针刺肝胆经穴治疗偏头痛207例临床研究

目的:观察针刺肝胆经穴治疗偏头痛的临床疗效。方法:将268例偏头痛患者随机分成针刺组及对照组,按各组方案针刺或服药,并在治疗前后检测颈静脉血中降钙素基因相关肽(CGRP)及P物质(SP)含量。结果:针刺组总有效率和显效率均明显优于西药组(P<0.01);针刺组治疗前偏头痛患者颈静脉血中CGRP及SP含量明显高于正常对照组(P<0.01),针刺治疗后CGRP及SP含量较治前明显下降(P<0.05)。结论:针刺肝胆经穴不仅对偏头痛有良好的治疗效果,而且能在一定程度上调节CGRP及SP的释放。     

平肝潜阳方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及DNA甲基化水平的影响

目的观察平肝潜阳方对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的抑制作用及DNA甲基化水平的影响。方法采用组织贴块法培养VSMCs,制备平肝潜阳方含药血清。将培养细胞分为正常组(原代培育的VSMCs)、模型组、叶酸组及平肝潜阳方组(下称中药组)。以AngⅡ作为诱导复制VSMCs增殖及迁移模型,在AngⅡ诱导VSMCs培育24 h后,叶酸组加入40μg/mL叶酸干预48 h,中药组加入5%中药血清干预48 h。采用CCK-8(Cell Counting Kit)试剂盒绘制VSMCs生长曲线,MTT法测定VSMCs增殖活性,体外细胞划痕实验检测细胞迁移情况,以抗5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化水平;Real-time q-PCR方法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平。结果 AngⅡ在10-6mol/L浓度下诱导24 h后可促进VSMCs生长。与正常组比较,模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加,DNA甲基化水平明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs生长、细胞增殖活性及迁移数量均明显降低,DNA甲基化水平升高(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组VSMCs DNMT1 mRNA表达水平降低(P0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs DNMT1 mRNA表达明显增强(P0.01)。结论平肝潜阳方可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,可导致基因组DNA高甲基化,其DNA甲基化水平改变可能与DNMT1表达有关。     

天麻钩藤饮对高血压肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质的影响

目的:从蛋白质组角度探讨高血压肝阳上亢证证候相关蛋白及天麻钩藤饮降血压和改善肝阳上亢证症状的机理。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离正常大鼠以及肝阳上亢证大鼠天麻钩藤饮治疗前后肾上腺的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果:与正常组匹配,肝阳上亢证组与治疗组大鼠肾上腺图象匹配率分别为90%、95%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点PI 3-8,分子量Mr 14.4-75 kD范围。与正常组比较,肝阳上亢证组中蛋白质点表达上升2倍及以上的点有22个,下降2倍及以上的点有15个。而在治疗组中这些表达上升的点均有下降,有14个点下降达2倍以上,其中有10个下降后接近于正常组;这些表达下降的点均有上升,有9个点上升达2倍以上,其中有5个上升后接近于正常组。结论:这些有显著差异的蛋白质可能是高血压肝阳上亢证证候相关蛋白,天麻钩藤饮的降压和改善症状也可能与上述蛋白质的改变有关。     

汉族高血压人群CAMK4基因多态性与氨氯地平降压疗效的相关性

目的：研究二氢吡啶类钙通道阻滞药(氨氯地平)的降压疗效与汉族高血压人群钙/钙调素依赖性激酶4 (CAMK4)单核苷酸多态性间的关联。方法：对108例轻、中度汉族原发性高血压患者给予氨氯地平 5 mg/d,为期8周的治疗,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术对CAMK4基因rs10491334位点进行分型,同时分析基因型与氨氯地平降压疗效间的关系。结果：CAMK4基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡分布。C,T等位基因的频率分别为88.89%和11.11%。患者治疗前各基因型组的收缩压和舒张压比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,各基因型原发性高血压患者收缩压和舒张压较治疗前下降(P<0.05)。CC型与CT型在降低收缩压幅度方面显著优于TT型(P<0.05),CC型高血压患者的总有效率明显高于CT及TT型患者(P<0.01)。结论：轻、中度汉族原发性高血压患者CAMK4基因rs10491334位点基因多态性与服用钙通道阻滞药的降压疗效有相关性。     

平肝潜阳药物治疗甲亢肝阳上亢证大鼠肾上腺差异蛋白质组学分析

目的：观察平肝潜阳药物对甲亢肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质表达的影响，为进一步探讨平肝潜阳药物治疗甲亢肝阳上亢证作用机理提供依据。方法：左旋甲状腺素（L-T4）腹腔注射和附子汤灌胃造成甲亢肝阳上亢证模型，应用蛋白质组学技术比较正常组、甲亢肝阳上亢证组及平肝潜阳药物治疗组中肾上腺的差异蛋白质。结果：3组蛋白质斑点总体分布相似，主要分布在等电点pI5～8．5，分子量M8．5～135．5kD。与正常组比较，甲亢肝阳上亢证模型组中蛋白质点表达上调的有4个，下调的点有9个；在模型组中上调的4个点在治疗后均较治疗前有下降；而模型组中下调的9个点在治疗后均较治疗前有上调。结合生物信息学进行质谱鉴定，发现其中10个蛋白质分别为神经介素B受体，NG-二甲基精氨酸二甲氨基水解酶，核苷二磷酸激酶，胶原蛋白（Ⅱ）α1链，泛素，硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶，苹果酸脱氢酶，硫氧还蛋白过氧化物酶，热休克蛋白-27，膜联蛋白-A1。结论：平肝潜阳药物治疗后的甲亢肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质的表达上具有差异，平肝潜阳药物的作用机制可能与所鉴定的这10个蛋白质的抗氧化、调节交感-肾上腺髓质功能及影响能量代谢相关酶等作用有关。     

电针对单纯性肥胖大鼠下丘脑组织中瘦素和神经肽Y表达的影响

目的:观察电针对单纯性肥胖大鼠下丘脑瘦素和神经肽Y表达的影响,探索电针减肥的机制。方法:实验于2005-12/2006-06在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成。①取1月龄刚断乳SD雄性大鼠,随机取6只饲以普通饲料为正常对照组,其他大鼠饲以高脂饲料,喂养3个月后,选择体质量超过正常对照组20%的单纯性肥胖大鼠12只,随机分为模型组和电针组2组,每组6只。②电针组大鼠电针双侧足三里、天枢、三阴交穴,采用疏密波,电流强度0.3～0.6mA,留针20min,1次/d,共20次;其他2组不电针。实验期间均饲以普通饲料。③观察实验大鼠体质量、体长、Lee's指数及体脂,采用Western-blot技术检测下丘脑组织中瘦素、神经肽Y表达的变化。结果:18只大鼠进入结果分析。①模型组大鼠体质量和Lee’s指数高于正常对照组[(451.8±14.8),(323.6±6.8)g;324.25±1.4,305.14±1.5;P均<0.01];电针组电针后体质量和Lee’s指数低于电针前[(372.2±20.4),(454.7±19.7)g;307.71±1.5,323.56±1.6;P均<0.01]。②模型组大鼠心包、肾周和附睾脂肪量均高于正常对照组(P<0.01);电针组电针后心包、肾周和附睾脂肪量低于电针前(P<0.01)。③模型组下丘脑组织中瘦素蛋白表达低于正常对照组(0.62±0.11,0.88±0.15,P<0.01),电针组高于模型组(0.85±0.13,P<0.01);模型组下丘脑组织中神经肽蛋白表达高于正常对照组(2.42±0.27,1.75±0.24,P<0.01),电针组高于模型组(1.87±0.21,P<0.01)。结论:电针有良好的减肥效果,其作用可能与电针增强下丘脑组织瘦素蛋白的表达、同时抑制下丘脑组织中的神经肽Y蛋白表达有关。     

针刺治疗脑缺血再灌注损伤：与减轻炎症反应有关？

摘要 背景：脑缺血己成为严重影响人类健康的主要疾病之一。针刺治疗急性脑缺血的疗效是公认的但其治疗机制不明。目的：探讨脑缺血状态下核转录因子-kB（NF-kB）、细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的变化及针刺的干预作用。 设计及时间：分子生物学实验于2008年12月至2009年10月在中南大学湘雅医院神经外科实验室完成。 研究对象/材料/对象：健康SD大鼠46只随机分成假手术组、脑缺血组、针刺预处理组,针刺干预组。方法：以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,并用针刺干预,然后应用RT-PCR逆转录反应、蛋白免疫印迹法分析观察各组大鼠脑组织NF-kB ,ICAM-1、VCAM-1 mRNA及蛋白的表达。结果：脑缺血大鼠动物模型被成功复制,其神经功能评分表明,针刺明显改善上述指标,尤其对再灌注70h组的影响显著;针刺组脑缺血再灌注后NF-kB、ICAM-1、 VCAM-1mRNA及蛋白质的表达明显下降。结论：针刺可明显改善脑缺血再灌注后的神经功能评分指标,并且该作用可能与抑制脑缺血再灌注后NF-kB、ICAM-1、VCAM-1的表达,下调脑缺血区域组织的NF-kB、ICAM-1、VCAM-1 mRNA及蛋白质表达水平有关。     

大鼠弥漫性轴索损伤后丘脑差异蛋白质表达

目的:从蛋白质组角度探讨大鼠弥漫性轴索损伤后丘脑差异蛋白质表达的改变.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离空白对照组(n=10)及脑外伤组(n=15)大鼠的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析.结果:与空白对照组匹配,脑外伤组大鼠丘脑图像匹配率为95%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点pI 3～8,分子质量14.4～75.0 kD范围.与空白对照组比较,脑外伤组中蛋白质点表达上升的点有16个,下降的点有18个.结论:脑外伤可引起丘脑中蛋白质的改变.     

天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠p38 MAPK/HSP27通路影响的研究

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/热休克蛋白27(HSP27)通路在天麻钩藤饮干预自发性高血压大鼠(SHR)中的作用机制。方法 将30只SHR按随机数字表法分为模型组、缬沙坦组(0.03 g/kg)和天麻钩藤饮组(1 g/kg),每组各10只,WKY大鼠10只为正常组,缬沙坦组和天麻钩藤饮组大鼠分别给予相应药物灌胃,正常组与模型组大鼠灌胃等量生理盐水,连续8周。测量第0、14、28、42、56天各组大鼠的血压;给药结束后,观察各组大鼠的行为学变化;采用苏木精-伊红染色法观察血管形态结构变化,天狼星红染色法观察血管纤维化程度;采用电子显微镜观察细胞自噬超微结构;采用免疫荧光法检测血管组织中磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化HSP27(p-HSP27)的平均荧光强度;采用分光光度法检测血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和血管组织抗超氧阴离子的含量;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察血管衰老改变;采用实时荧光PCR法检测血管组织中p38 MAPK、MAP激酶活化蛋白激酶-2(MAPKAPK-2)、HSP27、自噬相关蛋白5(...     

针刺三焦经对偏头痛大鼠模型脑组织G蛋白含量的影响

目的　探讨针刺三焦经穴对偏头痛大鼠模型脑干组织G蛋白α亚基含量的变化。方法　通过皮下注射硝酸甘油 (10mg/kg)建立实验性偏头痛大鼠模型 ,将动物随机分成正常对照组、假手术组、模型对照组和针刺治疗组 ,运用免疫印迹法 (Westernblot)检测脑干组织Gia和Gsa的含量。结果　针刺治疗组与模型对照组比较 ,脑干组织中Gsa蛋白含量明显降低 (P <0 0 1) ,Gia蛋白含量明显升高 (P <0 .0 1) ,Gsa/Gia蛋白比值降低。结论　偏头痛发作可能与大鼠脑干组织G蛋白信号转导系统功能障碍有关。针刺三焦经穴治疗偏头痛可能是通过介导G蛋白信号传导通路而实现的。