再生障碍性贫血外周血Th1／Th2、Tcl／Tc2异常的临床意义

多数获得性再生障碍性贫血（简称再障）是T细胞介导的自身免疫性疾病。儿童再障强化免疫抑制治疗（intensive immunosuppressive therapy，IIST）有效率达71．8％，但至今未有明确的疗效预测指标。采用流式细胞术观察20例特发性再障儿童外周血辅助性T细胞（helper—T cell，Th）亚型（Th1、Th2）和细胞毒T细胞（cytotoxic—Tcell，Tc）亚群（Tc1、Tc2）水平，试图探讨Th1／Th2、Tc1／Tc2改变与病情、免疫抑制治疗（immunosuppressive therapy，IST）疗效的关系。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗重型β地中海贫血

目的评估异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗β地中海贫血(β地贫)的临床疗效和合并症。方法allo-PBSCT治疗9例小儿重型β地贫,男4例,女5例;年龄2~14岁(中位数9.0岁)。同胞供者8例,亲属供者1例;供者年龄3~33岁(中位数13岁);男6例,女3例。HLA全相合7例,5/6相合1例,4/6相合1例。供者皮下注射G-CSF5μg/(kg·d)×5d,用CS3000Plus血细胞分离机采集PBSC。预处理方案以白消胺(Bu,14~20mg/kg)、环磷酰胺(CTX,160~200mg/kg)和马抗胸腺细胞球蛋白(ATG,90mg/kg)为基础,6例加用噻替哌(TT)、2例马法兰(Melph)和氟哒拉宾(Fludarabine)。移植物抗宿主病(GVHD)预防方案有:①单独环孢素(CsA)方案(2例);②CsA 短程甲氨蝶呤(MTX)方案(4例);③CsA 短程MTX 霉酚酸酯(MMF)方案(3例)。受者获得的有核细胞(NC)数10.4(4.7~18.4)×108/kg,CD34 细胞数6.7(2.1~14.9)×106/kg,CFU-GM14.2(3.5~42.9)×105/kg。结果8例患儿植入,1例同胞HLA4/6相合患儿于2次PBSCT后d 60才自体恢复。aGVHD6例,cGVHD4例。CsA、MTX联合MMF方案者无cGVHD发生,而CsA或CsA MTX的6例中发生cGVHD4例。随访时间11~67个月(中位数31个月),总生存率6/9例,无病生存(EFS)6/9例。结论allo_PBSCT是治疗地贫的有效临床方法。     

火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的效果及可能的作用机制。方法建立小鼠异基因骨髓移植GVHD模型,预处理为放疗8．0Gy,分为：对照组(n=10)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植组；火把花根片组(n=20)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植加火把花根片预防组。比较受鼠生存时间和GVHD发生情况,受鼠外周血象中白细胞、血球压积等恢复情况和骨髓细胞中嵌合体H-2D~b阳性细胞百分比以评价造血重建。在移植后不同时间点分别采用流式细胞仪检测受鼠的脾细胞中CD4~+和CD8~+以及CD25和CD69的表达。结果移植后对照组受鼠均于25天内死于GVHD,火把花根片组GVHD的发生率为20%(4/20),与对照组小鼠相比,存活率和时间明显增高和延长(P＜0．01)；存活的火把花根片组小鼠(n=4)40天时骨髓细胞中的H-2D~b阳性细胞百分比达(93．38±4．32)%。移植后10天开始,火把花根片组小鼠CD4~+和CD8~+T细胞比例明显低于对照组(P＜0．...     

再生障碍性贫血外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2异常的临床意义

多数获得性再生障碍性贫血(简称再障)是T细胞介导的自身免疫性疾病。儿童再障强化免疫抑制治疗(intensiveimmunosuppressivetherapy,IIST)有效率达71.8%,但至今未有明确的疗效预测指标。采用流式细胞术观察20例特发性再障儿童外周血辅助性T细胞(helper-Tcell,Th)亚型(Th1、Th2)和细胞毒T细胞(cytotoxic-Tcell,Tc)亚群(Tc1、Tc2)水平,试图探讨Th1/Th2、Tc1/Tc2改变与病情、免疫抑制治疗(immunosuppressivetherapy,IST)疗效的关系。     

阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究

目的探讨应用抗CD40L单克隆抗体阻断CD40-CD40L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据.方法供鼠(C57BL/6H-2b)脾T细胞作为反应细胞,受鼠(BALB/CH-2d)脾细胞作为刺激细胞,设单抗组(加抗CD40L单抗)和对照组(不加单抗),初次混合淋巴细胞培养(MLR)7天,在不同时间点采用3H-TdR掺入法检测细胞增殖率,以ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10等的水平,第5天采用流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞上CD25、CD69、CD40L和CD45RA的表达.再次MLR 5天,第1、3、5天采用3H-TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平.结果初次和再次MLR结果均显示,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组.初次MLR单抗组中CD4+T和CD8+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05);单抗组中CD4+CD25+T、CD4+CD69+T、CD8+CD25+T、 CD4+CD40L+T和CD8+CD69+T细胞比例明显低于对照组(P＜0.05),而CD8+CD40L+T和CD4+CD45RA+T细胞的比例与对照组相比无明显差异(P＞0.05).初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL-4和IL-10几乎无法测出,而单抗组培养上清中IFN-γ和IL-2的水平均明显低于对照组(P＜0.01);再次MLR后培养上清中单抗组IFN-γ、IL-2和IL-4和IL-10的分泌水平明显低于对照组(P＜0.05),但处于低水平,仍明显低于对照组.结论在体外MLR体系中,应用抗CD40L单抗孵育供鼠脾T细胞,可同时作用于CD4+T和CD8+T细胞,使CD40L+,CD25+和CD69+表达下降,引起T细胞早期的活化和成熟障碍,T细胞增殖能力减低,抑制了Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2及Th2类细胞因子IL-4和IL-10的分泌水平,可诱导供者T细胞免疫耐受.     

52例儿童特发性再生障碍性贫血的淋巴细胞免疫异常分析

本研究评价儿童特发性再生障碍性贫血（IAA）发病时淋巴细胞免疫异常的特点，以探讨儿童特发性再生障碍性贫血的免疫发病机制。应用流式细胞术检测患者发病时外周血中淋巴细胞表型、Th1／Th2和Tc1／Tc2水平，以及CD25^＋及CD4^＋CD25^＋T细胞的水平，并与正常儿童对照组的比较。结果表明：重型再生障碍性贫血（SAA）组40例，轻型再生障碍性贫血（MAA）组12例。SAA组和MAA组患者的CD3^＋CD8^＋水平较正常对照组显著增高（P〈0．05）；MAA组CD3^＋和CD3^＋CD4^＋T细胞水平均明显低于SAA组（P〈0．05）．与正常对照组比较无显著差异．SAA组和MAA组CD3^-CD19^＋水平与正常对照组比较无明显差异。SAA组和MAA组CD3^-CD56^＋水平明显低于正常对照组（P〈0．05）：与正常对照组比较SAA组和MAA组Th1和Tc1水平明显增高（P〈0．05），Th1／Th2和Tc1／Tc2比值也明显增高（P〈0．05）；SAA组伴Th2增高；SAA组Th1和Tc1水平、Th1／Th2和Tc1／Tc2比值明显高于MAA组（P〈0．05）．SAA组、MAA组CD25^＋T细胞表达较正常对照组均显著增高（P〈0．05）。SAA组、MAA组CD4^＋CD25^＋T细胞表达水平和CD4^＋CD25^＋／CD4^＋比值均无明显差异。结论：儿童特发性再生障碍性贫血发病时淋巴细胞免疫异常，Th1／Th2、Tc1／Tc2极化平衡向Th1、Tc1偏移，并且与疾病严重程度相关，以及CD25^＋T细胞表达增高，均提示淋巴细胞免疫异常在儿童特发性再生障碍性贫血患者的发病中起着重要的作用．     

体外阻断CD_(40)-CD_(40)L共刺激途径减轻小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病的研究

目的　在异基因骨髓移植移植物抗宿主病 (GVHD)小鼠模型中 ,观察抗CD4 0 L单克隆抗体 (单抗 )体外预处理供鼠T细胞输注 ,观察其减轻GVHD的作用并探讨其作用机制。方法　供鼠(C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB cH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,分别加抗CD4 0 L单抗或不加单抗进行混合培养 ,培养第 5天的细胞作为经体外诱导后的脾T淋巴细胞 ,分别混合供鼠骨髓细胞后移植给接受 8.0Gy全身照射预处理的受鼠。比较受鼠GVHD发生和造血重建。在移植后不同时间点采用流式细胞仪检测受鼠脾细胞中T细胞表型的改变 ,用ELISA法检测外周血血清中Th1和Th2类细胞因子的水平。结果　移植后对照组受鼠均于 2 5d内死于GVHD ,实验组GVHD的发生率为2 0 % ,与对照组小鼠相比 ,存活率和存活时间明显增高和延长 (P <0 0 1) ;存活的实验组小鼠 (8只 )第4 0天时骨髓细胞中H 2Db 阳性细胞为 (93.5 4± 2 .32 ) %。实验组小鼠CD3+ CD4+ 、CD3+ CD8+ 、CD4+CD2 5+ 、CD4+ CD6 9+ 、CD8+ CD2 5+ 、CD4+ CD4 0 L+ 和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,CD8+ CD4 0 L+ 和CD4+ CD4 5RA+ T细胞比例在两组中变化差异无显著性 (P >0 .0 5 )。实验组受鼠血清中细胞因子水平明显低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　应     

胎鼠血及新生鼠外周血分次移植对造血干细胞植入影响的实验研究

我们拟在建立鼠 鼠同种异体脐血移植动物模型的基础上 ,采用胎鼠血及新生鼠外周血 (ＦＮＰＢ)单次或分次移植 ,观察移植后免疫和造血重建 ,试图探讨促进脐血造血干细胞(ＨＳＣ)植入 ,提高脐血移植 (ＵＣＢＴ)效率的新策略 ,为克服ＵＣＢＴ存在的问题和进一步开发利用提供实验和应用依据。材料和方法1　动物模型　以Ｃ5 7ＢＬ/6 (Ｈ 2 ｂ)鼠 (雌∶雄 =2∶1,8～ 12周龄 ,体重 2 2～ 2 6ｇ ,中国科学院上海实验动物中心提供 )为供鼠 ,ＢＡＬＢ/ｃ(Ｈ 2 ｄ)鼠 (雌性 ,清洁级 ,8～ 12周龄 ,18～ 2 2ｇ ,中山医科大学实验动物中心提供 )为受鼠 ,…     

儿童造血干细胞移植后出血性膀胱炎：临床特征与危险因素

背景：出血性膀胱炎是造血干细胞移植后常见并发症之一，探讨其临床特征及发病的危险因素对改善造血干细胞移植效果有重要应用意义。 目的：观察小儿造血干细胞移植后出血性膀胱炎发病情况，并分析其临床特点以及发病危险因素。 设计：病例分析。 单位：中山大学附属第二医院儿科造血干细胞移植中心。 对象：选择1998—10/2004-06在中山大学附属第二医院儿科HSCT中心88例接受脐血移植与外周血造血干细胞移植患儿，男49例，女39例，年龄2-18岁，平均8．0岁。所有患儿家属对治疗知情同意。实验经过医院伦理委员会批准许可。 方法：①患儿预处理方案主要有环磷酰胺（120～200mg／kg）和马利兰（Bu，14-20mg／kg）组成为主的化疗方案。以及环磷酰胺联合全淋巴照射（2—8Gy）或全身照射（2．8Gy）组成的放疗方案。②按文献[7]及[8]标准诊断及对出血性膀胱炎分类：观察患者出血性膀胱炎发生率、临床特征、实验室检查及治疗与转归：分析年龄、性别、供受者人类白细胞抗原配型、移植病种、移植类型、移植方式、急性移植物抗宿主病的发生、巨细胞病毒感染对出血性膀胱炎发生的影响。 主要观察指标：①患儿出血性膀胱炎发生率。②临床特征与实验室检查。③治疗与转归。④出血性膀胱炎发生的危险因素。 结果：纳入患儿88例均进入结果分析。①出血性膀胱炎发生率：16例（18．2％，16，88）患儿发生出血性膀胱炎，其中轻度11例（68．7％），重度5例。②临床特征与实验室检查：患儿均有血尿，其中典型尿频、尿急、尿痛及肉眼血尿8例（50．O％）；肉眼血尿10例（62．5％）：11例蛋白尿（＋～＋＋＋），7例白细胞增高。③治疗与转归：所有出血性膀胱炎患儿均痊愈，病程2～53d。④出血性膀胱炎发生危险因素：受者移植年龄?     

间充质干细胞治疗糖皮质激素耐药性慢性移植物抗宿主病临床疗效观察

Objective To assess whether treatment with mesenchymal stem cells (MSCs) is an effective adjunct therapy for refractory extensive chronic graft-versus-host disease (GVHD) resistant to conventional therapy. Methods 12 patients with steroid-resistant extensive chronic GVHD were treated with MSCs. One patient received one dose, 10 received two doses, and the remaining three doses. The MSCs were obtained from HI,A-identical sibling donors (n = 14), haploidentical donors (n = 2), unrelated mismatched donor (n = 1) and third-party HLA-mismatched donors (n = 7). Of the 11 patients treated with multiple infusions, 5 received cells derived from two donors. The median first dose of MSCs was 1.0 (0. 4-2. 1) × 106/kg , the median second dose was 1.2(0. 8-1.9) × 106/kg , and the third dose in one patient was 1.1 × 106/kg. Meanwhile the proportion of CD3+ ,CD4+,CD8+ ,CD19+,CD4+ CD25+ ,FOXP3+,FOXP3+CD4+ and FOXP3+ CD25+ was determined with double fluorescent-labeled antibodies and flow cytometry before and 4 weeks after the MSCs infusion. Results No patients had side-effects during or immediately after the infusions of MSCs. After a treatment course of one to three doses, 3 patients had complete response(CR), 6 showed partial response(PR) and 3 did not respond; the total effective rate was 75% (9/12). Complete resolution was seen in the involvement of skin (3/12), lung (1/3), joints (1/5), liver (3/10), oralcavity (4/12) and eye (2/7). Response rate was not related to donor HLA-match. 3 CR patients discontinued all of the immunosuppressive agents without relapse 100 to 292 days after the MSC infusion and 6 PR patients taped all immunosuppressive agents after 60 to 79 days. Mean follow-up period was 1152(795-1914) days, leukemia free survival rate was 91.7% (11/12) and the overall survival rate was 75% (9/12). The ratio of CD4/CD8 and the proportion of regulatory T cells were significantly higher than that before MSCs treatment. Conclusion Third-party MSCs were as effective as HLA-identical or haploidentical cells. This finding has practical implications and suggests that third-party cells can be prepared and stored frozen to be used for steroid-resistant extensive chronic GVHD therapy. It is concluded that MSCs may prevent the lethal cGVHD after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation and raise the survival rate by increasing the ratio of CD4/CD8 and proportion of regulatory T cells in vivo.