TIMP-4基因的克隆、原核表达及活性测定

目的：采用RT-PCR法获取TIMP-4基因,并通过原核表达获取具有生物活性的TIMP-4融合蛋白。方法：从SD大鼠心肌组织中提取总RNA,利用RT-PCR法扩增出TIMP-4基因,经基因序列分析后构建表达载体PET-28a（＋）-TIMP-4,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TIMP-4的表达。利用N2＋-NTA纯化和复性后,根据其骨肉瘤细胞迁移能力的影响检测其活性。结果：克隆到编码序列完全正确的大鼠TIMP-4基因,能在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物占全菌总蛋白的23.5%,N2＋-NTA纯化和复性后,纯度达90%以上。纯化后的融合蛋白使骨肉瘤细胞株的迁移能力得到显著抑制。结论：通过基因克隆和原核表达的方式可以大量获得具有生物活性的TIMP-4融合蛋白。     

重组鼠白细胞介素18在肝癌小鼠体内的抗肿瘤作用

目的：探讨不同剂量和输注方式的重组鼠白细胞介素18（rmIL-18）对肝癌小鼠生存时间和肿瘤生长的影响,阐明rmIL-18在体内抗肿瘤的合理应用方式。方法：60只Babl/C小鼠皮下接种小鼠肝癌H22细胞（1×10⁶个）,随机分为5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组、0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组、细胞毒性T淋巴细胞（CTL）腹腔内注射治疗组、CTL肿瘤内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组,每组10只。从接种肿瘤细胞的第10天起,各rmIL-18组小鼠每隔1d进行对应剂量和方式的注射治疗,CTL组小鼠分别腹腔和肿瘤内注射肿瘤特异性CTL（1×10⁶/只）,生理盐水腹腔注射对照组小鼠腹腔内注射注射等体积（100μL）生理盐水,共计10次。每周测量小鼠肿瘤直径,并记录生存时间。结果：与0.5μg、5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组和生理盐水腹腔注射对照组比较,0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度减慢（P<0.01）,小鼠生存时间延长（P<0.01）;与0.5μg rmIL-18腹腔内注射治疗组比较,CTL腹腔内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低（P<0.01）,小鼠存活率升高（P<0.01）;与0.5μg rmIL-18肿瘤内注射治疗组比较,CTL肿瘤内注射治疗组小鼠肿瘤生长速度降低（P <0.01）,小鼠存活率升高（P <0.01）。结论：rmIL-18抗肿瘤作用的最好途径为瘤内注射,并存在剂量依赖性。     

单宁酸对高糖和糖化终末产物培养条件下肾小球系膜细胞氧化应激及微炎症状态的改善作用

目的：探讨单宁酸对肾小球系膜细胞（GMC）的作用,从氧化应激及微炎症角度阐明单宁酸改善糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法：体外培养GMC,分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及糖化终末产物(AGEs)牛血清白蛋白（BSA,250 mg/L）处理,正常糖培养及不含糖的BSA处理的细胞作为相应对照组,在高糖或AGEs处理的同时采用不同浓度单宁酸（10、20、40和80 μmol/L）进行干预,培养48 h后检测细胞培养上清中丙二醛（MDA）水平及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,ELISA法检测细胞培养上清中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平,免疫组织化学法检测GMC中细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达,RT-PCR法检测GMC中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和ICAM-1 mRNA的表达水平。结果：与高糖组和AGEs组比较,单宁酸处理组MDA水平明显降低（P<0.05）,GSH-Px、SOD及CAT活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,GMC培养上清中8-OHdG水平明显降低（P<0.05）。与高糖组和AGEs组比较,40 和80 μmol/L单宁酸组ICAM-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与高糖组比较,单宁酸组MCP-1和ICAM-1 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：单宁酸可保护GMC免受氧化及炎症介质的损伤,从而延缓和改善DN的肾小球病变。     

低能量氦-氖激光血管内照射联合中药对糖尿病脑梗死家兔的影响

目的观察低能量氦-氖激光血管内照射（ILLLI）配合中药治疗对实验性糖尿病脑梗死家兔血浆血栓素（TXB2）、6-酮前列环素（6-Keto—PGF1α）和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平的影响。方法经四氧嘧啶造成糖尿病及光化学方法造成的高脂家兔糖尿病脑梗死模型35只，分为模型组、单纯激光照射组、糖脑络通方治疗组、激光＋中药组并进行不同治疗，测其血浆TXB2、6-Keto—PGF1α及AngⅡ水平，进行组间比较及与正常组比较。结果与模型组比较，单纯激光和中药组均能降低TXB2及AngⅡ、升高6-Keto-PGF。。水平，而激光联合中药组作用更明显。结论低能量氦一氖激光血管内照射联合中药糖脑络通方可显著降低TXB2和AngⅡ、升高6-Keto—PGF1α水平，从而达到治疗糖尿病脑梗死的目的。     

糖脑络通联合低能量氦氖激光血管内照射对糖尿病脑梗死患者血流变及内皮素的影响

目的观察中药糖脑络通联合低能量氦氖激光血管内照射治疗对糖尿病脑梗死患者血液流变学指标及内皮素水平的影响。方法将确诊为糖尿病并脑梗死、中医辨证属气阴两虚兼夹血瘀型的90例患者随机分为3个治疗组：激光组、中药组（糖脑络通）和激光＋中药组,观察治疗1个月后血液流变学、内皮素的变化。结果治疗后,激光＋中药组能显著降低血中内皮素、纤维蛋白原水平,提高红细胞变形能力,疗效优于激光组和中药组。结论糖脑络通联合低能量氦氖激光血管内照射能明显改善糖尿病并脑梗死患者的血液流变学和内皮素水平,从而更好达到治疗目的。     

局灶性脑缺血大鼠血瘀证相关指标和脑损伤病理生理的动态变化

目的：观察局灶性脑缺血大鼠血瘀证相关指标的改变，为建立病证结合的脑卒中血瘀证动物模型提供实验依据。方法：采用插线法致大脑中动脉栓塞（MCAO）2h制备局灶性脑缺血大鼠模型，分别于再灌注6、12、24、48、72和168h取血并处死动物取相应标本。检测腹动脉血血液流变学动态变化；采用酶联免疫吸附法（ELISA）和放射免疫竞争法测定脑组织白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）含量；用苏木素-伊红（HE）染色法观察脑细胞的病理形态学变化并进行细胞计数；用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果：与假手术组比较，模型组再灌注12～168h全血黏度和红细胞聚集率明显增高（P〈0.05或P％0．01），再灌注48h时血浆纤维蛋白原含量也显著增高（P〈0.01）。缺血侧脑组织前炎症细胞因子IL-1β水平于再灌注6～24h明显增高，TNF—α含量于再灌注24～48h显著增多（P〈0.05或P〈0．01）；再灌注6～72h脑缺血梗死区细胞数量明显减少，12～72h凋亡细胞大量出现（P均〈0.01）。结论：局灶性脑缺血大鼠模型出现血液流变学指标异常和脑部病变，因此有可能作为脑卒中血瘀证的病证结合动物模型。     

参乌胶囊对糖尿病复合脑缺血模型大鼠血糖和学习记忆功能的影响

目的：探讨糖尿病性脑病病变机制，观察参乌胶囊对糖尿病复合脑缺血模型大鼠学习记忆功能的影响。方法：采用在大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)(60mg／kg)引起糖尿病的基础上，再行双侧颈动脉缺血再灌手术建立糖尿病脑病动物模型。经参乌胶囊小剂量[0．45g／(kg&;#183;d)]、中剂量[0．9g／(kg&;#183;d)]和大剂量[1．8g／(kg&;#183;d)]灌胃治疗30d后，用Morris水迷宫实验对动物行为学进行评价。结果：糖尿病复合脑缺血模型大鼠到达站台游动时间比正常对照组增长63．4％；而参乌胶囊小剂量组较模型组动物缩短61．3％，参乌胶囊中剂量组较模型组动物缩短75．3％，差异均有显著性意义(F=3．71，P&;lt;0．01)；参乌胶囊小剂量和中剂量组在明显改善认知功能和降低体内血糖水平的同时，也使其体质量明显降低，血糖分别降低为19．2％和15．1％，差异均有显著性意义(t=2．13，2．14，P&;lt;0．05)。结论：糖尿病复合脑缺血模型大鼠存在认知功能障碍；糖尿病脑病发生机制与体内血糖水平有关；参乌胶囊有改善糖尿病复合脑缺血模型大鼠的学习记忆功能和降低体内血糖水平的功能。     

氟对三维培养中成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨不同浓度氟在不同时间段对三维培养体系中成纤维细胞增殖活性的影响。方法应用鼠尾胶原制备三维培养支架,种植小鼠皮肤成纤维细胞株(L929)。将细胞分为对照组和6个染氟组(0.001、0.002、0.1、1、10和20mg/LF-),采用四唑盐(MTT)比色法,检测氟化物作用1、2、4、24、48、72和96h对成纤维细胞细胞增殖特性的作用。结果成纤维细胞在加氟初期仅个别组(1h和2h的0.002mg/L组和2h的0.1mg/L)细胞增殖活性有增加,其他组下降或明显下降;加氟24、48和72h时间段各加氟组成纤维细胞细胞增殖活力多高于未加氟组,未达统计学差异显著程度。结论氟对三维培养中的成纤维细胞的增殖活力有刺激作用,但作用发生较慢,程度相对较弱。     

糖尿病患者可以以肉为食吗?

许多初患糖尿病的朋友容易产生一种错误的认识:认为血糖高主要与主食量有关,而与肉食量关系不大,因而常年执行自己制定少吃主食多吃肉的“健康食谱”。甚至有些朋友不吃主食,以肉代食。其实这种食谱是不合理的,如长期按此食谱安排饮食对糖尿病病情非常不利。     

二苯乙烯苷对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的改善作用

背景中药何首乌能够提高小鼠学习记忆和抗脑缺血能力,而二苯乙烯苷是何首乌的主要有效成份,具有较强的抗氧化与延缓衰老等脑保护作用.目的观察由东莨菪碱所致学习记忆障碍的小鼠给予二苯乙烯苷后,其学习记忆障碍的改善.设计随机对照实验.单位首都医科大学宣武医院药理研究室.材料实验于2000-02/05在首都医科大学宣武医院药物研究中心完成.选取雄性昆明小鼠50只,随机分为5组即正常组、模型组、阳性对照组、二苯乙烯苷0.03g/kg组、二苯乙烯苷0.1g/kg组.二苯乙烯苷为首都医科大学宣武医院药理室从中药何首乌中提取的有效成分,阳性对照药为吡拉西坦,Morris水迷宫和避暗反射箱由中国医学科学院药物研究所研制.方法实验前5d开始给药,正常组及模型组分别给予自来水灌胃,阳性对照组给予吡拉西坦0.7 g/(kg·d),二苯乙烯苷0.03 g/kg组给予二苯乙烯苷0.03 g/(kg·d),二苯乙烯苷0.1 g/kg组给予二苯乙烯苷0.1g/(kg·d),连续5 d.第6天各组灌胃给药30 min后开始造模(正常组腹腔注射等量生理盐水,其余各组均腹腔注射东莨菪碱1 mg/kg),20 min后进行Morris水迷宫和避暗测试.Morris水迷宫造模注射剂量为1 mg/kg,避暗测试造模注射剂量为10 mg/kg.主要观察指标①各组小鼠在Morris水迷宫中的搜索距离和时间.②各组小鼠在避暗实验中的潜伏期和电击次数.结果实验纳入50只小鼠,49只进入结果分析,模型组腹腔注射东莨菪碱时因腹腔出血死亡1只.①Morris水迷宫测试结果二苯乙烯苷0.1 g/kg组小鼠搜索时间及搜索距离较模型组均显著缩短[(77.814±46.492),(99.319±38.104)s;(1370.914±917.40),(1 808.77±869.36)cm;P均＜0.05].②避暗反应测试结果二苯乙烯苷0.03 g/kg与0.1g/kg组小鼠的电击次数较模型组均明显减少[(0.00±0.00),(0.00±0.00),(0.8571±2.267)次,P＜0.01],且潜伏期有延长的趋势[(300±0.00),(300±0.00),(269.71±80.128)S].结论对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型小鼠,给予二苯乙烯苷后可缩短其在Morris水迷宫中的搜索时间和搜索距离,减少避暗的错误次数,对学习记忆障碍有一定的改善作用.