七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系

目的:观察7种黄酮类化合物时重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析.方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2 α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值.结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63 umol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB.结构效应关系分析表明,C6,C3'和C4'上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个.OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2'和C5'上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用.结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置.     

奶牛主要过敏原β-乳球蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建

目的 克隆奶牛主要过敏原β-乳球蛋白(BLG)基因及其原核表达载体的构建.方法 RT-PCR克隆奶牛主要过敏原BLG的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增奶牛BLG基因的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体.结果 克隆了奶牛主要过敏原BLG基因,且构建了其原核表达载体.该基因含有长度为537 bp的开放阅读框,编码178个氨基酸.该蛋白质的相对分子质量为19 883,等电点为5.14(GenBank数据库中的登录号为EU883598).序列同源性分析发现其与数据库中已知的BLG基因同源性很高.结论 成功克隆了奶牛主要过敏原BLG基因及其原核表达载体的构建,为进一步奶牛主要过敏原BLG的重组表达和免疫活性鉴定等奠定基础.     

1,8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的观察1, 8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,以寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度1, 8-二羟蒽醌对CK2活性的影响。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ32P]ATP的[32P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。1, 8-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,半数抑制浓度(IC50 )为23. 90μmol·L-1; 与ATP呈竞争性抑制CK2的活性, 抑制常数Ki值为16. 08μmol·L-1。结论1, 8 -二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。     

白血病患儿和健康儿童TPMT基因多态性检测分析

Ps在两组人群的等位基因频率差异无统计学意义.结论 发现了两个新的基因突变位点,提供了为预测不同个体间对硫嘌呤类药物潜在敏感性差异的遗传学标志.确定了两种已知cSNPs在中国AL患儿及健康儿童中的基因型分布和等位基因频率,发现它们与白血病的易感性无相关性.     

白藜芦醇诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中caspase-6的活化

目的:探讨白藜芦醇(Res)诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中是否有caspase-6的活化。方法:用Western-blot分析caspase-6酶原的裂解,半定量RT-PCR检测caspase-6mRNA表达的改变,比色法测定caspase-6活性的变化。结果:用Res 0(对照)、25、50、100、200μmol/L处理细胞24小时,caspase-6酶原的表达随药物浓度的增加而减少,100 μmol/L时开始出现活性裂解片段P20(20 kD),200μmol/L时P20增加;caspase-6 mRNA的表达呈浓度依赖性的增加(P<0.01);caspase-6活性呈浓度和时间依赖性的升高(P<0.01)。结论:Res诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中有caspase-6的活化。     

三种方法对儿童肺炎支原体感染诊断的动态评价

目的评价荧光定量PCR(FQ-PCR)检测肺炎支原体(MP)-DNA(MP-DNA),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MP-IgM,以及MP快速培养三种方法对儿童MP感染诊断的临床价值。方法对经临床和实验室诊断MP感染的患儿同时进行三种方法检测。并分别在病程1、3个月时重复检测。结果 MP感染患儿共153例。入院时首次检测,FQ-PCR阳性率为96%,ELISA为71%,MP快速培养法为24%。其中MP快速培养法的检出率在≤3岁组明显高于>3岁组,差异有统计学意义(P<0.05)。随访至1个月时,MP-DNA检测结果仍有50%以上阳性,而MP-IgM则保持较高的阳性率,此时仍然有44例(29%)患儿存在咳嗽,其中28例(64%)MP-DNA和MP-IgM均为阳性。随访至3个月时有4例(3%)患儿仍存在咳嗽,2例(50%)MP-DNA和MP-IgM均为阳性。结论在三种诊断儿童MP感染的方法中,FQ-PCR检测MP-DNA最敏感,其次为ELISA检测MP-IgM抗体,MP快速培养敏感性最低。MP-IgM检测阳性率至3个月时仍然维持较高水平。     

腹腔镜辅助下自体肾移植术治疗复杂肾肿瘤

目的探讨腹腔镜辅助下自体肾移植术在复杂肾肿瘤治疗中的应用。方法回顾性分析2018年5月始3例接受腹腔镜辅助下自体肾移植术治疗患者围手术期与随访资料。3例患者中右肾血管平滑肌脂肪瘤伴肾静脉及下腔静脉瘤栓1例,左侧功能性孤立肾巨大肾癌1例,完全内生性T1a期肾癌1例。肾脏切除手术在腹腔镜辅助下完成,肾脏取出体外后立即进行肾脏灌注,并在冷缺血状态下切除肾肿瘤并行肾脏修补,然后将肾脏移植于髂窝内。结果3例患者手术均获成功,手术时间分别为330 min、280 min、220 min,手术失血量100~200 mL,肾热缺血时间20~60 s,围手术期无输血,术后无继发性出血、尿瘘等并发症。随访时间10~18个月,患者移植肾功能良好,未发现肿瘤复发或转移,无肾积水及肾动脉狭窄等。结论腹腔镜辅助下自体肾移植术是需要保留肾脏的复杂肾肿瘤患者安全有效的治疗选择。这项治疗方法可以帮助特定患者保留脏器,提高生活质量。     

重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定

目的　研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法　将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose柱层析分离 ,SDS PAGE银染。结果　重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为 4 2ku蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 30 6 %。从2 87mg可溶性蛋白质中得到 4 7mg纯化蛋白。SDS PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的CK2α和 β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。结论　重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2α亚基     

9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析

目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。