白花蛇舌草提取液诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的:研究白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药白血痛细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法:采用MTT比色试验观察白花蛇舌草乙酸乙酯提取泣对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用(HL-60/ADR的耐药倍教为204倍).采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变.利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果:白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药41.67 mg/ml时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半敷抑制浓度(IC50)相当于生药70.41mg/ml.流式细胞学证实白花蛇舌革乙酸乙酯提取液,能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依籁性.结论:白花蛇舌草对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

多媒体在医学研究生实验基础教学中的应用

多媒体教学近几年来已经广泛渗透到各个教学领域,它借助文本、图形、动画、动静态视频和声音等媒体优势,形成一种在动能上更完善的体系,与现代医学教育的启发、诱导式教学相结合,弥补了传统教学方法上的不足[1],能使学生在较短的时间内对医学实验过程由理性认识到感性认识的转变,尽快完成实际操作。我们实验室应用多媒体教学并取得了一定的教学效果。     

骨髓间充质干细胞的体外培养及定向诱导分化

目的:探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的体外培养生长特性及其在体外定向分化为神经样细胞的条件。方法:采用Ficoll-paque(1.077g/ml)分离液密度梯度分离hMSCs,显微镜下观察其生长特性,测定生长曲线;取传至3～6代的hMSCs,用阿魏酸钠对其进行诱导培养,并以β-巯基乙醇作对照观察诱导培养后细胞的形态变化,分别在6h、1d、3d和7d通过免疫荧光细胞化学染色方法测定诱导后细胞的神经元烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glia fiber acidprotein,GFAP),进行定量分析。结果:体外培养条件下hMSCs呈长梭形,细胞生长曲线呈S形,细胞倍增时间约为72h。阿魏酸钠诱导培养后6h可见细胞形态明显变化,NSE和GFAP表达阳性。24h后诱导细胞表现为典型的神经细胞样形态。第3天,NSE和GFAP表达最高,分别为67±3.5%和39±1.8%。结论:人骨髓间充质干细胞在体外具有自我更新能力及多分化潜能;阿魏酸钠具有诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

白花蛇舌草提取液诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变，利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果①白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长．药物浓度相当于生药41．67mg／ml时．即具有显著的抑制作用，抑制率呈剂量和时间依赖性，半数抑制浓度（IC50）相当于生药70．41mg／ml。②形态学改变．呈典型的凋亡特征。③白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡，凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论白花蛇舌草对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用．诱导其凋亡是其机制之一。     

人脑神经干细胞对不同储存方式及分离培养和诱导分化条件的要求

背景近年来发现神经干细胞可于体外增殖并分化为神经细胞,是用来修复替代损伤神经组织的较为理想的来源,但是神经干细胞的培养中如何提高它的增殖能力,诱导分化成需要的表现型,尚处于研究探讨阶段.目的探讨细胞冻存和非冻存方法分离培养人脑神经干细胞及诱导其向成熟神经细胞分化的培养条件.设计以细胞为观察对象,单一样本研究.单位江西医学院泌尿外科研究所,江西医学院第二附属医院神经外科.材料实验于2003-12/2004-06在江西医学院泌尿外科研究所完成.取16周龄新鲜人胚脑组织.方法用胰蛋白酶消化法从人胚脑中分离单个细胞,细胞冻存1个月后复苏或/和新鲜细胞用无血清培养基进行体外培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞生长,用血清诱导其分化;采用免疫荧光细胞化学染色方法检测培养的细胞神经巢蛋白抗原和分化后成熟神经细胞抗原神经元特异性烯醇化酶的表达.观察碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子及血清对分离培养的人脑神经干细胞增殖与分化的影响.主要观察指标①冻存与新鲜细胞后续培养的生长状况.②细胞形态变化.③神经干细胞标志物神经巢蛋白及成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶的鉴定.结果①从胚龄16周的新鲜人胚脑中成功分离出神经干细胞.人胚脑原代细胞为圆形亮球状,培养3d后可见细胞开始聚集成神经球,部分呈悬浮生长,2周后神经球增大,部分细胞增大数倍,具有极强折光性,可见分裂增殖.经传代后细胞仍保持原有特征,细胞形态不变.克隆细胞在有血清培养基中培养,24 h后可见大部分细胞贴壁生长,细胞从神经球游出分散,形态不规则;48 h后多数细胞分化为大量形态不一的、分散成片的多突起星状细胞和神经元样细胞,突起相互交织成网.②分离出的神经干细胞在体外培养条件下传代培养,并表达神经于细胞标志巢蛋白;含血清培养基培养48h分化后的细胞主要表达成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶.③冻存复苏的细胞95%以上为活细胞,与新鲜细胞比较,细胞生长状况无明显差别.结论用无血清培养条件下结合碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的作用,使干细胞体外得到了分离培养、增殖和纯化,证实其方法可行,同时冻存和新鲜细胞的比较,说明可用冻存方法保存人胚脑细胞,复苏后使用.     

急腹症的诊断思维与鉴别诊断小结

急腹症是临床上一组常见病。病种多、起病急、发展快、病情重、病因复杂是其特点。临床实际工作中容易出现误诊、漏诊、错误治疗。如何搞好对的急腹症学诊治、培养科学性临床思维、克服诊治偏差、进一步提高临床医生的诊治水平是一个十分重要的临床课题,本文就此进行探讨总结。     

前列腺癌细胞的原代和传代培养的研究

目的探讨前列腺癌细胞的培养方法,以便建立前列腺癌细胞系,为前列腺癌的基础研究提供实验模型。方法前列腺腺癌组织来源于我院两例患者的手术标本,分别采用组织块培养法、消化培养法和裸鼠肿瘤移植动物模型法对癌组织细胞进行体外分离培养。培养细胞按恶性肿瘤连续细胞系建系标准进行各项指标检测。结果组织块培养法有一例已稳定传为13代,消化培养法有一例已稳定传为23代,裸鼠肿瘤移植动物模型法未见癌肿生长。结论组织块培养法和消化培养法均为前列腺癌细胞培养的可行方法。     

阑尾扭转致回肠肠梗阻肠坏死穿孔一例报道

我院最近收治了一例因阑尾扭转至回肠机械性肠梗阻、肠坏死、肠穿孔,比较少见,现报道如下: 病例资料: 患者男性、62岁、农民、因反复右下腹疼痛10余年、复发加重伴肛门停止排便、排气5天入院.入院时查患者急性痛苦面容、神清、差、抬入病房头颅及五官未见异常,颈软,颈阻(-)心肺未见明显异常,腹膨隆,肝脾未摸及肿大,全腹压痛,以右下腹为重,反跳痛,移浊(-),肠鸣音未闻及,余未见明显异常.入院后腹平片提示隔下游离气体.     

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用

背景骨髓细胞移植是一种简单而有效的促进新生血管生长的治疗手段.同样新生血管的形成和血液循环的再建立,对于脑缺血区域受损而未死亡神经元的修复以及为植入的组织与细胞的成活和分化提供必要的环境条件均具有重要意义.而自体骨髓细胞移植是否会促进脑缺血区新生血管的形成进行血运重建目前尚不清楚.目的探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响.设计以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位一所大学医院的神经外科和泌尿外科研究所.材料实验于2002-09/2003-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室,江西医学院泌尿外科研究所完成.选择雄性SD大鼠10只,体质量250～300 g,清洁级.干预复制局灶性脑缺血大鼠模型,经颈动脉注入自体骨髓细胞.动物随机分为实验组5只,经颈动脉注入自体骨髓细胞,对照组5只注入生理盐水.通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数,观察脑缺血区血管增生状况.主要观察指标微血管密度.F8因子免疫组化染色.结果自体骨髓细胞移植后大鼠在皮质缺血区的微血管密度为(159.15±40.4)血管数/mm2,明显较对照组大鼠(81.70±32.18)血管数/mm2多,差异有显著性意义(P＜0.05).骨髓细胞移植组皮质缺血区可见很多散在的单个内皮细胞.而相应的脑缺血对照组少见散在的单个内皮细胞.结论经颈动脉注入的自体骨髓细胞能够促进脑缺血区新生血管的形成.     

骨髓间充质干细胞体内分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)能否在体内分化为肾小管上皮细胞.方法 取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,密度梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)进行标记.32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量的生理盐水.分别于术后1 d、2 d、3 d、4 d处死大鼠,留取肾组织,荧光显微镜观察移植的MSCs在肾组织中的分布,采用能与肾小管内腔壁特异结合的蓖麻血凝素(Ricinus communis agglurinin,RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定.结果 移植组术后第三天肾组织内可见DAPI标记细胞,第四天DAPI标记细胞明显增多(P＜0.05),且多数DAPI标记细胞能结合RCA.对照组没有发现DAPI标记细胞.结论 移植的外源性MSCs能够迁移、定居于肾组织中并分化为肾小管上皮细胞.