Ras p21单克隆抗体在人鼻咽癌及宫颈癌中表达的研究

作者采用凝胶电泳ABC染色法,以P21单克隆抗体为探针,在凝胶上直接进行免疫酶联染色,对鼻咽癌、宫颈癌,慢性鼻咽炎、慢性宫颈炎及正常宫颈组织和胎鼻咽组织进行了ras癌基因的产物P21表达的研究。结果表明,鼻咽癌及宫颈癌中P21具有过量表达,其阳性率分别为78.9％和70％。6例慢性鼻咽炎与5例宫颈炎中各有1例阳性,正常宫颈和胎鼻咽组织均为阴性。结果显示,P21在鼻咽癌及宫颈癌中的表达明显增强。     

卵巢浆液性囊腺癌中的nm23H1基因mRNA及其突变的研究

目的 探讨卵巢浆液性囊腺癌原发灶与相关淋巴结组织nm23H1mRNA表达及基因突变。方法 应用RT－PCR和SSCP技术对20例卵巢浆液性囊癌原发灶与相关淋巴结组织进行检测分析。结果 nm23H1mRNA表达水平在无淋巴结转移的卵巢癌原发灶组明显高于有淋巴结转移的原发灶组（P＜0．01）。所测组织标本未发现突变。结论 提示nm23H1mRNA表达水平可作为预测该肿瘤发生淋巴结转移的指标。卵巢浆液性囊腺癌基因改变可能不以突变为主。     

丹参酮ⅡA诱导HL-60细胞凋亡

目的：在以往对丹参酮ＩＡ诱导分化和抗癌作用研究的基础上，进一步研究丹参酮ＩＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，以探讨其抗癌作用机理。方法：应用体外细胞培养技术，以１～１０μｇ／ｍｌ丹参酮ＩＡ作用于培养的ＨＬ－６０细胞５天后，进行光镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪的观察和分析。结果：丹参酮ⅡＡ作用后，ＨＬ－６０细胞的生长受到明显抑制，其半数抑制浓度ＩＣ５０约为１０μｇ／ｍｌ光镜、电镜观察到细胞呈现凋亡特征，琼脂糖凝胶电泳显示细胞ＤＮＡ呈梯状降解，流式细胞仪分析表明，１０μｇ／ｍｌ丹参酮ⅡＡ作用后，ＨＬ－６０细胞凋亡率达２８．８％，细胞被阻止于Ｇ０／Ｇ１期，Ｓ期细胞明显减少（Ｐ＜０．０１），其ｂｃｌ－２基因的表达显著降低，而ｐ５３基因的表达增强（Ｐ＜０．０１）。结论：丹参酮ⅡＡ可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，这可能为丹参酮ⅡＡ抗癌抑癌的重要机理之一，诱导分化与诱导凋亡之间的关系有待进一步探讨。     

全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制

目的　通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法　应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论　宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8～ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。     

正常C57鼠肝,H22肝癌及S180肉瘤LD5的纯化及其性质研究

Type-A LDH (LD5), isolated from normal C57 mouse liver, H22 hepatoma and S180 sarcoma after a sequential ion-exchange and affinity chromatography, was examined to be quite pure. Studies on the enzyme kinetics and immunological properties showed that there were no differences in optimal pH, optimal temperature, subunit MW., isoelectric point between normal and malignant (H22 hepatoma and S180 sarcoma) LD5. Km to pyruvate decreased in malignant LD5 while LD5 content and percentage increased. Three LD5 antibodies raised against rabbits showed cross-reaction. These antibodies as probes are useful in the isolation of LD5-mRNAs from G57 mouse liver H22 hepatoma and S180 sarcoma.     

正常C_(57)鼠肝、H_(22)肝癌及S_(180)肉瘤LD_5的纯化及其性质研究

以正常C_(57)鼠肝、H_(22)肝癌及S_(180)肉瘤,经一系列离子交换层析及亲和层析,获得了高纯度的LD_5。对三种组织的LD_5的部分酶动力学参数、亚基分子量及等电点的比较研究表明:H_(22)肝癌及S_(180)肉瘤的LD_5对丙酮酸的K_m值较正常C_(57)鼠肝LD_5显著降低,而LD_5含量(mg/g组织)、LD_5占LDH总活性的百分率均较正常高;三种组织的兔抗鼠LD_5间呈现交叉免疫反应。本研究所获的三种兔抗鼠LD_5抗体为进一步研究癌变时LD_5活性升高的分子机理奠定了基础。     

ANALYSIS OF C-HA-RAS GENE AMPLIFICATION AND MUTATION IN LARYNGEAL CARCINOMA

In order to study the ahered molecular events during laryngeal carcinogenesis and elucidate the role of Ha-ras oncogene amplification and mutation, we have examined their profile by polymerase chain reaction (PCR) and selective oligonucleoride hybridization. We analyzed the mutational status of codon 12 of Ha-ras in 22 laryngeal carcinomas and 10 normal tissues, and found that 7 of 22 laryngeal carcinomas con-tained a Ha-ras mutation at codon 12. The frequency of mutation was 32%. None of the normal tissues re-vealed mutation. Moreover, no amplification was found in cancers when compared to the normal. Our findings indicated that the aefivmed Ha-ras gene existed in laryngeal carcinoma, and activation of the Ha-ras gene by mutation at codon 12 might play a key role in laryngeal carcinogenesis.