突变型端粒酶逆转录酶基因转染对膀胱癌细胞T24增殖的影响

目的　探讨转染缺失突变的人端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因对膀胱癌细胞株T2 4端粒酶活性和体外增殖的影响 ,为膀胱肿瘤基因治疗提供新的基因靶点。　方法　采用DNA 磷酸钙共沉淀法 ,将绿色荧光蛋白基因标记的含突变型hTERT真核表达载体 pEGFP hTERT导入人膀胱癌细胞株T2 4中。应用荧光显微镜、端粒酶PCR ELISA法、与衰老相关的 β 半乳糖苷酶染色、软琼脂集落形成试验、裸鼠皮下成瘤试验等方法动态观察转染细胞中端粒酶活性及对细胞恶性表型的影响。　结果　在转染 pEGFP hTERT细胞中可见与突变型hTERT基因融合的绿色荧光蛋白稳定表达于细胞核内 ,转染细胞端粒酶活性降低 ,衰老相关 β 半乳糖苷酶表达增加 ,软琼脂中集落形成减少 ,裸鼠成瘤性降低。与转染空载体组及未转染组细胞相比 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　转染突变型人端粒酶逆转录酶基因hTERT能抑制膀胱癌细胞T2 4的端粒酶活性 ,促进其衰老并逆转膀胱癌细胞的恶性表型 ,对膀胱肿瘤基因治疗具有潜在的临床应用价值     

端粒酶反义RNA基因转染抑制裸鼠人膀胱癌移植瘤生长的研究

目的　观察端粒酶反义RNA基因转染对裸鼠膀胱癌移植瘤细胞生长的影响。方法将脂质体介导的端粒酶反义RNA真核表达载体 (pBBS hTR)、空载体 ( pBBS 2 12 )及生理盐水注入移植瘤体内 (每天 3 0 0 μl,共 7d) ,应用端粒酶活性聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)、苏木素 伊红 (HE)染色、透射电镜等连续观察 6周移植瘤组织细胞端粒酶活性和生长变化。结果　注射转染pBBS hTR组和空载体组瘤体积抑制率分别为 48.7%和 2 .8% (P <0 .0 5 )。转染pBBS hTR组端粒酶活性降低 ,细胞生长受抑制。电镜观察见典型凋亡特征。 结论　端粒酶反义RNA基因瘤体内注射转染有效地抑制裸鼠人膀胱癌细胞生长 ,具有潜在临床应用价值。     

地高辛素、生物素标记产毒性大肠杆菌 Ⅰ型不耐热肠毒素ADN探针的制备及应用

采用随机引物法制备地高辛素、生物素和~(32)P标记产毒性大肠杆菌Ⅰ型不耐热肠毒素(LT_1)DNA探针。地高辛素、生物素和~(32)P LT_1探针分别在DNA斑点杂交试验中检测到0.1pg、1pg和0.1pg的质粒DNA,在菌落原位杂交试验中检测到12、120和12个细菌/ml,在粪便斑点杂交试验中检测到24、240和24个细菌/ml。采用RNA酶A和蛋白酶K消化处理滤膜,消除了假阳性,使得地高辛素、生物素LT_1探针的特异性与~(32)PLT_1探针完全一致。检测143株自腹泻病人分离的大肠杆菌,14株(9.79％)阳性,3种探针结果相同。     

儿童感染埃及血吸虫病22例分析

作者于1987年12月至1990年1月期间,在塞内加尔中国医疗队诊治22例儿童埃及血吸虫病,现报道如下:     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌T24细胞的作用

目的 探讨全硫代修饰的端粒酶反义寡核苷酸（ASODN-t)抑制人膀胱癌T24细胞增殖并诱导其凋亡的可能性。为膀胱癌基因治疗提供新靶点。方法 采用光镜、电镜、四唑盐比色（MTT）法及流式细胞术等检测不同浓度（2-10umol/L)ASODN-t对T24细胞生长、细胞周期和诱导其凋亡的作用。结果 不同浓度ASODN-t对T24细胞生长有抑制作用。且具有序列特异性及剂量依赖性,6umol/lASODN-t作用细胞72h,电镜观察可见典型凋亡特征,流式细胞仪检测到凋亡峰,凋亡率为10.4%,而无关寡核苷酸（N-ODN）则无此作用。结论 ASODN-t对T24细胞生长有抑制作用,可诱导其发生凋亡,说明端粒酶与T24细胞恶性增殖有关。抑制端粒酶活性可能成为膀胱癌基因治疗的新靶点。     

基孔肯稚病毒单克隆抗体的研制及其特性的鉴定

最近,我国毗邻的泰国、越南及老挝等地不断发生登革出血热的流行,往往伴随基孔肯稚的流行。近年已有人从我国云南不明热患者血清中分离出一株基孔肯稚病毒(CHIK)。为开展本病毒的流行病学调查和临床检验诊断,建立了抗CHIK单     

PinX1基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的分析内源性端粒酶抑制基因PinX1在膀胱癌中的表达,探讨PinX1在膀胱癌发生、发展和预后中的作用及临床意义。方法应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例膀胱癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶反转录酶hTERT的mRNA表达水平,同时应用免疫组织化学方法检测PinX1蛋白表达水平。结果PinX1表达与膀胱癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间呈显著相关性,与hTERT表达呈负相关。结论PinX1的下调可能与膀胱癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关。检测PinX1的表达水平对评价膀胱癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。     

甲病毒属系列单克隆抗体的研制及特性鉴定

本文报道应用电融合法和PEG法建立了11种甲病毒(SIN,SF,CHIK_1,CHIK_2,EEE,WEE,MAY,GET,RR,SAG,M-1)单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别对各种McAb进行了多项鉴定。特异性试验结果表明,有亚组特异性的和种特异性的McAb。对于今后该类疾病的流行病学调查和临床诊断,以及有关毒株的鉴定具有一定实用价值。     

端粒酶反义RNA转染逆转膀胱癌T24恶性表型的研究

为了研究端粒酶反义RNA对膀胱癌T24细胞恶性表型的抑制及促进其凋亡的作用,采用脂质体转染法将能转录出端粒酶反义RNA质粒导入膀胱癌T24细胞,应用PCR－ELISA法测定转染后T24细胞的端粒酶活性;光镜、电镜、MTT法及流式细胞检测（FCM）等方法观察端粒酶反义RNA对T24细胞的生长及凋亡的影响。结果显示,端粒酶反义RNA能显著抑制T24细胞的端粒酶活性,使其生长受抑制。形态学观察转染后T24细胞出现典型的凋亡现象。FCM检测发现细胞周期G1期前出现亚2倍体峰－凋亡峰。结论：转染端粒酶反义RNA能抑制膀胱癌T24细胞的恶性表型,并促进其凋亡,从而为 以端粒酶作为膀胱肿瘤基因治疗的新靶点提供实验依据。