秦岭岩白菜根茎化学成分的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS）对秦岭岩白菜药材的化学成分进行快速识别和鉴定。方法 选择秦岭岩白菜的75%甲醇提取液作为供试品溶液,采用Thermo Accucore aQ RP18色谱柱（2.1 mm×150 mm,2.6 μm）,流动相甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~40 min,5%~95%A;40~45 min,95%A）,流速0.3 mL·min^-1,柱温30 ℃;质谱分析采用加热电喷雾离子源（HESI）,正、负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1 200。结果 共鉴定出了66个成分,包括游离氨基酸2个、岩白菜素类7个、黄酮类15个、有机酸类15个、糖苷类25个及其他类2个。结论 该方法可系统、准确、快速地对秦岭岩白菜药材中化学成分进行定性分析,其中8个成分（琥珀酸、熊果苷、没食子酸、原儿茶酸、岩白菜素、儿茶素、绿原酸和咖啡酸）与对照品比对而准确鉴定,51个成分为首次在秦岭岩白菜中发现,28个成分为首次从岩白菜属植物中发现,可为秦岭岩白菜药效物质研究及质量评价提供重要依据。     

2011-2012年常州市公共场所集中空调冷却水和冷凝水嗜肺军团菌污染状况

目的掌握常州市公共场所集中空调冷却水和冷凝水中嗜肺军团菌的污染情况,为预防公共场所中军团菌的传播提供科学依据。方法依据《公共场所集中空调通风系统卫生规范》（2006版）附录A冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法进行检测。结果2011年41份水样,冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检出率分别为27．5％、41．6％,2012年65份水样,冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检出率分别为38．1％、34．8％,2年的检出率差异无统计学意义;宾馆／饭店56份水样,冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检出率分别为31．4％、28．6％;商场／超市50份水样,冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检出率分别为36．1％、50．0％。2类场所中的检出率差异无统计学意义。总计冷却水71份,冷凝水35份,检出率分别为33．8％、37．1％。结论该市公共场所集中空调冷却水和冷凝水受军团菌污染,检出率较高,存在一定的健康安全隐患,应加强集中空调系统的清洗消毒。     

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的正心降脂片化学成分研究

目的 建立一种快速鉴定中药复方制剂正心降脂片的高分辨质谱分析方法,系统阐明其化学成分组成。方法 采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)对正心降脂片成分进行分析,色谱柱为Thermo Accucore aQ RP18(2.1 mm×150 mm, 2.6 μm),流动相采用乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)进行梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1。采用加热电喷雾离子源,正、负离子同时扫描模式采集数据。根据一级准分子离子精确质荷比、二级质谱碎片离子信息、文献报道和对照品比对鉴定正心降脂片的化学成分。结果 共鉴定了正心降脂片中105个化学成分,包括21个有机酸、59个黄酮类化合物(黄酮氧苷类37个,黄酮碳苷类10个,多甲氧基黄酮类化合物12个)、19个醌类化合物(11个蒽醌类和8个菲醌类)、3个二苯乙烯类化合物及3个其他类型化合物。其中29个化合物采用对照品比对进行了鉴定,并对各成分的药材来源进行了归属。结论 对正心降脂片的化学成分进行了系统、全面地分析,为其药效物质基础、质量控制及作用机制研究奠定了基础。     

藤络宁胶囊指纹图谱的建立及化学模式识别研究

摘要：目的:建立藤络宁胶囊HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别方法评价藤络宁胶囊的质量。方法:采用Agilent 5 TC-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）进行色谱分离,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,柱温30℃,检测波长345 nm,进样量为10μl。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012A版）》对指纹图谱进行相似度评价,确定共有峰,结合聚类热图分析、主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析等模式识别方法,对不同批次藤络宁胶囊进行质量评价。结果:10批藤络宁胶囊HPLC指纹图谱有18个共有峰,相似度均在0.950以上;通过聚类分析将样品按不同批次分为2大类;主成分分析与聚类分析结果一致;最后采用正交偏最小二乘-判别分析筛选出了不同批次藤络宁胶囊的5个差异标志物。通过与对照品图谱比对,确定了3号峰为绿原酸、7号峰为东莨菪内酯、13号峰为丹酚酸B。结论:建立的指纹图谱方法稳定、可靠、重复性好,可用于藤络宁胶囊的质量控制。     

实验小鼠感染鼠诺如病毒的检测

目的了解实验小鼠鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）的携带情况及其基因特征。方法在广州某实验动物中心抽取两个种系的实验小鼠,采集其粪便标本,应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测粪便标本的MNVORF2特异性基因（547bp,MNVnt5104～5650）。对阳性PCR产物进行测序并以测序结果构建基因进化树分析。结果共采集实验小鼠粪便标本20份,粪便来源的小鼠外表健康、活泼、进食正常,没有腹泻现象。MNV的阳性率为30.0%（6/20）,阳性实验小鼠种类包括昆明小鼠（3/13）和NIH小鼠（3/7）。本研究检测的6个MNVs在进化树上独立一小分支,与参考株MNV2、3、4最为相近;核酸序列比较发现6个MNVs核酸序列的同源性最高,为98.3%～99.8%。结论该实验动物中心的小鼠存在较高的MNV携带状况,并可能在饲养设施内传播,有必要进一步探讨实验小鼠携带MNV的生物学意义。     

RT-PCR与SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒的比较

目的:比较RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法检测乙型脑炎病毒(JEV)的敏感性、特异性和时效性.方法:采用RT-PCR和SYBR GreenⅠ实时RT-PCR方法对连续10倍稀释的JEV核酸样品平行检测,比较两种方法的敏感性.同时以登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸进行两种方法的特异性测试.结果:SYBRGreen Ⅰ实时RT-PCR方法可检测出 40 copies/μL的核酸分子水平,与普通RT-PCR方法相比,敏感度提高了10倍,检测时间节省2 h.两种检测方法在检测JEV方面,与登革2型病毒、诺如病毒和狂犬病毒核酸均无交叉反应.结论:与普通RT-PCR相比,SYBR Green Ⅰ实时RT-PCR是一种更敏感、快速检测JEV的方法.     

RP-HPLC法测定青黛中核苷类成分

目的建立RP-HPLC法同时测定青黛药材中尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、肌苷和胸苷5种核苷类成分的方法。方法色谱柱Agilent TC-18(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈(A)-0.05 mol/L KH_2PO_4(B)梯度洗脱:0~9 min(A,0%~0%;B,100%~100%):9~40 min(A,0%~8%;B,100%~92%);体积流量为:1 ml/min;柱温:30℃;检测波长为254 nm;进样量:20μl。结果所建RP-HPLC方法适合于检测青黛药材中的核苷类成分,尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、肌苷和胸苷5种核苷成分别在1.04~5.21、1.08~5.42、2.40~12.02、0.38~1.89、0.55~2.74μg内呈良好的线性关系(r≥0.999 5),平均回收率为98.74%、100.35%、98.14%、99.80%、99.30%,RSD2.00%。结论所建RP-HPLC分析方法简单、准确可靠、重现性良好,可应用于青黛药材中的核苷类成分含量测定。     

三益丹对大鼠心肌缺血的改善作用

目的观察三益丹对大鼠心肌缺血的改善作用。方法皮下多点注射ISO(85 mg/kg)构建SD大鼠心肌缺血模型,随机分为正常组,模型组(ISO 85 mg/kg),复方丹参滴丸组(85 mg/kg)、三益丹低、中、高剂量组(37.5、75.0、150.0 mg/kg),连续灌胃给药14 d。心电图监测大鼠心电图ST段的变化;HE染色观察心肌病理损伤程度;检测大鼠血清CK、LDH、AST心肌酶水平,cTn-I、MDA、NO、TNF-α、IL-6水平。结果与模型组比较,三益丹抑制心肌缺血大鼠心电图ST段抬高(P<0.05),降低血清中CK、LDH、AST水平(P<0.05),降低cTn-I、MDA、NO、TNF-α、IL-6水平(P<0.05),减轻心肌病理损伤程度。结论三益丹对ISO诱导大鼠心肌缺血模型具有明显的改善作用。     

实时直接分析质谱法 快速鉴别大果飞蛾藤药材

目的:建立一种大果飞蛾藤药材的快速鉴别方法.方法:采用实时直接分析离子源(direct analysis in real time ionization source,DART)结合离子阱质谱快速鉴别大果飞蛾藤药材,载气温度设为300℃,格栅电压设为+350 V/-200 V.定性鉴别采用比对东莨菪素、绿原酸特征离子和...     

不同试剂盒对乙脑病毒RNA提取效能的比较

目的比较常见的3种商售RNA提取试剂对乙脑病毒检测的相对效率、耗时和成本,为实验室应用及检测结果的评价提供依据。方法对乙脑病毒参考株悬液作10-1～10-4系列稀释,选用QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA MiniKit、Sangon生物公司的RNA提取试剂盒和Invitrogen公司的Trizol试剂3种核酸提取方法提取上述样本RNA,用TaqMan实时荧光定量反转录聚合酶链反应对其提取效率进行评价,并比较3种试剂(盒)的耗费时间和价格。结果对不同稀释度乙脑病毒样本的检测,均以QIAGEN公司QIAamp Viral RNA MiniKit检测的敏感度最高。以该试剂盒的提取效率为100%,则Invitrogen和Sangon生物公司RNA提取试剂(盒)的提取效率分别为77.4%～86.8%和64.2%～74.1%。3种试剂(盒)对cDNA起始模板量的估计也有明显的影响,差别达到1～3个数量级,以QIAGEN公司的试剂盒最敏感。3种试剂(盒)提取RNA耗时分别为60min、100min和70min,价格效率比分别为46元、23元和20元。结论RNA提取试剂可影响JEV荧光定量PCR检测的结果,...