人胰腺癌胰液蛋白质谱差异表达初步分析

目的 应用蛋白质组学方法 分析胰腺癌胰液与慢性胰腺炎、胆总管结石患者胰液问差异蛋白质的表达,初步探索胰液中可能的胰腺癌标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.方法 内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)放置鼻胰引流管收集患者胰液,双向凝胶电泳(2-DE)分离5例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和3例胆总管结石患者等量混合胰液的蛋白质,运用图像分析软件进行比较和分析,识别差异表达蛋白质.应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定部分差异蛋白质点.结果 收集到胰液总量35～200 ml,Bradford法测定蛋白质浓度为0.8～4.6 μg/μl.胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者等量混合胰液凝胶的蛋白质点数分别为196±12、209±15和199±10,三组间两两对比后的平均匹配率均在75%以上.部分差异蛋白质点经MALDI-TOF-MS鉴定显示:相比胆总管结石和慢性胰腺炎,转甲状腺素蛋白(TTR)二聚体支链A在胰腺癌患者胰液中表达增高;载脂蛋白A1(ApoA-1)支链A、胰石蛋白支链、Reg1β再生蛋白前体表达降低.结论 人胰腺癌、慢性胰腺炎和胆总管结石患者胰液的蛋白质谱存在一定的差异,TTR、ApoA-1、胰石蛋白和Reglβ再生蛋白可能成为胰腺癌胰液中的肿瘤标志物,为临床胰腺癌和慢性胰腺炎的鉴别诊断提供依据.     

非糜烂性反流病内脏高敏感的外周与中枢机制研究

目的研究非糜烂性反流病(NERD)患者食管腔内气囊扩张刺激-脑诱发电位(ED-CEP)的特征及其食管黏膜中降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)表达的改变,探讨NERD内脏高敏的机制。方法收集第二军医大学长海医院消化内科2004-10—2005-03NERD患者26例和健康对照者12名,采用ED-CEP技术记录分析CEP的变化,并观察远端食管黏膜组织中CGRP、SP免疫反应阳性产物的分布和表达。结果NERD患者CEP波形变异性大,其N1、P1、N2波潜伏期明显缩短(P<0·05),CEP的P1-N2峰间波幅也明显增加[(7·8±3·2)μV对(6·2±1·9)μV,P=0·03]。其远端食管黏膜的CGRP、SP阳性产物OD值分别较对照组升高[(0·46±0·16)对(0·23±0·10),(0·42±0·12)对(0·29±0·05)](P<0·05)。结论NERD患者ED-CEP和食管黏膜中CGRP、SP的表达与对照组存在差异,提示NERD患者的食管-中枢内脏感觉传导通路存在一定的异常改变。     

蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对VacA空泡活性的影响

目的　幽门螺杆菌 (Hp)的空泡毒素 (VacA)受体属于与细胞信号转导密切相关的受体蛋白酪氨酸磷酸酶家族 (RPTP) ,但VacA导致空泡形成的具体机制尚不清楚。研究干扰信号转导后空泡形成的变化 ,可为临床治疗有毒Hp菌株感染提供新思路。 方法　采用Hp液体培养上清浓缩液作为粗制VacA毒素 ,将蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (PTPI)及蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (PTKI)木黄酮倍比稀释后 ,与VacA共同作用于胃癌细胞 ,观察VacA空泡毒性的变化。结果　PTPI浓度达到 2 .7μmol/L时 ,即产生对VacA空泡活性显著的抑制作用 (A550 =0 .46± 0 .0 6比 0 .5 9± 0 .0 4,P <0 .0 5 ) ,至 2 1.5 μmol/L时抑制作用可达 10 0 % (A550 =0 .0 9± 0 .0 2 )。PTPI浓度高于 2 1.5 μmol/L时可见部分细胞死亡。将PTPI作用于已产生空泡的细胞 ,采用能引起空泡抑制作用的 4个浓度梯度 2 1.5、10 .8、5 .4及 2 .7μmol/L ,2 4h后PTPI组与空白对照相比 ,A550 无显著差异。 16～ 5 0 0 μmol/L浓度木黄酮均未对空泡活性产生明显的影响。结论　PTPI对VacA空泡活性具有显著的抑制作用 ,间接证实VacA受体的属性为受体RPTP ,VacA毒素的作用可能与干扰细胞内的信号转导过程有关     

125I粒子组织间植入治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨125I粒子组织间植入治疗胰腺癌的有效性.方法 Balb/c裸鼠腋下接种人胰腺癌SW1990细胞.按植入剂量不同将成瘤后裸鼠分为对照组和50 Gy、100 Gy、150 Gy、200 Gy组,每4 d测量肿瘤体积,21 d后处死裸鼠,称瘤重,计算肿瘤抑制率,常规病理检查,TUNEL法检测凋亡细胞.结果 对照组、50 Gy组、100 Gy组、150 Gy组及200 Gy组抑瘤率分别为0、(42.8±16.2)%、(55.1±22.3)%、(72.8±12.8)%及(75.6±8.6)%;以粒子为中心的肿瘤坏死面积分别为(6.3±2.1)%、(20.8±3.2)%、(36.3±3.1)%、(64.1±2.8)% 及(82.6±3.8)%;相对凋亡指数分别为1、2.07±0.57、2.75±0.33、4.64±0.45及7.04±0.34,各治疗组均显著高于对照组(P＜0.05).结论 125I粒子组织间植入可显著抑制肿瘤生长,放射粒子具有直接杀死肿瘤细胞和诱导凋亡双重作用.     

Gli基因在胰腺癌中的表达变化及其临床意义

背景：研究发现Hedgehog信号通路的异常活化与胰腺癌发生密切相关，三种Gli核转录因子在Hedgehog信号通路中发挥不同的核转录效应。目的：探讨Gli基因在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达水平及其临床意义。方法：收集24例胰腺癌组织和19例正常胰腺组织．以定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Gli mRNA的表达量，分析其表达变化，并探讨与相关临床参数的关系。结果：与正常胰腺组织相比，胰腺癌组织的三种GE基因mRNA表达量显著升高（P〈0．05），且Glil、Gli2 mRNA 表达量与Gli3 mRNA 表达量呈正相关。Gli2 mRNA高表达与淋巴结转移相关。结论：三种Gli基因与胰腺癌发生呈一定联系，且三者之间可能存在一定相互协同作用；将三者作为一个整体进行调控可更好地控制Hedzehoz信号通路。     

RNA干扰DNA甲基转移酶1对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察以DNA甲基转移酶1(DNA methy transferas 1,DNMT1)基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA(N-siRNA).实验分为空白对照组、脂质体组(仅予脂质体)、N-siRNA组(转染30 nmol N-siRNA)、siRNA组(转染30 nmol siRNA).siRNA转染48 h后,实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平;WST-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡.结果 siRNA组DNMT1 mRNA的抑制率为(86.0±4.3)%,明显高于N-siRNA组的(40.1±2.2)%和空白对照组的0(P＜0.01);细胞存活率为(47.6±5.6)%,明显低于N-siRNA组的(68.1±4.1)%和空白对照组的100%(P＜0.01);细胞凋亡率为(14.94±2.89)%,明显高于空白对照组的(7.51±1.12)%、脂质体组的(7.06±0.39)%、N-siRNA组的(8.84±1.44)%(均P＜0.01).结论 siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1mRNA的表达,同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡.     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的 探讨Elastase 3B(ELA3B)基因在胰腺癌中低表达的分子机制.方法 应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达.利用去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞嘧啶(DAC)处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证.结果 ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达.DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达.正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化.结论 ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一.     

Caspase-1激活的细胞因子在实验性急性重症胰腺炎肺组织中的表达

目的观察Caspase-1及其激活的细胞因子-IL-18 mRNA在实验性重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肺组织内的表达,并探讨其与肺损伤的关系.     

胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值

目的 探讨胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值。方法 应用突变富集聚合酶联反应（PCR）－单链构象多态性（SSCP）法，检测胰腺疾病胰管刷检标本K-ras基因第一外显子第12密码子点突变。结果 35例胰管刷检标本PCR扩增均获成功，成功率为100％。20例胰腺癌中14例K-ras突变（70％），7例慢性胰腺炎中1例K-ras突变（14％），两组间差异有显著性（P＜0．05）。胰腺囊腺瘤，十二指肠乳头癌均未见K-ras突变。胰管刷检标本K-ras突变与胰腺癌部位无关。胰管刷检K-ras突变检测诊断胰腺癌的敏感性，特异性和准确性分别为70％，90％和83％。结论 检测胰管刷检标本中K-ras基因突变有助于胰腺癌的诊断，具有良好的临床应用前景。     

血浆微小核糖核酸联合检测对胰腺癌的诊断价值

胰腺癌早期发现困难、预后极差,是实体癌中生存率最低的恶性肿瘤,手术切除率仅为10％～15％,在可切除的胰腺癌中早期胰腺癌仅占15％[1].血清糖类抗原(CA)19-9为目前常用的胰腺癌诊断标志物,但在可切除胰腺癌中只有65％的患者有血清CA19-9升高,而且约有40％的慢性胰腺炎有CA19-9升高.因此血清CA19-9并不能很好地鉴别胰腺癌与慢性胰腺炎,CA19-9在胰腺癌诊断中的敏感性为70％～80％[2],而特异性甚至不到50％[3],这就需要发现新的胰腺癌肿瘤标志物.目前的研究结果表明微小核糖核酸(miRNA)参与了肿瘤进展的分子调控,并在胰腺癌组织中显著高表达,而且与胰腺癌的预后相关[4].本研究拟对胰腺癌患者血浆miRNA联合检测并评价其对胰腺癌的诊断价值.