诱导构建最佳类似人类2型糖尿病大鼠的造模方式

目的:观察注射链脲佐菌素大鼠在给予高脂高糖不同时间后血糖、血脂、糖耐量、胰岛素敏感性等的变化情况,以寻求最佳类似人类2型糖尿病的大鼠造模方式。方法:实验于2003-01/12在福建中医学院中心实验室及福建省中医药研究院血液流变室完成。选择雌性Wistar大鼠56只,适应性喂养1周后,随机分为7组,正常组、高脂高糖2,4,6周组、普食6周组、先注射链脲佐菌素组和单纯高脂高糖组各8只。①正常组:灌胃生理盐水。②高脂高糖2周组:先灌胃高脂高糖乳剂14d后+注射链脲佐菌素30mg/kg2次。③高脂高糖4周组:先灌胃高脂高糖乳剂28d后+注射链脲佐菌素30mg/kg2次。④高脂高糖6周组:先灌胃高脂高糖乳剂42d后+注射链脲佐菌素30mg/kg1次。⑤普食6周组:灌胃生理盐水42d后+注射链脲佐菌素30mg/kg2次。⑥先注射链脲佐菌素组:先注射链脲佐菌素(30mg/kg)2次后+灌胃高脂高糖乳剂42d。⑦单纯高脂高糖组:灌胃高脂高糖乳剂42d,不注射链脲佐菌素。腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg2次间隔4d,注射前均禁食不禁水14h。每日高脂高糖乳剂/生理盐水灌胃量均为10mL/kg。各组均自由进食普通饲料。实验过程中检测各组随机血糖及空腹血糖、葡萄糖耐量;结束后禁食不禁水16h,腹主动脉取血,测量各组大鼠的空腹胰岛素、血脂,同时取胰腺作病理检查。口服葡萄糖糖耐量试验诊断标准:大鼠禁食12h服糖后血糖峰值16.7mol/L、且120min血糖11.1mmol/L的大鼠确定为糖尿病。结果:56只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①各组大鼠血糖水平比较:高脂高糖6周组大鼠在注射链脲佐菌素后空腹血糖显著高于正常组[(12.20±0.87),(3.90±0.27)mmol/L(P<0.01)],随机血糖也显著高于正常组[(27.31±1.82),(5.01±0.41)mmol/L(P<0.01)],均达到糖尿病大鼠诊断标准,提示造模成功。其余各组大鼠血糖值均未达到糖尿病大鼠诊断标准。②口服葡萄糖糖耐量试验结果:高脂高糖6周组大鼠75%出现糖耐量异常,0.5h血糖达到(17.51±1.23)mmol/L,超过16.7mmol/L,2h后下降为(6.83±0.89)mmol/L,未回复到正常水平。然而先注射链脲佐菌素组在注射链脲佐菌素后空腹血糖为(5.98±1.59)mmol/L,随机血糖为(12.53±4.03)mmol/L,未达到糖尿病大鼠诊断标准。③各组大鼠实验后血脂水平比较:除高脂高糖2周组外,其余各组大鼠的三酰甘油水平均显著高于正常组(P<0.01)。高脂高糖6周组和单纯高脂高糖组大鼠的总胆固醇水平升高最为显著。结论:先高脂高糖6周后加腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg1次,可成功制备空腹和随机血糖均升高,且糖耐量低减、高血脂的类似人类2型糖尿病的大鼠模型。     

高等中医药院校本科生物化学课程建设与实践

基于创新型中医药人才培养目标的需要,从教材建设、教学方法、教学实验和成绩考评4个方面探讨生物化学教学改革思路与实践。通过对编写与中医药院校教学相适应的生物化学教材;推行＂以问题为导向＂、自主学习为主的PBL教学模式,以改变传统的教学方法;增补综合性实验,以训练学生的动手能力和创新能力;多因素、多环节、综合评价学生成绩等环节的教学改革工作,获得了明显的成效,促进了创新型中医药人才的培养。     

中药调心方对氧化损伤型类Alzheimer病大鼠线粒体呼吸链酶活性和钙稳态的影响

目的 观察调心方对氧化损伤型类A1zheimer病(AD)大鼠线粒体呼吸链酶活性和钙稳态的影响。方法 采用二羟延胡索酸(DHF） FeCl3 ADP左侧脑室注射法建立氧化损伤型类AD大鼠模型。Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力；C1ark氧电极法观察脑皮层线粒体呼吸链氧化酶活性；原位杂交法观察脑皮层线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达；Fura 2／AM—荧光法测定脑皮层和海马Ca^2 含量以及调心方对AD大鼠上述各项指标变化的影响。结果 与正常对照组比较,AD模型大鼠空间学习记忆能力、脑线粒体细胞色素氧化酶活性和皮层COⅡ mRNA表达明显降低，皮层和海马神经元内Ca^2 含量显著增高；调心方对上述各项指标有不同程度的改善作用.结论 调心方具有改善AD大鼠空间学习记忆能力、脑线粒体细胞色素氧化酶活性、皮层COⅡ mRNA表达和钙稳态失衡的作用。     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠脑组织淀粉样蛋白(APP) mRNA表达的影响

目的：观察调心方对活性氧所致的氧化损伤型类AD大鼠脑组织NF-κB转录因子和APPmRNA水平的影响．方法：用二羟延胡索酸(DHF)加FeCl3-ADP左侧脑室注射法复制氧化损伤型类AD大鼠模型；Morris水迷宫法检测An大鼠空间记忆能力；RT-PCR法检测鼠脑皮层和海马APPmRNA水平；免疫组化法检测鼠脑皮层和海马NF-κB转录因子表达，以及调心方对上述各项指标变化的影响。结果：与正常对照组比较，AD模型鼠空间记忆能力显下降，脑组织NF-κB转录因子和APP mRNA水平明显增高；调心方对上述指标有明显的改善作用。结论：调心方能够通过下调An大鼠脑组织NF-κB转录因子和APP mRNA表达水平，减少Aβ产生，改善AD大鼠的空间记忆能力。     

右归丸对衰老大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴功能变化的影响

目的:观察自然衰老大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能变化,并通过右归丸干预,探索补肾方延缓衰老的机理。方法:以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为肾虚衰老模型,大鼠随机分为老年对照组和右归丸组,每组35只,另设青年对照组(5月龄)35只,共3组。老年对照组大鼠常规喂养至24月龄。右归丸组大鼠自20月龄始,按相当于右归丸生药量7.5g/kg自由饮用稀释药液,每周停药2天,连续4个月;采用放射性配体结合分析法观察大鼠血中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)技术观察大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA及其多肽表达。结果:与青年组比较,老年组大鼠下丘脑CRHmRNA和CRH表达、血浆ACTH及血清CORT含量升高;与老年组比较,右归丸组大鼠下丘脑CRHmRNA和CRH表达、血浆ACTH及血清CORT含量显著下降(P0.05)。结论:自然衰老大鼠神经内分泌调控紊乱,HPA轴功能亢进;右归丸可调节HPA轴,使亢进的HPA轴功能得以改善,减轻对机体的危害而延缓衰老。     

调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间记忆能力和脑线粒体呼吸功能的影响

目的：探讨调心方对氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆能力，脑线粒体呼吸功能及其酶活性的影响。方法：采用二羟延胡索酸（DHF）加FeCl3-ADP左侧脑室注射，造成大鼠氧化损伤型类AD大鼠模型；Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力；Clark氧电极法测定脑线粒体呼吸功能各项指标，包括R3、R4、RCR、P／O、OPR及琥珀酸脱氢酶、NADH脱氢酶，CytC氧化酶活性变化及调心方的作用。结果：与对照组比较，模型鼠空间学习记忆能力，脑线粒体呼吸功能和CytC氧化酶活性显著下降，调心方对模型鼠上述指标有明显改善作用。结论：调心方具有改善氧化损伤型类AD大鼠空间学习记忆障碍提高脑线粒体呼吸功能和呼吸链复合酶活性作用。可能与其对抗自由基氧化损伤作用有关。     

补肾、健脾、益气、和血方药延缓衰老作用的比较研究

探讨补肾、健脾、益气、和血各类方药延缓衰老作用的异同点。从神经内分泌、免疫功能、抗自由基、血小板聚集以及肝蛋白质、肺cAMP含量等方面选择与衰老有关的指标,同步测试比较研究上述各类方药对自然衰老大鼠的延缓衰老作用。结果表明：上述各类方药均能提高自然衰老大鼠脾脏IL-2活性,肝蛋白质含量,肪肝SOD含量,降低肝LPO、血清E2和血小板聚集,但补肾组对延缓老年大鼠垂体-性腺功能、益气组对延缓脑功能衰老的作用最为广泛而明显;和血组对提高老年鼠肺cAMP含量有明显作用。各组方药均能提高肝蛋白质含量,但作用机理不同。     

益气化瘀补肾方对D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的影响

目的:观察益气化瘀补肾方对D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的影响。方法:8周龄雄性健康C57BL/6J小鼠30只,随机分为空白对照组、诱导盐水灌胃组及益气化瘀补肾方组。空白对照组皮下注射生理盐水,其余2组均皮下注射D-半乳糖复制腰椎间盘衰老模型;盐水灌胃组灌胃等容量生理盐水,益气化瘀补肾方组灌胃中药水溶液。连续给药10周后处死小鼠,取下腰部椎间盘,进行免疫组化分析以及实时定量RT-PCR检测。结果:免疫组化染色显示,益气化瘀补肾方可以明显降低软骨终板及纤维环中p16INK4a和p27KIP蛋白表达;实时定量RT-PCR分析发现,益气化瘀补肾方可显著增加Bmi1、CDK4和C-myc mRNA的表达,降低p16INK4a、cyclin D1、RB、p19ARF、Mdm2和p53 mRNA表达。结论:益气化瘀补肾方具有延缓D-半乳糖诱导小鼠腰椎间盘衰老的作用,并且这种延缓作用与调控衰老相关基因及细胞周期相关蛋白表达相关。     

熟地黄有效成分5-HMF对皮质酮损伤型海马神经元GCR、BDNF、SGK表达的影响

目的:观察熟地黄中有效成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对高浓度皮质酮(CORT)致海马神经元损伤及学习记忆相关蛋白学习记忆相关蛋白(GCR)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)蛋白表达的影响。方法:用24h新生大鼠原代培养海马神经细胞。第8天细胞用药处理,将细胞分为3组:正常对照组、模型组及5-HMF组。24h后,通过MTT法测定细胞活性,生化方法检测衰老特异性指标β-半乳糖苷酶活性,Western Blot检测学习记忆相关蛋白GCR、BDNF、SGK的基因表达。结果:与正常组相比,模型组细胞活力显著下降,β-半乳糖苷酶活性显著升高,GCR、BDNF、SGK蛋白表达显著性降低;0.5mg/L的5-HMF明显提高细胞活力,降低β-半乳糖苷酶活性,提高模型细胞GCR、BDNF、SGK基因表达(P0.05,P0.01)。结论:0.5mg/L 5-HMF可以保护大鼠海马神经细胞免遭高浓度皮质酮的损伤,通过调节GCR、BDNF、SGK的基因表达,可能在延缓学习记忆功能退化中发挥作用。     

左归丸及右归丸对老年大鼠学习记忆相关信号分子表达的影响

目的:观察左归丸及右归丸对老年大鼠学习记忆相关信号转导蛋白表达的影响。方法:以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年皮质酮(GC)拮抗组、老年左归组和老年右归组,另设青年对照组(5月龄)。采用Western Blot法观察各组大鼠学习记忆相关信号转导蛋白表达变化,同时观察补肾方药对上述指标异常变化的改善作用。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马组织学习记忆相关信号分子——CaM、pCaMKⅡ、pERK1/2、pCREB及pSynapsinI、Arc蛋白表达均明显降低(P0.05);补肾方药左归丸、右归丸能不同程度地改善上述指标的衰老性变化。结论:补肾方药左归丸及右归丸改善老年大鼠空间学习记忆能力的机制之一可能与延缓学习记忆相关信号分子表达的退行性变化有关。