CRISPR技术发展及其在骨和软骨组织工程中的应用

由Cas9核酸酶和单向导RNA（sgRNA）组成的CRISPR/Cas9系统,可对sgRNA靶向的DNA序列进行缺失、插入和点突变等基因重编程操作,是新兴的基因编辑技术。此外,CRISPR/dCas9（Cas9核酸酶活性丧失的突变体）,仍保留sgRNA靶向结合DNA的能力,dCas9蛋白融合转录激活物（CRISPRa）后可激活目标基因表达,也可通过融合转录阻遏物（CRISPRi）抑制目标基因表达。CRISPR/Cas9系统的高效输送是限制其临床广泛应用的主要问题之一。病毒载体被广泛用于递送CRISPR/Cas9元 件;但就安全性、简便性和灵活性而言,非病毒载体研究更具吸引力。本文主要总结了CRISPR技术的原理和研究进展,包括CRISPR/Cas9的递送载体,递送模式以及递送过程的障碍,并回顾基于CRISPR技术在骨和软骨组织工程中的研究进展,讨论CRISPR技术在骨和软骨组织工程应用中面临的挑战和未来。     

血友病性假肿瘤的诊断与治疗

血友病为凝血因子VIII或IX缺乏导致的遗传性疾病。血友病性假肿瘤是其罕见但严重的并发症,主要表现为关节外骨或软组织反复出血导致间室内积血,持续增大并压迫及破坏临近组织。临床上诊断主要根据患者外伤出血史及X线、超声波、CT和MRI等检查,其中MRI对诊断该病具有重要意义。对该病的治疗取决于假瘤的位置、大小、生长的速度及对周围组织的影响。治疗方式包括因子替代疗法和在此基础上的放疗及手术治疗(局部抽吸/引流、手术切除、截肢)等。但由于病情复杂常需个性化治疗。越早期获得明确诊断和治疗的患者预后越佳,因此早期准确的诊断和及时有效的治疗具有重要意义。     

~(99m)TcO_4-/~(99m)Tc-MIBI联合显像在甲状腺癌术后随访中的价值

目的对99mTcO 4-/99mTc-MIBI甲氧基异丁基异腈(MIBI)联合显像与颈部彩色多普勒超声(CDU)检查在甲状腺癌术后复发或颈部转移中的诊断价值进行对比研究。方法回顾性分析了甲状腺癌术后疑似复发或颈部转移而行二次手术的患者21例,以术后病理结果为标准,分别对99mTcO 4-/99mTc-MIBI联合显像、颈部CDU检查,对87个疑似甲状腺癌术后复发或颈部转移灶的诊断结果进行对比分析。结果在术后甲状腺癌复发或颈部转移灶的诊断中颈部CDU检查灵敏度、特异性、准确率(44.78%,40.00%,43.68%),均低于99mTcO 4-/99mTc-MIBI联合显像(64.18%,80.00%,67.82%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 99mTcO 4-/99mTc-MIBI联合显像在诊断术后甲状腺癌复发或颈部转移方面优势明显。     

如何解读视野报告

视野检查广泛应用于除眼科以外的许多临床科室,但做为一种主观性的心理物理学检查、受影响的因素是多方面的,本文从视野模式的判定、计算机视野提示参数、分析受检者影响因素、常见的异常视野介绍等4个方面阐述视野报告的解读。     

整合素αvβ3受体显像在脑胶质瘤中的诊断研究

脑胶质瘤约占颅内肿瘤的46％,而患者经手术加放化疗治疗后,平均生存期仅为8-11个月。世界卫生组织公布按恶性肿瘤死亡率顺序排名中,恶性胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第2位死亡原因,是35-54岁患者的第3位死亡原因［1］。对脑胶质瘤进行早期诊断和分类可明显延长患者生存期［2,3］。目前 CT、MRI、B 超等检查方法虽然可以很好定位,但在显示肿瘤生物学信息方面却存在明显不足。细胞穿刺活检可以定性且效果好,但具有创伤性,且要求肿瘤组织接近颅骨或位于非重要部位。核素显像具有灵敏度高、特异性强、无创伤等优点,并具有较高的定性价值［4］。     

自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞的实验

目的：应用一种新的人骨髓基质干细胞培养方法，以满足细胞培养过程中对各类细胞因子的需求，同时尽量减少细胞培养过程中动物源性抗原物质的引入，达到组织工程骨临床应用中细胞的数量与生物学特性要求。方法：实验于2004-03／2005-03在南方医科大学组织工程实验室完成。①自体富血小板血浆的获取：将抽取的自体200mL，加抗凝剂混匀，两次离心。第1次在20℃，3000r／min离心10min，取上清及分界面下3mm部分置另一离心管中，第2次在20℃，以3600r／min离心15min。弃12层3／4，剩余部分在旋涡振荡器上轻震荡使混匀，即为富血小板血浆。将富血小板血浆与催化剂溶液（含100g/L氯化钙、400IU／mL凝血酶）以体积比9：1混合，混匀后以0．22μm滤膜过滤即为富血小板血浆复合因子苹取液。②人骨髓基质干细胞的获取和培养：10名成年健康志愿者（排除其他系统疾病），男7名，女3名；15～35岁，平均年龄27．3岁。抽取骨髓5mL。将获得的有核细胞以2&;#215;10^7接种于10cm。培养瓶（100mL／L富血小板血浆配比低糖DMEM）培养。传代细胞用含100mL／L富血小板血浆，50mg／L抗坏血酸，l&;#215;10^-8ol／L地塞米松，1&;#215;10^-3mol／L β-甘油磷酸钠诱导培养，快速扩增后，采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察各细胞形态及细胞增值情况，碱性磷酸酶染色与钙结节染色等方法对细胞进行生物学特性检测。结果：①人骨髓基质干细胞形态学观察结果：人骨髓基质干细胞接种后2-4h开始贴壁，24h后细胞完全贴壁，呈多角型、梭型。6～8d后，细胞可长满瓶底并呈现单层细胞融合．传代培养后细胞生长迅速，传代诱导后，接种细胞一两天可长满瓶底。细胞为长梭型或不规则多边形，并有伪足伸出，胞核位于细胞一端。细胞生长至第8代生长明显变缓，10代以后细胞内开始出现颗粒样沉积物，并有细胞脱落飘浮于液体中。扫描电镜观察．黏附细胞为梭型或多角型表现，并有多个突起呈不规则形状。②钙结节茜素红染色结果：第3代细胞培养融合后，继续培养至形成密集的细胞团簇，中心出现细胞基质的沉积，茜素红染色可以清晰的显示钙结节．③碱性磷酸酶染色：细胞诱导培养第3代后可见胞质内有大量灰黑色颗粒或块状沉淀，呈现碱性磷酸酶染色阳性。结论：①以自体富血小板血浆替代动物血清体外诱导培养人骨髓基质干细胞，碱性磷酸酶染色与钙结节染色结果显示细胞具有良好的成骨细胞生物学特性。②其所培养的细胞数量及生物学特性能快速达到临床应用的需求．是一种良好的培养方法。     

顽哮验案一则

1病例 沈某，男性，42岁，1996年11月5日初诊。哮喘复发，持续3d未解。患者素有哮喘病史，每逢秋冬季节时常发作。虽经多种新药特药、单方秘方治疗，终未能根除。近年且有愈发愈剧之势，甚则经输氧输液、大剂量激素与解痉药治疗后方能渐平其喘。1周前因出差受凉之后，突感恶寒发热，继则胸部憋闷，喉问痰鸣，喘不能卧。经当地卫生所西药治疗未效而就诊。症见形体消瘦，神萎乏力，面晦唇紫，呼吸急促.     

hBMP-7基因直接体内转染修复兔桡骨缺损实验研究

目的　探讨含人骨形态发生蛋白 7(hBMP - 7)基因逆转录病毒液与左旋聚丙交酯 (PLLA)生物材料复合后修复兔桡骨缺损的效果。方法　制备含hBMP - 7真核细胞表达载体的逆转录病毒液PT -PLNCX2 -BMP7。制备新西兰大白兔桡骨 1 5cm缺损模型 ,修复实验分为 4组 :PT -PLNCX2 -BMP7+PLLA修复组 ,空载体 (PT -PLNCX2 ) +PLLA修复组 ,单纯PLLA生物材料修复组 ,空白组。每组 6个样本。分别于术后 8、12、16周进行大体观察、X线检测和组织学检测。结果　PT -PLNCX2 -BMP7重组病毒液与生物材料复合修复组可见在骨缺损处有骨性连接形成 ,组织学观察见有大量新生骨组织形成 ,而PT -PLNCX2 病毒液修复组、单纯材料修复组和未修复组均未见骨性连接形成 ,仅在部分骨缺损两断段形成少量骨组织。结论　利用hBMP - 7基因体内局部、直接转移的方法能够用于兔桡骨缺损的修复     

脊柱侧凸旋转畸形的测量方法及相关性研究

目的探讨目前几种常用的测量轴向旋转方法的优缺点及其相关性。方法2005年1月～2006年12月采用后路椎弓根螺钉矫形融合术治疗了青少年特发性脊柱侧凸患者53例，MRI测量顶椎旋转角度，拍摄术前胸腰椎正侧位X线片，测量冠状位Cobb角、Nash-Moe旋转度、顶椎肋骨隆起间距（apical rib hump，RH）和肋骨弥散间距（apical ri bspread difference，ARSD）；术后拍摄胸腰椎正侧位X线片，测量术后冠状位Cobb角,RH和ARSD，比较手术前后测量指标差异。结果目前常用的Nash-Moe法、RH值和ARSD值的结果与MRI得到的结果有较好的相关性。手术矫正率与ARSD矫正率之间存在显著相关性。结论MRI扫描可以精确地测量脊柱侧凸的轴向旋转，Nash-Moe法、RH和ARSD也能够比较准确地评价顶椎的旋转，其中ARSD矫正率是评价主胸弯脊柱侧凸手术疗效的可靠指标。     

浅析上市后药品再评价

上市后药品再评价是指对获得市场准入的药品上市后的安全性进行再评价。是对上市前药品评审工作的补充和完善。再评价是保障合理用药的一种监管手段,目的在于通过再评价掌握上市药品的安全性动态,达到宏观监督、微观管理、量化药品生命周期以确保用药安全。