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目的将突变SOD1cDNA亚克隆入酵母穿梭表达质粒pGBKT7中。方法利用PCR方法从重组子pEGFP—N2-mSOD1中扩增突变的SOD1cDNA片断。以EcoRⅠ/salⅠ双酶切突变SOD1cDNA片断和酵母穿梭表达质粒pGBKT7,在T4DNA连接酶的作用下,连接突变SOD1cDNA片断和酵母穿梭表达质粒pGBKT7。转化感受态DH5α,筛选重组子,进行双酶切和测序鉴定。结果经酶切和测序鉴定,突变SOD1cDNA成功地亚克隆入酵母穿梭表达质粒pGBKT7中。结论亚克隆成功,可以对目的基因进行下一步研究。 相似文献
15.
目的:运用计算流体力学(CFD)分析上气道气流流场特性,分析正常儿童与阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)儿童上气道流场间的差异,从气道流体力学方面阐述儿童OSA的病理特征.方法:构建正常儿童和OSA患儿上气道模型,运用CFD方法模拟两者上气道吸气气流,分析两者在同一吸气压强条件下气流流速、流动方式、通气量和气道压强等方面的差... 相似文献
16.
目的应用小鼠颈总动脉血管内膜损伤模型,观察并在体显示导管所致血管损伤病变情况。方法通过在小鼠左颈总动脉中插入并旋转导管导线造成血管损伤。于伤后1、3、4周行血管组织切片,HE染色对比观察损伤后血管内膜及中层等厚度及面积变化。并行免疫组化染色观察血管损伤后αVβ3分子表达及Ki67阳性细胞数的变化。最后在不同血管损伤程度动物,注射可与αVβ3分子特异性结合的^[1]In-RP478,2.5h后分离出损伤及对照血管,检测其放射自显影强度。结果颈总动脉损伤后,血管内膜增生,出现大量新生内膜。新生内膜中有大量αVβ3表达。血管中层明显变厚。在血管中层及新生内膜中有大量Ki67阳性细胞。放射自显影发现,损伤侧显影强度明显高于对照侧,对比系数与损伤程度成正比。结论以αVβ3为靶分子的同位素显影可能为检测血管病变提供帮助。 相似文献
17.
胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发).偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。 相似文献
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调节性T细胞的MACS分选和纯度鉴定 总被引:4,自引:4,他引:4
目的 建立CD4^ CD25^ 调节性T细胞(Regulatory T Cells,Treg)的磁珠(MACS)分选方法,并对分选结果进行纯度鉴定。方法 采用T细胞纯化柱分离小鼠脾脏T淋巴细胞,以抗-CD8-FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8^ T细胞,再以抗-CD25-FITC抗体和义气风发FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25^ T淋巴细胞;以FACS流式细胞法检测分选的CD4^ CD25^ 调节性T细胞纯度。结果 MACS磁珠分选法能够成功分选出CD4^ CD25^ 调节性T细胞,分选平均纯度达到73%,分选细胞活力为95%。结论 MACS磁珠分选法能够分选出高纯度的Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力。 相似文献
20.
人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中,脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞,在G418选择压力下,通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆,MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体,生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。 相似文献