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目的 构建定位于溶酶体、泛素的PrP表达载体,并进行蛋白表达特点及定位的鉴定.方法 将泛素基因、溶酶体膜定位信号序列基因和PrP基因连接,克隆至pcDNA3.1载体中,构建表达载体pcDNA3.1-UPrP、pcDNA3.1-PrPL;瞬时转染真核表达细胞,经Western Blot和间接免疫荧光技术检测PrP表达特点.结果 构建的各种PrP定位表达载体均可定位表达具有三种类型的糖基化分子的PrP,以双糖基化分子类型最多.带有泛素、溶酶体信号的质粒pcDNA3.1-UPrP、pcDNA301-PrPL的PrP表达随着时间的延长蛋白表达量下降,提示泛素、溶酶体信号能加速表达PrP在细胞内的降解.结论 成功构建了溶酶体、泛素定位表达的PRNP核酸疫苗载体pcDNA3.1-UPrP、pcDNA3.1-PrPL,为PRNP核酸疫苗的研究奠定了一定的基础. 相似文献