尿源干细胞及其外泌体治疗肾脏病的作用北大核心

背景:尿源干细胞为尿液中存在的间充质干细胞,具备自我增殖与多向分化的潜能,由于其本身存在于泌尿系统,并且很可能来源于肾脏组织,相较于其他间充质干细胞存在先天的优势,因此尿源干细胞及其外泌体可能具备对于肾脏病的特殊干预作用。目的:综述尿源干细胞及其外泌体的生物学特性,以及二者在肾脏病领域的应用进展,以期为临床肾脏疾病的治疗提供新思路。方法:以“urine-derived stem cell*,urine-derived stromal cell*,urine-derived mesenchymal stem cell*,urine-derived mesenchymal stromal cell*,urine-derived progenitor cell*,kidney diseases,acute kidney injury,diabetic nephropathies,kidney failure,chronic,tissue engineering,organoids”为检索词检索PubMed数据库,以“尿源干细胞,急性肾损伤,慢性肾病,糖尿病肾病,组织工程,类器官”为检索词检索CNKI数据库,发表时间限定为2000年1月至2021年10月。检索后严格按照纳入和排除标准进行人为筛选,最终纳入31篇文献进行综述。结果与结论:①尿源干细胞作为泌尿系统来源的间充质干细胞,具备间充质干细胞共有的特性。此外,其在肾脏病领域是一种有效的干预措施和适宜的种子细胞来源;②尿源干细胞及其外泌体在急性肾损伤动物及细胞模型上,可以显著缓解肾功能损害和组织学损伤,抑制炎症、细胞凋亡和氧化应激;在慢性肾脏病(包括糖尿病肾病)方面,尿源干细胞及其外泌体可以延缓肾功能进展及组织学改变,抑制炎症细胞浸润及纤维化,发挥对足细胞的保护作用;此外,其在肾脏组织工程与再生医学领域的应用也同样具有广阔的前景;③虽然尿源干细胞及其外泌体在肾脏病领域的研究尚处于初始阶段,但已体现出较大的潜力和价值,在未来有望成为临床肾脏病治疗的有效手段之一。     

用双单克隆抗体ELISA定量测定人血清载脂蛋白B_1

本实验采用自身不分泌型的Sp2/0骨髓瘤细胞与纯化的载脂蛋白B_(100)(apo B_(100))免疫BALB/c小鼠脾细胞融合。经筛选、检测获得三株分泌apo B_(100)的杂交瘤细胞系,制备了高效价的apo B_(100)单克隆抗体(McAb)。用此McAb建立了检测血清(浆)apo B_(100)抗原的双McAb-ELISA间接夹心法,采用同样的抗apo B_(100)McAb作为包被和第二抗体,以酶交联物作指示抗体。结果表明该法板内变异系数为2.01％。在已知apo B_(100)含量的样品中加入不同浓度的参考标准进行回收实验,低、高浓度各测四次,结果平均回收率为98.20％,102.12％。经     

红外多波长无创人体血糖检测阵列模型的研究

无创血糖监测不仅可以减少患者的痛苦，还能进行连续测量，从而降低并发症的发生，它是一种不需收集血样进行体内血糖浓度测量的新技术。本文根据朗伯-比尔定律(The Lambert—Beer Law)原理，为克服无创血糖检测研究中的难点和缺陷，详细分析了血糖红外光谱的吸收特性，利用阵列技术设计了红外多波长无创血糖检测传感器阵列模型，对关键技术进行了讨论。用ME算法建立了信号检测和标定数学模型，结合了人体各种影响因素，使红外无创血糖检测的精度和稳定性得到了改善。列举了详细的实验实施步骤，同时叙述了系统调试的详细过程，讨论了无创血糖检测中需要注意的问题。     

Caveolin-1对MGC803细胞增殖、分化的影响及其机制

为了研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响，探讨caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性，用Lipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系MGCS03／Cav-1，并将空载体转染MGC803作为对照(MGC803／pcl-neo)。采用免疫细胞化学及western blot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。     

幽门螺杆菌基因hp0231和hp0410的克隆表达及生物信息学分析

目的获取幽门螺杆菌hp0231和hp0410基因的序列,预测其编码蛋白HP0231和HP0410作为候选疫苗的可行性,在大肠杆菌表达系统中表达hp0231和hp0410。方法提取幽门螺杆菌标准株NCTC11639的基因组DNA,按照GenBank中幽门螺杆菌标准株22695的序列设计引物PCR,扩增hp0231和hp0410基因,克隆入pMD18-T载体中测序,进行生物信息学分析。将hp0231和hp0410克隆入表达载体pGEX-4T-1中,诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定。结果生物信息学分析表明HP0231和HP0410均为外膜蛋白,具良好的抗原性,并且与其他生物的同源性较低,其作为Hp疫苗不易产生交叉反应以及自身免疫性反应,构建的重组菌可高水平表达可溶性重组蛋白。结论HP0231和HP0410是有良好应用前景的Hp候选疫苗。     

极低频脉冲电磁场对新生大鼠成骨细胞的影响

目的：观察极低频脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields，PEMF）对体外培养成骨细胞增殖、分化、体外矿化的影响。方法：采用频率为15Hz、强度为5mT、占空比为15％的PEMF作用于成骨细胞，检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性以及体外矿化指标。结果与结论：PEMF显著促进成骨细胞增殖和体外矿化，抑制ALP活性作用。     

应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位

目的 筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法 以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果 经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论 用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.     

血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究

本文报告应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了抗人血红蛋白单克隆抗体(Hb-McAb)。经实验证明，Hb—McAb局有特异性强，效价高、使用简便，安全等优点，可作为大肠癌早期诊断的初筛指标。     

老年人肾脏疾病血液流变性变化的临床研究

本文研究了35例经临床确诊为老年人肾脏疾病病人的血液流变性变化,结果表明:老年人急性肾炎组全血比粘度、红细胞压积较对照组低(P<0.01)。慢性肾小球肾炎组唯有血沉高于对照组(P>0.05),老年人肾病综合症组处于高凝状态,老年人肾功能衰竭组红细胞压积明显低于对照组(P<0.01),尿毒症期血小板粘附率降低,血浆纤维蛋白原明显升高,说明肾衰时,老年人处于低凝状态。提示进行血液流变性检查对老年人肾病是必要的。     

PCR快速检测幽门螺杆菌

应用ＰＣＲ扩增１５个幽门螺杆菌分离株的ＤＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条２９８ｂｐ的区带，而１２株与幽门螺杆菌相关的肠道杆菌都不能扩增出该片段。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能检出胃粘膜活检标本中的此菌，全部实验可在５小时内完成。