α-干扰素对骨巨细胞瘤细胞凋亡和bFGF及其受体表达的影响

目的:探讨α-干扰素对体外培养的骨巨细胞瘤细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及受体Bek表达与生物学行为的影响,为骨巨细胞瘤术后复发转移的防治探索新途径.方法:采用不同浓度的α-干扰素诱导体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞,观察α-干扰素对瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞术与细胞-酶联免疫吸附法分析α-干扰素诱导48h后瘤细胞凋亡情况及Bek/bFGF表达的变化.结果:浓度为1 000IU/ml以上的α-干扰素作用10～12h左右,瘤细胞即出现退缩现象,生长明显受到抑制;至48h,瘤细胞数目明显减少,且出现大量细胞碎片.α-干扰素可诱导第三代骨巨细胞瘤细胞发生凋亡,其凋亡率随α-干扰素作用浓度增加而递增,呈明显的剂量依赖关系.α-干扰素可抑制第三代骨巨细胞瘤细胞bFGF和Bek的表达,其抑制强度也随α-干扰素作用浓度的增加而增加,呈明显的量效关系.当α-干扰素作用浓度达到1 000IU/ml以上时,其诱导凋亡与抑制Bek/bFGF表达的效应均发生显著性变化.结论:α-干扰素对体外培养的第三代骨巨细胞瘤细胞具有明确的抗肿瘤效应,可作为骨巨细胞瘤术后辅助治疗,以防治和减少其复发转移.     

浸润中的胃癌细胞及其邻近组织的超微结构变化

用电子显微镜观察浸润中的胃腺癌细胞及其邻组织-间质及靶器官组织的超微结构变化,发现癌细胞内微丝主要集中在足样突起内,而无突起形成或未浸润的癌细胞胞质内极少或未见微丝。说明微丝的出现与癌细胞的运动有关,系动态性合成与分解。由此也可圆满地解释文献中有关癌细胞内微丝增多或减少的争论。此外,癌细胞浸润到肌层时,未见到癌细胞对平滑肌细胞的直接破坏,提示平滑肌细胞的变性、坏死可能是间接作用所致。     

反义Cyclin B1提高Lewis肺癌细胞对健择化学敏感性的体内外研究

目的研究CyclinB1反义全长cDNA(AS-CLB1)对小鼠Lewis肺癌细胞(LL/2)化疗敏感性的影响,为将该方法联合健择化疗用于非小细胞肺癌的治疗提供实验依据。方法通过流式细胞术检测LL/2亲本(LP),LL/2空载体(LV)及LL/2/AS-CLB1(LA)细胞的凋亡及细胞周期分布。用健择(20nmol/L～20μmol/L)处理上述三种细胞,分别于1h及24h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法评估健择对各组细胞的体外杀伤作用。将上述三种细胞分别接种C57BL/6小鼠,成瘤后用健择〔25～125mg/(kg·d)〕处理各组动物,3d1次,一共4次,观察细胞在体内的成瘤性及动物的生存时间,并用流式细胞仪检测各组动物肿瘤组织的细胞凋亡。结果LA细胞较对照(LP和LV细胞)出现了明显的G1期阻滞及凋亡;健择对LA细胞的体外杀伤作用显著增强;在LA细胞组,细胞的成瘤性明显下降,该组动物肿瘤组织的细胞凋亡明显增加,动物的生存时间也显著延长。结论AS-CLB1可以明显增强LL/2细胞体内外对健择的化学敏感性,其作用可能与AS-CLB1诱导细胞发生G1期阻滞及凋亡,从而增强了健择的抗肿瘤作用有关。     

癌性腹水的抗血管生成基因治疗研究

目的：探讨内皮抑素基因治疗在癌性腹水中的治疗作用。方法：在两个不同的小鼠肿瘤腹水模型腹腔内注射腺病毒载体介导的内皮抑素基因，观察其对腹水形成、腹膜的渗透性、肿瘤细胞的作用，以及对小鼠生存期的影响等。结果：用内皮抑素治疗组小鼠的腹水、腹膜的渗透性受到明显抑制，腹水中肿瘤细胞数明显减少，小鼠的生存期明显延长。结论：内皮抑素基因治疗有可能成为一种新的癌性腹水的治疗方法。     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。     

人骨骼肌TnI-fast基因克隆和体外表达

目的：构建人骨骼肌TnI-fast基因分泌型真核表达载体，为利用TnI-fast基因进行抗肿瘤血管生成基因治疗奠定基础。方法：采用PCR和RT－PCR制备TnI-fast cDNA，构建TnI-fast基因克隆质粒，测序证实后将TnI-fast cDNA插入到pSecTag2B构建分泌型重组真核表达质粒。然后用TnI-fast基因重组表达质粒转染COS－1细胞，检测TnI-fast基因体外表达。结果：DNA测序证实，我们从人骨骼肌总RNA和cDNA文库中扩增的TnI-fas cDNA序列与NCBIGenebank TnI-fast cDNA序列完全一致。ELISA检测证实，TnI-fast/pSec Tag2 B转染后目的基因可在真核细胞中分泌表达。结论：本研究成功地构建了TnI-fast基因重组表达质粒，可进一步用于抗肿瘤血管生成基因治疗动物实验。     

舒林酸对结肠腺癌HT-29细胞增殖调控的实验研究

目的 观察舒林酸对结肠腺癌ＨＴ－２９细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法 采用ＭＴＴ比色法观察舒林酸对ＨＴ－２９细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测舒林酸对ＨＴ－２９细胞周期的影响,同时结合ＤＮＡ电泳和透射电镜观察舒林酸对ＨＴ－２９细胞有无促凋亡作用。结果 舒林酸可抑制ＨＴ－２９细胞增殖,使Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期比例降低,７２ｈ后,ＨＴ－２９细胞凋亡分别上升至１２．５＾、１５．４＾和２４．２     

P27蛋白在牙源性肿瘤的表达

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测４０例牙源性肿瘤中Ｐ２７蛋白表达情况。结果显示：不同类型牙源性肿瘤中有不同表达,良性肿瘤组表达率为３０．０％（６／２０）,恶性肿瘤组为８５．０％（１７／２０）,良恶性肿瘤组之间差异显著（Ｐ＜０．００５）。提示Ｐ２７蛋白可能成为牙源性肿瘤有一定辅助诊断价值的标记物     

豆蔻酰佛波醇乙酯与γ-干扰素协同诱导肿瘤细胞B7-1表达的临床研究

目的探讨豆蔻酰佛波醇乙酯（ＰＭＡ）和γ干扰素（γＩＦＮ）在卵巢癌及其他肿瘤治疗中的意义。方法用ＰＭＡ＋γＩＦＮ处理的卵巢癌细胞及其他肿瘤细胞用流式细胞仪检测免疫球蛋白超家族糖蛋白的共刺激分子Ｂ７－１、主要组织相容抗原（ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ）的表达情况。并采用５１铬（５１Ｃｒ）４小时释放试验及［３Ｈ］胸腺嘧啶渗入法了解Ｂ７－１的表达对细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性和对Ｔ淋巴细胞增殖的诱导情况。结果预先用ＰＭＡ处理,后用γＩＦＮ处理的肿瘤细胞,能诱导Ｂ７－１表达阳性的伯基特淋巴瘤细胞株或转染Ｂ７－１基因的卵巢粘液性囊腺癌细胞的Ｂ７－１表达增强,能诱导无Ｂ７－１、ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ表达的卵巢癌细胞株及其他肿瘤细胞株表达Ｂ７－１及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ,而单独用γＩＦＮ则不能诱导Ｂ７－１表达。ＰＭＡ和γＩＦＮ的这种协同效应能被蛋白激酶抑制剂１（５磺酰基）异喹啉２甲基哌嗪盐酸盐（Ｈ７）阻断。被诱导表达的Ｂ７－１能激活ＣＴＬ的杀伤活性,并能增强Ｔ淋巴细胞的增殖能力。结论γＩＦＮ诱导的Ｂ７－１的表达可能依赖于ＰＭＡ预先激活蛋白激酶Ｃ。诱导Ｂ７－１等的表达对治疗肿瘤有一定的价值。     

p27Kip1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的：探讨子宫内膜癌中ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白的表达情况及临床病理意义。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测１０５例子宫内膜癌ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白的表达,并运用流式细胞术检测４６例子宫内膜癌组织的ＤＮＡ含量。结果：子宫内膜癌ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白阳性表达率为６９％（７２／１０５例）,明显低于正常增生期子宫内膜及单纯增生、复合增生子宫内膜总的阳性率（９１％,Ｐ〈０．０１）,而与不典型增生子宫内膜的ｐ２７＾Ｋｉｐ