靶基因调控的脐血干/祖细胞体外长期扩增与调控

背景:脐血干细胞是基因治疗最理想的靶细胞之一,但基因转移率低下是目前面临的主要障碍.酪氨酸激酶JAK2在造血干/祖细胞自我更新中扮演着重要的作用,为了克服脐血基因转移率低下的障碍,根据基因调控表达技术原理,是否可开发一个可以靶向扩增JAK2基因修饰的脐血CD34 细胞体系.目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和安全性. 单位:卫生部北京医院血液科.材料:实验于2003-06/2006-04在卫生部北京医院血液科实验室完成.脐血取自健康、足月、自然分娩后立即断脐的脐血.脐血由北京医院妇产科提供,产妇及家属均知情同意,实验经医学伦理委员会批准.MiniMACS磁性分离仪、免疫磁珠吸附CD34单抗购自德国Miltenyi Biotec公司, 流式细胞仪购自美国FACScalibur,人重组干细胞因子、Flt3配体、人白介素-6、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子、血小板生成素为PeproTec产品,SPF级裸鼠购自北京医科大学动物中心.方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和两个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(2xF36v,F2)组成.AP20187可与F36v特异结合引起JAK2二聚化而激活细胞内信号传导.该载体同时含有绿色荧光蛋白报告基因,用作检测细胞增殖的标记.应用MiniMACS免疫磁珠分选系统纯化分离脐血CD34 细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34 细胞.转导后的CD34 细胞在集落刺激因子、Flt3配体、血小板生成素、白介素-6细胞因子的联合培养条件下,以不加或加入AP20187分别作为对照组和实验组.主要观察指标:①应用流式细胞仪测定两组CD34 细胞中所含绿色荧光蛋白细胞的百分率,确定基因转移率.②扩增后的脐血祖细胞集落培养结果.③取培养10周的脐血CD34 细胞于裸鼠的胁部皮下注射,30 d后观察成瘤情况.结果:①实验组与对照组均可获得CD34 细胞大量扩增.随着培养时间的延长,实验组扩增的CD34 细胞GFP阳性率由基线水平逐渐上升于第11周时达到95%以上,而对照组绿色荧光蛋白报告基因阳性率逐渐下降到基线水平以下并逐渐消失.②实验组转基因CD34 细胞于12周后仍可产生造血祖细胞集落红系祖细胞、粒单系祖细胞、脐血多向造血祖细胞,所形成的造血祖细胞集落以粒单系祖细胞为主.③裸鼠实验无致瘤特性.结论:转染JAK2 基因的人脐血CD34 细胞协同其他细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后开展干细胞治疗某些遗传性血液病有潜在的应用价值.     

蛋白质组技术进展及其在心血管研究中的应用

目的:对蛋白质组学技术方面的方法学进展及其在心血管疾病研究中的应用作系统总结。资料来源:检索Medline1975-01/2005-04与蛋白质组技术在心血管疾病研究中应用相关的文章,检索词为“proteomics,cardiovasculardis-ease”,并限定文章语言种类为英文。同时检索中国期刊全文数据库1994-01/2005-02与蛋白质组技术在心血管疾病研究中应用相关的文章,检索词为“蛋白质组、心血管”,限定文章语言种类为中文。排除重复性研究和综述类文章。资料选择:对资料进行初审,选取包括蛋白质组技术进展和/或心血管疾病蛋白质组研究方向的相关文献,筛除明显不随机或无对照组的试验研究,对剩余文献查找全文。排除标准:重复性研究。资料提炼:收集到81篇关于蛋白质组技术在心血管疾病研究的文章,共收集到26篇符合纳入标准的文献。排除的55篇为重复性研究。资料综合:对基因组和蛋白质组关系、蛋白质样品制备、双向电泳、图像分析、质谱鉴定和生物信息学技术的进展,以及蛋白质组技术在心血管疾病研究中的应用进行综合整述。扩张性心脏病是利用蛋白质组学技术研究的最为深入的一类心血管疾病。蛋白质组学为探明缺血性心脏病的发病机制提供了良好的技术手段。蛋白质组技术的不断完善和发展必将为医学和相关领域的深入研究提供强有力的技术支持。结论:尽管目前蛋白质组学尚处于起步阶段,但是蛋白质组学以其深入揭示疾病状态下机体内所有蛋白质表达规律的优势在阐明人类心脏疾病的细胞和分子机制方面表现出极大的潜力。不久的将来,随着蛋白质组研究技术日趋完善,现行的结构蛋白质组学必然向功能蛋白质组学过渡,为心血管疾病的早期诊断、新药研发以及心脏康复开辟新的思路。     

皮肌炎的肺部病变经肺活检证实1例报道

皮肌炎可产生肺部病变,国内尚未见详细报道,现报道1例如下。病例报告患者王××,男,60岁。患者于1981年10月底起,于左耳后皮肤出现红斑、发皰。继之两侧面颊、眼脸部亦有红斑及肿胀。平时有不规则发热、乏力及肌痛,手指皮肤有麻木感。当地医院给予     

心源性意识丧失及其急救

循环障碍所致意识丧失往往是由于脑供血不足,脑细胞缺氧性代谢紊乱所致。决定脑血流的主要因素是心排血量、脑血管的灌注压和阻力。休息状态时正常心排血量(CO)之15%供应脑组织。正常成人卧位每分钟脑血流量700～750毫升。脑组织缺乏储备可用能量底物的能力,其需氧量比肌肉多19倍,比心肌多4倍。脑组织对缺氧特别缺乏耐受力,因此维持正常     

母婴同室管理模式的利弊与改进方法

随着改革开放的深入,国外一些先进的管理模式及理念在我国被逐步应用.母婴同室作为医院一种新的管理制度,至今已广泛开展,我院于1993年开始实行母婴同室,经10年多的实践观察,感觉母婴同室确有好多好处,但并不是尽善尽美的,还潜在很多不利因素.现对母婴同室管理模式的利弊作一分析,并就如何尽量避免不利因素,谈一点自己的看法.……     

护理干预对改善血管性痴呆患者家庭护理效果观察

血管性痴呆是神经内科常见病、多发病，是由一系列脑血管因素导致脑组织损害所引起的痴呆综合征的总称。是由一次或多次脑梗死造成大面积组织损伤或其他卒中造成脑萎缩导致脑功能不全而产生。临床此类患者较多，因种种原因（如经济、无人陪护等）患者不能长期在医院接受治疗和护理，而家属往往护理知识匮乏影响了患者进一步康复的时机，因此家庭护理至关重要。     

加强高等护理教育的社会服务功能

面对知识经济和社会发展 ,本文就高等护理教育的社会服务功能作了阐述。通过积极为社会培养高素质护理人才、加强科学研究和转化以及非学历教育的作用 ,加大高等护理教育对社会和医疗卫生保健服务的力度 ,以适应社会经济形势发展和不断变化的医疗卫生市场的要求     

漫谈技术革新

简易雾化吸入器我们在临床配合治疗肺心病及肺部感染患者的实践中,试制了一种简易氧压雾化吸入器,用于45例患者,雾化吸入300余次,取得较好效果。制作方法如下:取前端直径1.5毫米、后端直径4毫米,