家蝇蛆粉对小鼠急性毒性及致突变性作用

目的探讨家蝇蛆粉对小鼠急性毒性和致突变性,以评价其安全性。方法将家蝇3龄幼虫超声破碎的内容物溶液制成干粉,余下的幼虫壳制成壳聚糖,两者按10∶1比例进行组合混匀,制成粉末状家蝇蛆粉。以昆明小鼠为实验对象,采用最大耐受量实验、骨髓微核实验和精子畸形实验,评价家蝇蛆粉对小鼠的急性毒性和致突变性作用。结果小鼠对家蝇蛆粉的最大耐受量为33.0 g/(kg.bw),未见毒性效应或不良反应;家蝇蛆粉2.8,5.5和11.0剂量组雄性小鼠的嗜多染红细胞微核率分别为0.12%,0.14%,0.14%,雌性小鼠的嗜多染红细胞微核率分别为0.14%,0.12%,0.16%,与溶剂对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),小鼠精子畸形率分别为2.3%,1.6%,2.1%,与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论家蝇蛆粉对小鼠无急性毒性和致突变性。     

家蝇蛆粉的临床前致畸性研究

目的探讨家蝇蛆粉对大鼠的致畸性,以评价其安全性。方法家蝇蛆粉按比例定量添加到普通饲料原料中混匀,干燥,做成高、中、低剂量家蝇蛆粉饲料。将性成熟的98只SD大鼠按雌雄2：1的比例同笼交配。取64只孕鼠平均分为四组：家蝇蛆粉饲料低剂量组;家蝇蛆粉饲料中剂量组;家蝇蛆粉饲料高剂量组;普通饲料对照组。于受孕后称量体重增长情况。最后脱颈椎处死孕鼠,称子宫重量,并进行胎鼠检查。结果家蝇蛆粉饲料高、中、低剂量组与对照组相比,雌鼠体重增长未见显著差异,子宫重量未见显著差异,无吸收胎、早死胎、晚死胎;各组间雄性与雌性胎鼠数均未见显著差异;各组间雄性与雌性胎鼠的外观、体重、体长均未见显著差异。各组间胎鼠骨骼和胎鼠内脏均未见显著差异。结论家蝇蛆粉对SD大鼠未见致畸性。     

人体寄生虫学开放性实验教学初探

针对目前人体寄生虫学实验教学中存在的问题,积极开展了一系列的开放性实验教学,初步探索了开放性实验在人体寄生虫学实验教学中的应用。实践证明,开放性实验增强学生对人体寄生虫学的认识,弥补了实验教学时数的不足,学生创新性和实际动手能力等综合素质得到了明显提高,促进了实验教学改革。     

抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用

目的 研究人抗菌肽LL-37对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)生物膜的相关作用,为MRSA的预防治疗以及新药物开发应用提供新策略.方法 运用微量肉汤稀释法测定LL-37对临床MRSA菌株的最小抑菌浓度;建立96孔板及6孔板生物膜体外模型;通过结晶紫定量法以及激光共聚焦荧光染色法检测LL-37对MRSA生物膜形成的影响.结果 微量肉汤稀释法测得LL-37对临床MRSA菌株的MIC为12.5 μmol/L.不同浓度LL-37作用后,结晶紫定量法结果表明1/20 MIC亚抑菌浓度的LL-37即可抑制生物膜形成(P＜0.01),且抑制率随用药浓度增加也随之提高,在1/4 MIC条件下生物膜形成抑制率可达到63％.与生理盐水对照组相比,激光共聚焦扫描显微镜下可见,用药组生物膜排列稀疏,厚度变薄,组成菌量明显减少.结论 低浓度的LL-37能够抑制MRSA生物膜的形成,并且对成熟生物膜结构也具有一定的破坏作用.     

家蝇Attacin基因在家蝇三龄幼虫中的时间表达模式研究

目的探讨家蝇Attacin mRNA在幼虫各个时期的表达,为进一步研究家蝇的免疫防御打下基础。方法对家蝇三龄幼虫进行诱导,分别取诱导前0h和诱导后2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h的家蝇mRNA,进行RT-PCR,分析attacin基因在家蝇体内的时间表达模式。结果家蝇三龄幼虫体内的attacin基因在诱导前后均有表达,诱导后表达增强16h达到相对高水平,维持约24h,而后开始下降。结论Attacin基因在家蝇三龄幼虫中是组成性表达,对进一步了解其在家蝇免疫系统,丰富对昆虫天然免疫的认识具有积极作用。     

筛选家蝇抗菌肽相关基因的oligo探针设计

目的设计筛选家蝇抗菌肽相关基因的寡核苷酸(oligonucleotide)探针。方法用生物学软件ArrayDesig-ner2.0,结合NCBI开发的免费生物信息学软件,对GenBank数据库中部分昆虫抗菌肽基因编码区保守序列设计特异性高、Tm值接近、长度均一的oligo探针。结果共设计出372条oligo探针,长度为50bp,GC含量为40%～60%,Tm为70～75℃。结论用GenBank数据库资源,结合生物学软件Array Designer2.0及NCBI中相关生物信息学软件能快速而有效地设计出筛选家蝇抗菌肽基因的探针。     

家蝇生长发育各阶段抗菌肽基因表达情况的研究

目的从基因角度分析家蝇生长发育各阶段抗菌肽的表达情况。方法制备家蝇卵以及Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄幼虫、蛹和成虫等6个生长阶段的总RNA,采用半定量RT-PCR技术,以磷酸甘油醛脱氢酶（GADPH）基因作为内参照,根据GenBank公布的家蝇抗菌肽基因-天蚕素（cecropin）基因、防御素（defensin）基因和攻击素（attacin）基因的核苷酸序列设计特异性引物进行RT-PCR扩增,分析家蝇生长发育各阶段抗菌肽基因mRNA表达量。结果上述6个生长发育阶段均检测到cecropin、defensin和attacin等3种抗菌肽基因的表达,分别在210、300和650bp出现一条带,与其理论值相符。其中Ⅲ龄幼虫期和成虫期抗菌肽基因mRNA的表达量最高（3种抗菌肽基因电泳图谱扫描光密度与内参基因GAPDH光密度的比值分别为1.61、1.99和1.62,1.47、1.92和1.59）,卵期、Ⅰ龄幼虫期和蛹期表达量相对较低（3种抗菌肽基因电泳图谱扫描光密度与内参基因GAPDH光密度的比值分别为0.49、0.49和0.42,0.72、0.49和0.64,0.65、0.39和0.91）。结论家蝇抗菌肽基因在不同发育阶段均普遍表达,但表达水平存在明显差异。     

β-防御素2真核表达载体的构建及其在肝癌细胞Hepa1-6中的稳定表达

目的 克隆抗菌肽β防御素2(mBD2)基因,构建真核分泌性表达载体,使其在Hepa1-6细胞中稳定表达.方法 Trizol试剂提取C57BL/6鼠肾总RNA,RT-PCR扩增mBD2成熟肽基因,Overlap-PCR在成熟肽基因上游加上鼠IgК信号肽基因,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),PCR、酶切和测序鉴定正确后,脂质体法转染Hepa1-6细胞,G418筛选,RT-PCR和Western印迹法从mRNA和蛋白角度鉴定mBD2分子的表达.结果 成功克隆含有信号肽的IgК-mBD2序列,并且构建pcDNA3.1(+)/IgК-mBD2真核分泌性表达载体,实现了mBD2分子在Hepa1-6细胞中稳定表达,RT-PCR从细胞总RNA中扩增得到202 bp的IgК-mBD2基因,Western印迹法鉴定细胞培养上清中有mBD2蛋白分子表达.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)/IgК-mBD2真核分泌性表达载体,转染得到稳定表达mBD2的Hepa1-6细胞株,为进一步研究mBD2的生物学特性及抗肝癌机制奠定细胞学基础.