蛋白印迹法人血清DNA结合蛋白的测定

利用蛋白印迹法(Western blot)原理建立了检测人血清DNA结合蛋白的一种较特异性方法,发现在成人血清中有7 种Lambda DNA结合蛋白,分子量为:90kDa、67kDa、43kDa、30kDa、24kDa、22kDa和17kDa。在婴儿血清中没有30kDa、24kDa和22kDa这3种LambdaDNA结合蛋白。在人的血清中有二种小牛胸腺DNA结合蛋白,分子量为:43kDa和17kDa。血清中有四种与正常成人血浆DNA结合的蛋白质,分子量分别为:67kDa、43kDa、30kDa和24kDa,其中30kDa的这种蛋白质与正常成人血浆DNA的结合力较弱,并在一些正常个体中未见到此带。     

DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用,克隆DAPK1基因的开放读码序列(ORF)。方法: 根据GenBank提供的核苷酸序列,自行设计引物,用RT-PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF;用质脂体将pcDNA3.1(+)-DAPK1转染到Raji细胞,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。 结果:DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T,测序鉴定;分析结果显示,从K562细胞成功扩增4 300 bp的DAPK1基因ORF有7处突变,其中6处是同义突变,1处是基因的单链核苷酸多态性;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化到Raji细胞;转染48 h后,可以检测到DAPK1的表达,并可以观察到细胞发生凋亡。结论:大片段的基因可以采用RT-PCR法直接克隆,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF,过表达的DAPK1基因可以诱导Raji细胞凋亡。     

反义bcl-2 DNA促进裸鼠荷人鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡

目的：在裸鼠活体水平上观察ｂｃｌ－２反义寡聚核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮ）对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２－ｂａｘα凋亡的影响。方法;ＤＮＡ合成仪合成２２ｎｔ ＡＳＯＮ片段,ＲＴ－ＰＣＲ检测ｂｃｌ－２表达,电镜观察细胞凋亡。结果;反义ｂｃｌ－２ ＤＮＡ片段局部注射ＣＮＥ２－ｂａｘα致瘤组织,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤组织中ｂｃｌ－２表达被封闭,电镜观察视野下可见     

鼠白细胞介素-2受体α、β链基因反义RNA真核表达质粒的构建

【目的】构建鼠IL 2Rα与β链基因的反义RNA真核表达质粒 ,为反义RNA基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠IL 2Rα与β链cDNA及鼠IL 2启动子 ,克隆入真核表达质粒 pcDNA3的多克隆位点上 ,用酶切或PCR法鉴定正反连接。【结果】得到 4个反向连接的重组质粒 :pcAnti mIL 2Rα ,pcAnti mIL 2Rβ,pcAnti mIL 2Rαβ及pciAnti mIL 2Rαβ。前三者由CMV强启动子指导鼠IL 2R基因反义RNA的表达 ,后者由CMV启动子与鼠IL 2靶向可诱导型启动子组成的融合启动子指导反义RNA的表达。【结论】成功构建了 4个不同类型的鼠IL 2R基因反义RNA真核表达质粒。     

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

本文报道用多聚酶链反应方法扩增EB病毒胸苷激酶基因。本研究以Raji细胞和B95-8细胞二种不同细胞株的DNA为模板,引物是根据B95-8细胞的胸苷激酶基因序列设计的,均可得到特异的扩增产物,该产物用内切酶Ncol切割鉴定,酶切片段的长度与预期理论值完全一致。     

人类心脏发育相关基因的初步筛选

从人胎儿心脏cDNA文库和成人心脏cDNA文库，通过差减杂交，筛选心脏发育相关基因。方法：①用23周和27周的人胚胎心脏组织构建2个cDNA文库，分别命名为LibF和LibS，用成人心脏组织构建了1个cDNA文库，命名为LibA。②探针的合成、纯化和比放射活性测定。③差减杂交和特异性探针的富集。④菌落原位杂交。⑤差减阳性克隆的斑点杂交。结果：①所构建的人胎儿心脏cDNA文库和成人心脏cDNA文库的容量LibF为1×109，LibS为3.7×108，LibA为2×108，重组子的片段大小为0．9~4．6kb。②经差减杂交和原位杂交，获得有差异克隆48个。结论：构建高质量的人胎儿心脏cDNA文库和成人心脏cDNA文库为筛选心脏发育相关基因奠定可靠的基础，并初步说明随着发育过程的推移，整体基因的表达有逐步减少的趋势。     

STUDY ON CHANGES OF GLYCOPROTEINS IN PLASMA MEMBRANE FROM RAT LIVERS DURINGHEPATOCARCINOGENESIS INDUCED BY DAB

以二甲基氨基偶氮苯（ＤＡＢ）诱发大白鼠肝癌为模型，观察了在诱癌过程中和肝癌形成后，肝细胞质膜上糖蛋白的变化。用不连续蔗糖密度梯度离心法制备肝细胞质膜，用ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析法分离出肝细胞质膜糖蛋白，再进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析。结果表明诱癌４ｗｋ，ｌ６ｗｋ的肝细胞质膜搪蛋白成份和正常肝比较无显著差异。肝癌细胞质膜上糖蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱和正常肝比较，一些高分子量的糖蛋白缺失，而低分子量的糖蛋白含量增加．并显示了一条分子量为６．６１ＫＤ的新的糖蛋白带。     

许鹏程、龚兰真 教授传略

<正>我国上了年纪的生化界朋友,总是把许鹏程、龚兰真教授相提并论的。许、龚两位教授也的确是我国生化界佳偶天成的科学伴侣。两人大半生多在同一单位共事,又同时在我国生化界有一定的知名度,也可以说是我国生化界中罕见的一对。说起来,许教授还是龚教授在燕京大学时期的学生。     

Ca~(2 )/CaM在植物血凝素促淋巴细胞分裂中的分子调节机理——(二)CaM对PHA有丝分裂原活性的影响

应用MTT微量自动定量比色法分析细胞的存活与增殖状况,观察钙调蛋白(CaM)对植物血球凝集素(PHA)促小鼠脾淋巴细胞分裂的影响.结果发现,细胞培养48h后,PHA加CaM的最大刺激组的吸光度(A)值比未加CaM的PHA对照组提高了46.8％(吸光度(A)值分别为0.457和0.311),CaM的最大刺激浓度为30μg/ml.结果提示,CaM参与细胞增殖的调节作用,并能显著提高PHA的促有丝分裂原作用。     

二甲氨基偶氮苯诱发大白鼠肝癌的研究——癌变过程核糖体和多核糖体RNA含量及其PolyA~+ RNA相对含量的改变

本实验以二甲氨基偶氮苯(DAB)诱发大白鼠肝癌不同时期的肝组织为材料,观察了核糖体和多核糖体RNA含量及其polyA~+RNA相对含量的改变。结果表明:DAB诱癌6周、16周及肝癌的癌区组织核糖体和多核糖体RNA含量均低于正常对照组。而癌周组织的含量未见有显著性变化。核糖体和多核糖体RNA中polyA~+RNA的相对含量在诱癌6周、16周时低于对照组,但在肝癌形成时则高于对照组。本文就这种变化的意义作了初步讨论。