Vav1与浸润T细胞活性肿瘤局部IDO表达相关性的研究

  目的  通过对Vav1与肿瘤浸润T淋巴细胞（tumor infiltrating T lymphocytes,TIL-T）活性关系的研究,提出T细胞失能的可能分子机制;初步探讨TIL-T中Vav1的表达情况及其与肿瘤局部微环境中吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygen? ase,IDO）表达的相关性。  方法  收集天津医科大学附属肿瘤医院肺外科手术切除的新鲜肺癌标本、癌旁正常肺组织及蜡块40例,通过实时定量RT-PCR检测TIL-T中Vav1 mRNA表达变化;免疫印迹及免疫沉淀技术检测Vav1蛋白表达及磷酸化活性。BrdU法检测T细胞增殖活性。此外,运用Real time-PCR法检测肺癌组织中IDO mRNA表达水平,免疫印迹及免疫组化检测IDO蛋白表达情况。  结果  部分肺癌局部浸润的T细胞处于功能抑制状态,这种抑制状态可能与细胞内重要的信号传导蛋白Vav1的表达量及活性相关。IDO表达阳性组肺癌标本局部TIL-T中Vav1 mRNA水平及Vav1蛋白的表达和磷酸化水平明显低于IDO表达阴性组（P < 0.05）。  结论  Vav1的表达和活化在TIL-T功能中具有重要的作用。肿瘤局部微环境中的IDO蛋白可能是影响TIL-T中Vav1表达和活化的重要因素之一。IDO可能通过抑制Vav1的表达及磷酸化活化过程,使TIL-T的主动免疫受损,从而降低宿主的抗肿瘤免疫效应。      

中药刺桐抗氧化成分的分离与活性评价研究

采用95%乙醇对刺桐中化学成分进行了分离提取,采用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水作为溶剂对95%乙醇提取物进行了进一步的分离提取,获得4个不同极性的提取部位。以抗坏血酸（VC）做为阳性对照,利用清除二苯代苦味酰基（DPPH）自由基法和铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）法对4个不同极性的组分进行抗氧化活性评价,研究结果表明,中药刺桐具有较好的抗氧化能力,其中,乙酸乙酯部位（EVE）抗氧化能力最强,为此,我们利用硅胶柱色谱对乙酸乙酯部位（EVE）进行了进一步分离,共获得10个组分。采用上述活性评价的方法对所获得的乙酸乙酯10个组分进行了抗氧化活性评价,发现EVE-B组分抗氧化活性最高,其清除DPPH自由基能力（IC50=8.42μg·L^-1）强于阳性对照VC（IC50=9.51μg·L^-1）,总抗氧化能力远远高于VC。