/ ml显著高于正常对照 (1.8± 0 .6 ) pg/ ml (P<0 .0 1)。不同病变范围 IL - 1β含量 ,愈合者、直肠病变、直乙状结肠、左半结肠及全结肠分别为 (6 .4± 8.6 )、(9.0± 11.0 )、(8.3±7.8)、(19.8± 14 .6 )和 (15 .5± 2 3.3) pg/ ml,左半结肠病变与愈合期者比较有统计学差异 (P<0 .0 5 )。不同病变程度 IL - 1β含量 :0级为 (6 .4± 8.6 ) pg/ ml,1～ 3级分别为 (6 .2± 6 .2 )、(11.2± 12 .6 )和 (16 .9± 19.7) pg/ m l,其中 3级较 0级有明显增加(P<0 .0 5 )。初、复发患者及治疗前后 IL - 1β含量均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :UC患者血清中 IL - 1β含量随病变程度的加重而增加 ,治疗后明显下降。表明 IL - 1β的变化对溃疡性结肠炎严重程度和预后的判断及指导治疗有一定参考价值     

一氧化氮合酶在心理性应激胃黏膜损伤中作用

目的：探讨躯体性及心理性应激状态下大鼠胃黏膜一氧化氮合酶（NOS）及其相关药物与胃黏膜损伤发生的关系。方法：采用高压恒流脉冲刺激器复制胃粘膜损伤模型，将120只雄性SD大鼠随机分为4组：对照（C）组、规则光（R）组、不规则光（I）组及药物（r)组，分光光度法检测NOS活性和Nils Lambecht法测定胃黏膜损伤指数，使用兔源大鼠NOSⅠ（结构型NOS，cNOS)、NOSⅡ（诱导型NOS，iNOS)和NOSⅢ（内皮型NOS，eNOS)多抗，采用免疫组织化学方法研究NOS的分布规律。结果：正常情况下NOS活性平稳，心理性应激后，大鼠胃黏膜NOS活性明显升高（P＜0．05）；与C组比较，R、I组胃黏膜损伤指数均较高，且I组较R组变化显著（P＜0．05）；NOSⅠ和NOSⅢ在3组中均有表达，而NOSⅡ只在R、I组中表达，且其表达无明显差异（P＞0．05）；3种药物均使酶活性下降，其中左旋精氨酸甲酯（L－NAME）最为显著（P＜0．01），其使损伤指数增加；左旋精氨酸（L－Arg）和氨基胍（AG）使损伤指数降低（P＜0．05）。结论：心理性应激程度愈高，胃黏膜损伤愈严重，胃黏膜损伤程度及NOS活性变化与心理性应激程度关系密切，其分布变化似乎与心理性应激程度无关；L－NAME加重胃黏膜损伤，而L－Arg和AG有保护作用。     

幽门螺杆菌液体培养的研究

目的 :建立一种适用于幽门螺杆菌 (Hp)大量扩增并提取致空泡变性细胞毒素 (Vac A)的液体培养方法。 方法 :采用TSB及 MHB培养液 ,加入小牛血清 (FBS)或环糊精 (CD)作为支持剂 ,比较其对 Hp的扩增效果及上清中空泡毒素活性的差异。结果 :TSB+CD组 Hp平均扩增速度及菌体湿重与 TSB+FBS组相比无显著差异 ,二者均显著高于 MHB培养液组 (P<0 .0 1)。 TSB+CD组上清蛋白浓度为 (2 .4 4± 0 .39) m g/ m l,显著高于 MHB+CD组。 TSB培养液组浓缩上清具有明显的空泡毒性 ,且蛋白电泳可见相对分子质量为 95 0 0 0的 Vac A,而 MHB培养液组无空泡毒性。 结论 :以 TSB为培养液 ,加入适量的CD作为支持剂 ,在不损失 Vac A活性的前提下 ,可明显增加浓缩上清液中的蛋白纯度 ,是大量提取和制备 Hp Vac A蛋白理想的液体培养方法。     

幽门螺杆菌VacA毒素的初步纯化

早期发现幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)液体培养上清中含有导致哺乳动物上皮细胞产生空泡的物质 ,后来证实是由一种相对分子质量 (Ｍｒ)约为870 0 0或 95 0 0 0的Ｈｐ分泌蛋白引起 ,因而命名为致空泡变性细胞毒素 (ＶａｃＡ)。本研究采用多种液相层析方法的组合 ,对ＨｐＭｒ 为 95 0 0 0的ＶａｃＡ蛋白进行分离纯化 ,为进一步研究ＶａｃＡ的作用机制奠定基础。采用经硫酸铵沉淀及透析后得到的ＨｐＣＣＵＧ 17874菌株液体培养浓缩上清 ,应用吸附层析、疏水层析、阴离子交换层析及凝胶过滤等液相层析方法进行Ｖａｃ…     

PTP抑制剂对VacA空泡活性的影响

近期在VacA的研究中发现,该毒素对多种生长因子(尤其是EGF)作用于胃粘膜上皮细胞的信号转导通路有显影响,VacA对EGF诱导的受体蛋白酪氨酸激酶(receptor protin．tyrosmeHnase,RPTK)自身磷酸化及随后一系列的信号转导过程有明显的抑制作用。国外学已初步分离并克隆出胃癌细胞株膜表面的VacA受体,分子量大小约250kDa,氨基酸序列同源性分析显示该受体属于受体蛋白酪酸磷酸酶家族(receptor prodn-tyrosine phosphatase,RPTP)。     

大黄对急性坏死性胰腺炎大鼠炎性介质表达的影响

目的 观察中药生大黄空肠灌注对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织炎性介质表达的影响.方法 SD大鼠33只,按完全随机法分为对照组、ANP组及生大黄治疗组,每组11只.胰胆管逆行注射3％牛磺胆酸钠溶液方法制备ANP模型,同时做空肠造瘘.生大黄组于造模后空肠灌入1 g/ml生大黄煎液1ml/kg体重.造模36 h后处死大鼠.取血测定淀粉酶活性;取部分胰腺组织常规病理检查;取部分胰腺组织抽提总mRNA,采用实时PCR方法测定胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-α mRNA表达.结果 造模后大鼠血淀粉酶活性明显升高,胰腺组织大片坏死、出血,大量炎细胞浸润,符合ANP改变.对照组胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-αt mRNA表达量分别为0.29±0.13、0.35±0.15、1.09±0.32;ANP组分别为2.23 ±0.49、2.26±0.51、5.24±0.59,均较对照组显著增加(P值均＜0.05);生大黄组分别为0.97±0.30、1.02±0.34、2.59±0.36,均较ANP组显著减少,但仍显著高于对照组(P值均＜0.05).结论 生大黄空肠灌注治疗ANP大鼠可减少胰腺组织IL-6、IL-8、TNF-α mRNA的表达,从而减轻胰腺的病理损伤.     

幽门螺杆菌HpaA减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建及免疫原性检测

目的 构建含幽门螺杆菌(H．pylori)hpaA基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法 应用PCR方法从H．pylori标准菌株基因组DNA中扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应鉴定。重组载体pIRESrhpaA转化入减毒鼠伤寒沙门菌LBS000,抽提质粒,再转化入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。重组载体pIRES-hpaA通过脂质体法转染CCXS-7细胞,SDS-PAGE及Western印迹法检测pIRES-hpaA表达HpaA蛋白的免疫原性。结果 成功扩增出长约750bp的hpaA基因,测序结果表明扩增出的hpaA基因与H．pylorihpaA序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES,成功构建了含hpaA基因的幽门螺杆菌核酸疫苗pIRES-hpaA,并成功构建了幽门螺杆菌hpaA基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,Western印迹法检测到了特异性的蛋白条带。结论 构建了具有免疫反应性的H．pylori hpaA减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其免疫作用奠定了基础。     

人胰液蛋白质组的双向电泳方法初步研究

目的 在已有实验基础上进一步建立优化的用于人胰液差异蛋白质组研究的双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)方法;探讨利用混合胰液进行胰腺疾病的胰液差异蛋白质组学的可行性.方法 通过ERCP术中放置鼻胰管引流收集5例胰腺癌(其中2例手术病理分别为胰腺中分化导管腺癌及导管内乳头状瘤癌变,另外3例经影像学检查结合临床诊断)和6例慢性胰腺炎胰液标本,取其中一例慢性胰腺炎胰液标本,通过改进胰液标本的处理方法、泡胀液的组成和一向等电聚焦条件后进行双向凝胶电泳,并和先前实验条件下的胰液2-DE图谱进行比较分析;同时利用优化后的双向凝胶电泳方法比较单份胰液和同病种混合胰液标本的2-DE图谱.结果 应用优化的2-DE方法,在胰液蛋白质加样量为200 μg时,可见凝胶上约有280个蛋白质点,有较好分辨率,较原条件下电泳图谱有较大改进.单份胰液和同病种混合胰液标本的2-DE图谱有较高程度的相似性(>75%).结论 优化后的胰液2-DE方法切实可行,通过各不同胰腺疾病混合胰液的2-DE图谱差异比较可为胰腺疾病的胰液差异蛋白质组学研究建立良好的基础.     

甲基转移酶3B基因在胰腺癌中的表达

目的 检测胰腺癌组织中甲基转移酶3B(DNMT3B)基因表达,分析其与胰腺癌临床病理参数的关系.方法 应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测42例胰腺癌组织及相应癌旁组织、10例正常胰腺组织中DNMT3B mRNA和蛋白表达.结果 胰腺癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织DNM33B mRNA表达量分别为9.4±5.9、1.02±0.71和0,相差非常显著(P<0.05);DNMT3B蛋白表达阳性率分别为83.3%、14.3%和10.0%,相差也非常显著(P<0.01).DNMT3B mRNA表达与I临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关(P<0.05或P<0.01);DNMT3B蛋白表达与肿瘤的部位、淋巴结转移有关(P<0.01或P<0.05);DNMT3B mRNA和蛋白表达均与年龄、性别、神经浸润、肿瘤大小、血CEA和CA19-9浓度无关.结论 胰腺癌DNMT3B mRNA和蛋白高表达提示胰腺癌已发生淋巴结转移,预后较差.     

p38MAPK抑制剂对大鼠急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的保护作用

目的 探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠合并肺损伤的保护作用.方法 54只雄性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组和SB203580(干预)组,每组18只.以左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立大鼠ANP模型,对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水,干预组在制模前腹腔注射SB203580(用二甲基亚枫溶解配制成10 μmol/L)5 mg/kg体重.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血测淀粉酶、TNF-α和IL-6含量,行胰腺及肺组织病理学检查,计算肺组织湿/干重比,测髓过氧化酶(MPO)含量,RT-PCR法检测中性粒细胞趋化因子(C1NC) mRNA表达,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达.结果 术后6h,对照组的血淀粉酶、TNF-α和IL-6含量、肺组织湿/干重比、MPO活性、CINC mRNA及p-p38MAPK蛋白表达量分别为(1035±73) U/L、(0.94±0.16) μg/L、(4.77±0.86) μg/L、3.92±0.29、(0.39±0.02) U/g、0.28 ±0.04、0.09±0.04;ANP组分别为(5848±656)U/L、(3.84±0.32) μg/L、( 103.54±15.32) μg/L、4.97±0.47、(1.03±0.08) u/g、0.62±0.06、0.52±0.14;干预组分别为(4259±286) U/L、(1.64±0.21) μg/L、(76.56±11.46) μg/L、4.32±0.34、(0.78±0.05)U/g、0.37±0.04、0.27 ±0.08.ANP组的各项指标均显著高于对照组,干预组的各项指标均显著低于ANP组,但仍显著高于对照组(P值均＜0.01).结论SB203580可通过阻断p38MAPK信号通路,在一定程度上减少炎症因子的产生,减轻ANP大鼠胰腺及肺组织损伤.