DNA多态性分析凝胶干胶保存法及其法医学应用价值

目的：探讨凝胶干胶保存法及其在法医学中的应用价值。方法：采用饱和酚／氯仿抽提法提取血祥DNA，STR—PCR进行扩增，6％变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，聚丙烯酰胺凝胶经银染显色后，采用玻璃纸处理制成干胶。结果：将银染后的聚丙烯酰胺凝胶及时进行拍照同时将其制成干胶，用Marker做对照通过测量DNA带的位置发现所得干胶同原始胶及拍照获取胶的结果一致。结论：通过玻璃纸干胶保存法可使原始资料永久而真实的保存，此方法对法医物证的保存具有极其重要的意义。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖攻击小鼠抗炎症细胞因子表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）攻击小鼠白细胞介素-4（IL-4）、IL-10的动态变化规律，以及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法随机将小鼠分组，每组7只。腹腔注射LPS10mg／kg，于攻击后0、2、4、6和12h检测血清、肺组织IL-4和IL-6表达高峰的时间。对照组腹腔注射生理盐水0．2ml；LPS组腹腔注射LPS10mg／kg；LPS＋CCK-8组在注射LPS前30min腹腔注射CCK-8 60μg／kg；CCK-8组腹腔注射CCK-8 60μg／kg。用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录-聚合酶链反应（PT—PCR）方法检测各组小鼠血清和肺组织中IL-4、IL-10的含量及其mRNA的表达情况。结果LPS攻击后2h血清及肺组织IL-4、IL-6均显著升高，血清IL-4、IL-6于4h和6h达高峰；肺组织IL-4、IL-6则均于6h达高峰。说明LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-10的蛋白及mRNA表达均增加；预先注入CCK-8可使IL-4和IL-10的蛋白以及mRNA表达均进一步增加（P均〈O．01）；而单独注射CCK-8对血清、肺组织IL-4、IL-10的表达无明显影响。结论CCK-8可能通过进一步增加LPS攻击小鼠IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。     

八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊紊（CCK-8）调节脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞核转录因子-κB（NF—κB）表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304；用溶剂（生理盐水）、LPS、CCK-8、CCK受体（CCK—R）非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK—A受体（CCK—AR）特异性拮抗剂CR-1409、CCKB受体（CCK—BR）特异性拮抗剂CR-2945分别或联合刺激ECV-304细胞1h。用蛋白质免疫印迹法（Western blot）榆测NF-κB p65蛋白表达；用免疫细胞化学技术榆测NF—κB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较，LPS可诱导ECV-304细胞NF-κB p65蛋白核移位，且其表达明显上调；CCK-8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调；CCK受体拮抗剂可翻转CCK-8的上述抑制效应，其中CR-1409、CR-2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK-AR和CCKBR参与介导了CCK-8对LPS诱导ECV-304细胞NF—κB表达的抑制作用，其中CCK—BR的作用比CCK—AR稍强。     

三七总皂苷对缺血再灌注大鼠脑组织CaMKⅡβ mRNA及蛋白的影响

目的 研究三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马及皮层钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱβ mRNA及蛋白表达的影响.方法 实验大鼠随机分为实验对照组、伪手术组、模型组、PNS治疗组,采用尼龙线插线法建立局灶性脑缺血再灌注模型.治疗组于术后2、14、26、38 h分别于腹腔给予50 mg/kg PNS,各组大鼠于48 h处死,急性分离海马及皮层组织,分别采用RT-PCR及Western印迹技术检测CaMK Ⅱβ mRNA及蛋白表达.结果 海马组织与皮层的CaMK Ⅱβ mRNA表达变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ mRNA表达没有显著性差异(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMK Ⅱβ mRNA表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).采用Western印迹从蛋白质水平检测CaMK Ⅱβ表达,结果显示:海马组织与皮层的变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ蛋白表达没有明显变化(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA蛋白表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMKⅡβ 蛋白表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).蛋白变化趋势与基因表达结果一致.结论 PNS可能通过降低缺血再灌注大鼠海马及皮层CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达对脑神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用.     

力学拉伸强度对小鼠单核细胞RAW264-7诱导分化为破骨细胞的影响

背景:生物力学已被证实对骨组织细胞的形成、增殖和成熟起重要作用.目的:观察力学拉伸强度对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化成破骨细胞的影响.设计、时间及地点:随机对照体外细胞观察实验,于2008-07/2009-01在解放军军事医学科学院卫生装备研究所完成.材料:小鼠单核,巨噬细胞系RAW264.7由中国协和医科大学基础医学细胞中心提供.方法:对小鼠单核细胞RAW264.7采用巨噬细胞集落刺激因子和破骨细胞分化因子诱导4 d后,分别施加0,1 000,1 500,2 000,2500,5 000 με的基底拉伸应变3 d,1 h/次,1次/d,以静态诱导为对照.主要观察指标:拉伸3 d后,镜下观察各组破骨细胞形态,MTT法检测细胞增殖,半定量RT-PCR检测破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶、基质金属蛋白酶9、核因子kB受体活化因子、组织蛋白酶K和碳酸酐酶Ⅱ型基因表达及变化.结果:拉伸3 d后,镜下观察可见1 000,1 500 με诱导组的破骨细胞数量较静态组减少,破骨细胞形态小,胞核数目较少;2 000,2 500,5 000 με诱导组的破骨细胞数量随力学强度增加而增加,伴破骨细胞形态增大,胞核数目增多.与静态诱导组相比,5 000με诱导组细胞增殖明显降低,而1 000～2 500 με诱导组细胞增殖差异无显著性意义,表明5 000με诱导组促进破骨细胞形成和融合.2 000,2 500 με诱导组上调破骨细胞表型基因抗酒石酸酸性磷酸酶、核因子kB受体活化因子、基质金属蛋白酶9的mRNA表达,5 000 με诱导组下调破骨细胞表型基因表达,1 000,1 500 με诱导组对破骨细胞表型基因表达无明显影响.所有应变诱导组骨吸收功能相关基因组织蛋白酶K、碳酸酐酶Ⅱ型表达未见显著影响.结论:力学因素可直接影响破骨细胞的分化,低强度载荷抑制破骨细胞分化,较高强度的生理载荷促进破骨细胞分化和功能,病理学过度载荷抑制破骨细胞分化.     

复方丹参制剂对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响

用补体致敏酵母菌血凝法检测３种不同的复方丹参制剂对小鼠红细胞免疫粘附功能的影响。提示，３种复方丹参制剂对小鼠红细胞免疫粘附功能均有增强作用，而复方丹参滴丸对小鼠红细胞免疫粘附功能的增强作用明显强于另外两种复方丹参制剂对小鼠的红细胞免疫粘附功能的增强作用。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马磷酸化CREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响

目的:研究三七总皂甙(PNS)对吗啡依赖及纳络酮催促戒断大鼠海马组织CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制. 方法:应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时,采用4种不同剂量PNS进行灌胃. 采用Western blot和电泳迁移率改变分析法(EMSA)分别观察PNS对吗啡依赖及戒断大鼠海马组织总CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响. 结果:①不同剂量PNS组、吗啡成瘾(MOR)组及纳络酮催促戒断(NAL)组大鼠海马组织总CREB蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);②MOR组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值略高于对照组(P>0.05),NAL组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值明显高于对照组和MOR组(P<0.01);③PNS可以剂量依赖性的抑制纳络酮催促戒断所引起的pCREB蛋白表达增高和CREB/DNA结合活性的增强. 结论:PNS可以剂量依赖的抑制吗啡成瘾及纳络酮催促戒断诱导的大鼠海马组织CREB磷酸化和CREB/DNA结合活性的增强.     

阿苯哒唑对鼠体内旋毛虫幼虫蛋白质、氨基酸及元素含量的影响

目的 :探讨阿苯哒唑对旋毛虫幼虫的驱虫机理。方法 :将感染旋毛虫的小鼠分为对照组和服用阿苯哒唑药物的实验组 ,分别对两组鼠肌肉中提取的旋毛虫幼虫进行了蛋白质、氨基酸及所含元素的检测。结果 :实验组和对照组氨基酸含量的变化表明 :用药前后小鼠的 18种氨基酸含量中 ,分别有 5种氨基酸的含量发生了显著性变化 ;实验组和对照组蛋白质含量的变化表明 :实验组蛋白质含量较对照组含量有明显减少 ;通过比较两组元素含量表明 :10种宏量及微量元素中有 8种元素含量有显著性变化。结论 :阿苯哒唑对鼠体内旋毛虫幼虫主要营养和能量来源的的蛋白质、氨基酸及元素含量有明显的影响 ,干扰虫体正常的代谢功能