急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺代谢特征分析

目的 对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠离体胰腺组织块行高分辨魔角旋转核磁共振波谱分析(HR-MASNMR),探索其代谢变化特征.方法 按完全随机法将30只Wistar大鼠分为ANP组(20只)和对照组(10只).ANP组大鼠经腹腔分2次注射L-精氨酸2.5 mg/g体重方法 制备,对照组仅注射等容积的生理盐水.运用HR-MASNMR分析两组离体胰腺组织代谢物的含量.结果 造模12 h后,胰腺水肿伴出血、实质内大片凝固性坏死、间质中炎性细胞浸润,并见胰周脂肪皂化;血清淀粉酶水平为(3527±429)U/L,显著高于对照组的(1250±188)U/L.波谱分析显示ANP组胰腺组织的牛磺酸(Tau)、乙酸(Ace)、丙氨酸(Ala)波峰下面积较对照组显著增加(P＜0.05);甜菜碱(Bet)、磷酸胆碱+甘油磷酸胆碱(Pc+Gpc)含量较对照组降低(P＜0.05);胆碱(Cho)、谷氨酸(Glu)、乳酸(Lac)波峰下面积与对照组无明显差异.结论ANP大鼠离体胰腺组织块具有显著的代谢特征,为进一步开展人类重症急性胰腺炎在体波谱研究奠定了实验基础.     

细胞外调节蛋白激酶在大鼠急性坏死性胰腺炎发病机制中的作用

目的 研究细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated kinase 1/2,ERK1/2)信号转导通路在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)时的变化规律,探讨ERK1/2特异性抑制剂PD98059对ANP时胰腺的保护作用.方法 以5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立ANP模型,5只大鼠作为正常组,余75只大鼠按数字表法随机分为假手术组、ANP组及PD98059组,各25只.术后15 min、30 min、1 h、3 h和6 h分批处死动物,取血及胰腺组织.常规胰腺病理检查并评分;ELISA方法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α水平;酶化学法检测胰腺组织内MPO活性;Western blotting法检测胰腺组织磷酸化ERK1/2的表达量.结果 假手术组胰腺无明显病理改变;ANP组胰腺损伤明显,3 h的病理评分为9.9±0.4,PD98059组胰腺损伤减轻,3 h病理评分为4.0±0.4,与ANP组相差显著(P<0.05).假手术组、ANP组和PD98059组大鼠3 h时血清TNF-α水平分别为(65.8±20.5)pg/ml、(286.5±50.3)pg/ml、(180.4±32.9)pg/ml;IL-1β水平为(85.8±25.5)pg/ml、(293.8±46.3)pg/ml、(200.5±33.6)pg/ml;胰腺MPO活性为(0.19±0.02)U/g、(0.61±0.05)U/g、(0.52±0.03)U/g.ANP组和PD98059组均显著高于假手术组,而PD98059组又显著低于ANP组(P值均<0.05).正常大鼠胰腺磷酸化ERK1/2表达量为1100±141;ANP组15 min、30 min时磷酸化ERK1/2表达量分别为5300±486、5621±384,1 h开始下降,6 h时几乎与假手术组相似;PD98059组造模后15 min、30 min的磷酸化ERK1/2表达量分别为4200±370、3600±290,显著低于同时间点ANP组(P值均<0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与大鼠ANP发病机制,PD98059干预可减少IL-1β、TNF-α的产生,降低胰腺组织MPO活性,改善胰腺的病理损伤程度.     

SUFU在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨SUFU蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组化法检测SUFU蛋白在28例胰腺癌手术切除标本、20例癌旁咦腺组织及4例正常胰腺组织中的表达,分析其与胰腺癌临床病理特征间的关系.结果 SUFU蛋白阳性表达于胰腺导管癌细胞的胞质和胞核,阳性表达率为78.6%(22/28),其中+6例,++13例,+++3例.癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中导管、腺泡和胰岛均未见SUFU蛋白表达,与咦腺癌组织比较,相差显著(P＜0.05).胰腺癌组织SUFU蛋白高表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴转移和肝转移无关,而与肿瘤的临床分期之间呈正相关(P＜0.05).结论 SUFU蛋白在胰腺癌组织中高表达,对胰腺癌发病具有一定作用.     

左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立轻、重两种急性胰腺炎模型

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是发生于胰腺的炎症性疾病,建立合适的动物模型有助于其研究.目前较多采用逆行胆胰管注射法制备急性坏死性胰腺炎(ANP)模型和腹腔注射雨蛙素制备急性水肿性胰腺炎(AEP)模型.本文采用不同浓度的左旋盐酸精氨酸腹腔注射建立两种AP模型,现报告如下.     

应激状态下胃粘膜组织ECE-1 mRNA表达变化及其意义

为探讨内皮素转化酶(ECE) 1mRNA表达在应激性溃疡(SU)发病中的意义 ,以大鼠冷束缚应激性 (CRS)胃溃疡为模型 ,采用放免、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及斑点杂交 (Dotblot)等方法 ,动态检测应激前后血浆胃粘膜组织内皮素 1(ET 1)含量、ECE 1mRNA表达水平、胃粘膜血流量(GMBF)及溃疡指数(UI)等指标的变化情况。结果显示 :与正常对照组相比 ,应激组大鼠血浆胃粘膜组织ET 1水平明显升高 (P <0 0 5 ) ,GMBF明显下降 (P <0 0 1)及UI明显增加 (P <0 0 1) ;胃粘膜组织ET 1水平与UI呈显著正相关 (r=0 98,P <0 0 1) ,而与GMBF呈显著负相关 (r=- 0 89,P<0 0 5 )。RT PCR及Dotblot显示各应激组胃粘膜组织中ECE 1mRNA表达水平均较正常对照组明显升高 (P <0 0 1) ,且分别与胃粘膜ET 1水平及UI呈显著正相关 (r=0 93 ,0 95 ,P <0 0 1) ,与GMBF水平呈显著负相关(r=- 0 91,P <0 0 5 )。提示在冷束缚应激诱发大鼠SU形成过程中 ,胃粘膜组织可显著增加ECE 1mRNA的表达水平与ET 1水平 ,从而参与SU的病理生理过程 ,其作用机制可能与其降低胃粘膜血流量有关     

胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的作用

目的:探讨胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值.方法:应用突变富集聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)法检测胰腺疾病胰管刷检标本K-ras基因第1外显子第12密码子点突变.结果:35例胰管刷检标本PCR扩增均获成功,成功率100％.20例胰腺癌中14例检测到K-ras突变,7例慢性胰腺炎1例K-ras突变,两组间差异显著(P<0.05).胰腺囊腺瘤、十二指肠乳头癌均未见K-ras突变.胰管刷检标本K-ras突变与胰腺癌部位无关.胰管刷检K-ras突变检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性、准确性分别为70％、94％、83％.结论:检测胰管刷检标本中K-ras基因突变有助于提高胰腺癌的诊断,具有良好的临床应用前景.     

胰腺癌患者血清十二种肿瘤标记物的变化

目的探讨定量测定胰腺癌患者血清12种肿瘤标志物的临床意义.方法用蛋白芯片技术定量测定42例正常人、30例胰腺癌和16例胰腺炎患者血清12种肿瘤标志物的变化并对检测效果进行评价.结果 42例正常人血清CA19-9(KU/L)、NSE(μg/L)、CEA(μg/L)、CA242(KU/L)、Ferritin(μg/L)、β-HCG(μg/L)、AFP(μg/L)、f-PSA(μg/L)、PSA(μg/L)、CA125(KU/L)、HGH(μg/L)和CA153(KU/L)的含量分别为:12.42±10.62、2.24±1.41、1.78±1.04、5.73±5.67、91.17±78.47、0.64±0.33、2.96±3.89、0.13±0.11、0.62±1.38、5.46±9.53、1.63±2.37、9.83±9.40;30例胰腺癌患者血清12种肿瘤标志物含量依次为:279.47±402.0、9.50±11.30、8.57±21.95、98.23±89.33、301.98±216.63、1.49±2.28、5.50±7.69、0.27±0.62、1.62±3.23、167.16±252.49、3.38±8.38、43.22±99.34;16例胰腺炎患者其含量依次为:53.38±86.38、12.78±28.50、1.20±0.94、22.99±51.13、343.43±308.27、3.63±11.99、5.09±3.66、0.10±1.32、0.66±0.61、98.67±212.23、1.79±1.63、4.15±2.13.该蛋白芯片测定的敏感性为70.0%,特异性为89.7%,阳性预测值为77.8%,阴性预测值为88.1%. 结论采用蛋白芯片技术同时测定患者血清中多种肿瘤标志物,对普查肿瘤和临床疗效观察有较好应用价值.     

血清白细胞介素1β与溃疡性结肠炎的关系

目的 :测定溃疡性结肠炎 (U C)患者血清中白细胞介素 1β(IL - 1β)的含量 ,并分析其与 U C病变范围、病变程度和复发与否的关系 ,以及治疗前后的变化。方法 :收集经内镜证实的 UC患者血清 6 4例 ,采用 EL ISA法测定血清中 IL - 1β的含量 ,正常对照为健康献血者血清。 结果 :UC患者 IL - 1β的含量 (10 .8± 14 .0 ) pg/ ml显著高于正常对照 (1.8± 0 .6 ) pg/ ml (P<0 .0 1)。不同病变范围 IL - 1β含量 ,愈合者、直肠病变、直乙状结肠、左半结肠及全结肠分别为 (6 .4± 8.6 )、(9.0± 11.0 )、(8.3±7.8)、(19.8± 14 .6 )和 (15 .5± 2 3.3) pg/ ml,左半结肠病变与愈合期者比较有统计学差异 (P<0 .0 5 )。不同病变程度 IL - 1β含量 :0级为 (6 .4± 8.6 ) pg/ ml,1～ 3级分别为 (6 .2± 6 .2 )、(11.2± 12 .6 )和 (16 .9± 19.7) pg/ m l,其中 3级较 0级有明显增加(P<0 .0 5 )。初、复发患者及治疗前后 IL - 1β含量均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :UC患者血清中 IL - 1β含量随病变程度的加重而增加 ,治疗后明显下降。表明 IL - 1β的变化对溃疡性结肠炎严重程度和预后的判断及指导治疗有一定参考价值     

一氧化氮合酶在心理性应激胃黏膜损伤中作用

目的：探讨躯体性及心理性应激状态下大鼠胃黏膜一氧化氮合酶（NOS）及其相关药物与胃黏膜损伤发生的关系。方法：采用高压恒流脉冲刺激器复制胃粘膜损伤模型，将120只雄性SD大鼠随机分为4组：对照（C）组、规则光（R）组、不规则光（I）组及药物（r)组，分光光度法检测NOS活性和Nils Lambecht法测定胃黏膜损伤指数，使用兔源大鼠NOSⅠ（结构型NOS，cNOS)、NOSⅡ（诱导型NOS，iNOS)和NOSⅢ（内皮型NOS，eNOS)多抗，采用免疫组织化学方法研究NOS的分布规律。结果：正常情况下NOS活性平稳，心理性应激后，大鼠胃黏膜NOS活性明显升高（P＜0．05）；与C组比较，R、I组胃黏膜损伤指数均较高，且I组较R组变化显著（P＜0．05）；NOSⅠ和NOSⅢ在3组中均有表达，而NOSⅡ只在R、I组中表达，且其表达无明显差异（P＞0．05）；3种药物均使酶活性下降，其中左旋精氨酸甲酯（L－NAME）最为显著（P＜0．01），其使损伤指数增加；左旋精氨酸（L－Arg）和氨基胍（AG）使损伤指数降低（P＜0．05）。结论：心理性应激程度愈高，胃黏膜损伤愈严重，胃黏膜损伤程度及NOS活性变化与心理性应激程度关系密切，其分布变化似乎与心理性应激程度无关；L－NAME加重胃黏膜损伤，而L－Arg和AG有保护作用。