荧光定量PCR检测GⅡ型扎幌样病毒方法的建立

[目的]建立贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。[方法]通过用PEG6000对贝类中GⅡ型扎幌样病毒进行浓缩,用Trizol法提取病毒RNA,设计出针对GⅡ型扎幌样病毒保守序列的通用引物与探针,建立GⅡ型扎幌样病毒荧光定量PCR检测方法。[结果]此荧光定量PCR方法对贝类中GⅡ型扎幌样病毒检测呈现高度特异性,与诺瓦克样病毒、GⅠ型扎幌样病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝/μl,线性范围为102～106拷贝,标准曲线的相关系数为0.9993。[结论]本研究建立了贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。     

正交设计优化大肠杆菌表达LL-37-haFGF的摇瓶发酵条件

目的在摇瓶发酵条件下,研究重组大肠杆菌诱导表达融合蛋白LL-37-haFGF的表达规律。方法以目的蛋白的相对表达量为评价指标,通过单因素分析和正交设计,从pH值、诱导时机、诱导时间、诱导剂浓度4个方面,对其发酵条件进行优化。结果影响LL-37-haFGF产生水平的主次因素顺序:诱导时机>pH值>诱导时间>诱导剂浓度。优化最佳工艺参数为:诱导时机为A600达0.6,pH值为7.5,IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L,诱导时间为4 h,LL-37-haFGF表达量达53.7%。结论该表达条件的优化为LL-37-haFGF的进一步功能研究和应用奠定基础。     

家蝇抗菌肽及其基因的克隆进展

家蝇抗菌肽是一类由结构基因编码的小分子肽类物质,是构成其自身防御体系的重要组分,具有广谱的抗菌、抗病毒、抑肿瘤细胞等生物活性,已引起人们的广泛关注。文中主要介绍家蝇抗菌肽的产生、结构特点、生物学功能及其基因的克隆进展。     

缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究

目的构建、表达和纯化缺乏第4外显子的IL-7剪接变异体IL-7δ4(interleukin-7 splice variant lacking exon4,IL-7δ4),并对其生物活性进行初步研究。方法将TA克隆成功的IL-7δ4基因克隆至p ET-21b载体中,构建p ET-21b-IL-7δ4的原核表达载体,阳性克隆经测序正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IL-7δ4重组蛋白的表达、复性、纯化、Western blot法鉴定,分析其对外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2表达及凋亡的影响。结果成功构建重组原核表达质粒p ET-21b-IL-7δ4,表达蛋白的相对分子质量为12 400,与预期大小一致;复性效率较高(约65%),纯化后获得的蛋白纯度大于95%,Western blot证实其为rh IL-7δ4;与对照组比较,rh IL-7δ4能明显诱导外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,并抑制其凋亡(P<0.01)。结论成功表达高纯度且具有生物活性的rh IL-7δ4复性蛋白,它能明显上调外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,起抑制PBMCs凋亡作用。     

蟛蜞菊活性成分的药理学研究进展

目的:为蟛蜞菊的合理开发利用提供参考。方法:查阅近年来国内、外杂志发表的关于蟛蜞菊活性成分的文献,对蟛蜞菊活性成分的主要药理作用及其可能的作用机制进行综述。结果:蟛蜞菊活性成分具有保肝、抗病毒、抗肿瘤和消炎镇痛等药理作用。结论:蟛蜞菊活性成分的药理作用比较广泛,在中药材开发方面具有深入研究和探索的价值。     

浅谈人体寄生虫学的教学改革

从主观和客观因素方面,对我国高等医学院校人体寄生虫学课程呈现萎缩的原因进行分析,并探讨如何从培养目标、教学内容和教学模式等方面进行人体寄生虫学的教学改革。     

新型融合多肽HTPP-MDC体外抑制HBV复制活性及亚细胞定位

 目的： 研究肝细胞靶向穿膜肽-家蝇天蚕素（HTPP-MDC）融合多肽体外对乙型肝炎病毒（HBV）的抑制作用及其在肝细胞中的定位。方法：不同浓度HTPP-MDC分别与HepG2.2.15细胞和Chang liver细胞共培养,用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测药物对细胞的毒性作用,应用ELISA和实时荧光定量 PCR技术定量研究HTPP-MDC对HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg、HBeAg及HBV DNA复制的影响。应用激光共聚焦技术研究HTPP-MDC在肝细胞中的定位。结果：HTPP-MDC 在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞系分泌HBsAg和HBeAg,对HBV DNA的复制亦有显著抑制作用。激光共聚焦显微镜观察显示HTPP-MDC进入细胞内部。结论：HTPP-MDC在体外对 HBV 复制有较强的抑制作用,并能快速透过细胞膜进入细胞内,有望用于临床治疗慢性乙型肝炎相关疾病。