不同剂量乙醇对大鼠心肌糖代谢信号传递分子mRNA表达的影响

目的：观察长期摄入不同剂量乙醇对大鼠心肌糖代谢传导通路中主要信号IR、IRS1、IRS2、GLUT4、AMPKα、MEF2基因转录水平的影响,探讨乙醇影响葡萄糖转运的可能机制。方法： 雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、大、中、小剂量乙醇组。乙醇喂养22 周,留取左心室肌于液氮中保存。采用RT-PCR 检测心肌IR、IRS1、IRS2、GLUT4、 AMPKα1和AMPKα2 亚基、MEF2A和MEF2D 亚型mRNA的表达。结果：与正常对照组相比,除低剂量乙醇组MEF2D mRNA水平无明显变化外,其它饮酒组中各观察指标表达均下降（P<0.01或P<0.05）。除IR外,各饮酒组IRS1、IRS2、GLUT4、AMPKα、MEF2A、MEF2D mRNA水平的下降程度与摄入乙醇量存在剂量依赖关系,即摄入乙醇量越大,下降越明显。相关分析表明,GLUT4 mRNA 的改变与IRS1、IRS2、AMPKα、MEF2A、MEF2D的变化呈正相关,其中GLUT4 的表达水平与IRS1、MEF2A有较高相关性（r=0.683,　r=0.824,　P<0.01）。结论：长期摄入乙醇可降低大鼠心肌糖代谢信号分子的表达。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者血清IL 10、TGF β水平及其与胰岛β细胞功能的关系

目的探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA)患者外周血细胞因子白介素 10（IL 10）、转化生长因子 β（TGF β）水平变化及其与胰岛β细胞功能的关系。 方法以双抗夹心ELISA法检测30例LADA（LADA组）、30例2型糖尿病(T2DM组)、30例正常对照（正常对照组）外周血血清中IL 10、TGF β水平,同时应用HOMA公式计算胰岛素释放指数(HOMA IS)。 结果LADA组的IL 10水平低于T2DM组(P<0.05),高于正常对照组（P<0.05）。LADA组的TGF β水平与T2DM组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。IL 10水平与患者LnHOMA IS成正相关(r=0.314,P=0.017）。 结论LADA患者体内存在细胞免疫功能失衡,不能有效地维持自身的免疫耐受,可能是LADA患者胰岛β细胞功能损害的主要因素。     

TSHR基因上新发现SNP及其在GD致病中的评价

目的探讨TSH受体上单核苷酸多态性(SNP)与Graves病(GD)的相关性。方法(1)以一GD家系的12个成员(包括3例患者、9例家系成员)为研究对象,抽提外周血DNA,设计引物,扩增TSHR的全部外显子和部分内含子,PCR产物纯化后测序,对TSH受体的SNP进行筛查。(2)应用病例-对照研究方法,检测筛查出的SNP基因型和等位基因变化频率与GD有无相关性。结果共发现8个多态位点,其中第8外显子上的多态位点在SNP库中未见报道,为首次发现。这些多态位点的变化频率在患者与正常组间相比较,无明显统计学差异。结论新发现的SNP及其他多态位点与GD不连锁;提示汉族人TSH受体基因与GD无相关性;该基因的多态位点在不同的人种间存在明显差异。     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

中西医结合治疗对Graves病患者外周血T、B淋巴细胞亚群的影响

目的：研究中西医结合治疗对Graves病患者外周血T、B淋巴细胞亚群及部分协同刺激分子表达的影响。方法：运用流式细胞术测定20例Graves病初发患者、11例他巴唑治疗患者（西药组）、16例他巴唑合用中药五岳抗甲丸治疗患者（中西医结合组）及16例正常对照外周血淋巴细胞CD19、CD40、CD80、CD3、CD4、CD8、CD28等分子的表达水平。结果：Graves病初发患者CD19⁺、CD40⁺、CD19⁺ CD40⁺、CD80⁺细胞比率高于正常对照组(P＜0.01或P＜0.05),CD3⁺CD8⁺细胞比率降低(P＜0.05),CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺比值高于正常对照(P＜0.05);西药组患者CD80+细胞恢复正常,CD3⁺CD4⁺细胞比率及CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺比值高于正常对照(P＜0.05,P＜0.01),而CD3⁺CD8⁺及CD8⁺CD28⁺细胞比率低于正常对照(P＜0.01,P＜0.05);除CD80+细胞比率高于正常对照外,中西医结合组所测各种分子的表达同正常对照组比较,差异无统计学意义;同西药组比较,中西医结合组CD3⁺CD4⁺细胞降低(P＜0.01),CD3⁺CD8⁺及CD8⁺CD28⁺细胞比率升高(P＜0.01,P＜0.05), CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺比值降至正常水平(P＜0.01)。结论：Graves病患者体液免疫处于较高水平,存在细胞免疫调节失衡,中西医结合治疗较单纯西药治疗更有利于患者免疫状态的恢复。     

脂联素基因多态性与2型糖尿病相关性研究

采用实时定量PCR技术研究汉族人群脂联素基因(apM1)多态性与2型糖尿病(DM)相关关系。发现apM12号外显子和内含子存在单核苷酸多态性(SNP),SNP45与2型DM密切相关,DM组T/ T基因型明显高于肥胖组和对照组(均P<0.01)。脂联素基因SNP45和SNP276与肥胖人群、无相关性。     

二甲双胍降低大鼠肝脏胆固醇和甘油三酯含量的机制探讨

目的 观察二甲双胍对长期高饱和脂肪酸饲养大鼠肝脏腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)和PPARα表达和活性的影响,探讨二甲双胍降低肝脏胆固(TC)和甘油三酯(TG)含量的可能机制.方法 Wistar雄性大鼠30只,随机等分为:对照组(C组)、高脂组(HF组)和高脂加二甲双胍组(Met组,高脂喂养4个月,第5个月加用二甲双胍胃1个月),喂养共5个月,测定血清、肝脏组织中的TC和TG含量;分别应用实时PCR、Western印迹检测肝脏AMPKα 和PPARα 的基因转录、蛋白表达和活性水平;PPARα 转录因子DNA结合活性测定用ELISA法.结果 与C组比较,HF组大鼠肝脏AMPKα2和PPAα mRNA表达水平显著降低(均P＜0.05);AMPKα 蛋白表达及活性显著降低(均P＜0.05),PPARα蛋白表达及DNA结合活性分别降低 48.6%、21.6%(均P＞0.05); 肝脏TC、TG含量(均P＜0.05)和血TC、TG水平(均P＜0.01)均显著增高.与HF组比较,Met组肝脏AMPKα2 mRNA和蛋白表达及活性显著增高(均P＜0.05),PPARα蛋白表达增高56.5%(P＞0.05),其DNA结合活性显著增高(P＜0.05);肝脏TC、TG含量血TC、TG水平均显著降低(均P＜0.05).结论 二甲双胍降低长期高脂饲养所致的大鼠肝脏、血中TC、TG水平的增高,可能与其激活肝细胞AMPKα及PPARα有关.     

2型糖尿病患者外周血粘附分子变化及甘糖酯干预治疗的初步研究

为研究 2型糖尿病患者血清中可溶性细胞间粘附分子 - 1( s ICAM- 1)、血管细胞粘附分子 - 1( s VCAM-1)及单个核细胞表面细胞间粘附分子 - 1( ICAM- 1)、血小板表面颗粒膜蛋白 - 14 0 ( GMP- 14 0 )与大血管病变间的关系 ,并观察甘糖酯的疗效 ,对 4 5例 2型糖尿病患者及 2 0例正常对照者用 EL ISA法测定其 s ICAM- 1及 s VCAM-1,流式细胞仪测定 ICAM- 1及 GMP- 14 0。 2型糖尿病患者分为有大血管病变组 ( 19例 )和无大血管病变组 ( 2 6例 ) ,部分患者经胰岛素或胰岛素 甘糖酯治疗 2周后复查。结果显示 ,2型糖尿病患者 s ICAM- 1、s VCAM- 1、I-CAM- 1、GMP- 14 0显著高于正常对照组 ,其中 s ICAM- 1、s VCAM- 1、ICAM- 1有大血管病变组显著高于无大血管病变组。胰岛素治疗后上述粘附分子无明显变化 ,胰岛素 甘糖酯治疗能够显著降低 s VCAM- 1、ICAM- 1、GMP-14 0 ( P<0 .0 5 )     

肥胖和2型糖尿病患者脂肪组织脂联素mRNA表达的研究

用实时定量PCR技术检测2型糖尿病患者(肥胖与非肥胖)和非2型糖尿病者皮下及大网膜脂联素mRNA表达量;ELISA法测血清脂联素浓度。皮下脂肪脂联素mRNA表达量高于大网膜;2型糖尿病、肥胖患者大网膜脂肪脂联素mRNA表达量对血清脂联素浓度有影响;性别可影响脂联索mRNA表达。     

A1166C基因多态性与2型糖尿病并发冠心病、心肌梗死相关性的研究

目的：探讨1型血管紧张素Ⅱ受体（AT1R）基因A1166C多态性与2型糖尿病（DM）并发冠心病（CHD）、心肌梗塞（MI）的关系。方法：随机选择DM患者228例,其中并发CHD 77例,MI 30例,正常对照90例.多聚酶链扩增反应及Dde Ⅰ限制性内切酶法检测A1166基因型。结果：组间基因型、等位基因频率比较：DM组与对照组无统计学差异（P＞0.05）;并发CHD组显著性高于无CHD组与对照组（P＜0.05）;并发CHD组中MI亚组显著高于非MI亚组（P＜0.05）.结论：基因A1166C多态与DM无相关性,而参与DM并发CHD及MI。