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61.
目的对1个近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(coagulation factor FⅫ,FⅫ)缺陷症家系进行临床表型和基因变异分析,探讨其分子致病机制。方法提取基因组DNA,Sanger测序法测定F12基因所有外显子及侧翼序列;采用ClustalX-2.1-win及MutationTaster软件分析变异位点氨基酸的保守性及对蛋白质功能的影响。结果 Sanger测序结果显示先证者F12基因第9外显子存在g.6753-6755delACA纯合缺失变异,导致p.252delAsn;先证者父亲、母亲和弟弟均存在p.252delAsn杂合缺失变异;先证者妹妹为正常野生型。结论 p.252delAsn纯合缺失变异是该近亲婚配家系遗传性FⅫ缺陷症的分子发病机制。 相似文献
62.
人羧肽酶A1活性中心基因的克隆及原核表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:克隆人羧肽酶A1(carboxyrpeptidase A1,CPA1)活性中心基因,构建重组表达载体并对其进行诱导表达。方法:通过RT-PCR方法扩增出正常胰腺组织中CPA1活性中心基因,克隆入载体pGEM-Teasyr,测序分析.将该目的基因亚克隆于表达载体pGEX-4T-1,测序证实序列正确后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达重组蛋白。结果:获得了人CPA1活性中心基因,构建了重组表达质粒,表达的蛋白以SDS-PAGE分析,在Mr约46000处出现一条新生蛋白带,经凝胶薄层扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的22.1%。结论:成功克隆人CPA1活性中心基因并得到了其原核表达产物,为获得分子量小而具有相似活性的蛋白奠定了基础。 相似文献
63.
志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌多重PCR快速检测体系的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立快速检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR方法.方法 根据志贺菌ipaH基因、沙门菌ipaB基因及霍乱弧菌EPSM基因设计特异性PCR引物,加热煮沸法制备DNA模板,进行PCR扩增及琼脂糖电泳检测.结果 应用所建立的多重PCR方法能分别或同时快速、特异地检测出志贺菌606bp、沙门菌314bp和霍乱弧菌482bp的目的基因.结论 初步建立了灵敏、特异的一步法检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR体系,可用于高危腹泻致病菌的早期快速诊断. 相似文献
64.
目的:自行开发中文语音检验系统,应用于血、尿液分析仪检测数据及患者姓名中文发音等事务管理.方法:采用Microsoft Access 2000建立相关数据库/表,在可视化编程语言Visual Basic 6.0环境中,通过标准串口通讯控件MsComm,接收仪器检测数据,调用Windows API中文语音函数,对患者姓名中文发音,并将编写的源代码生成单独可执行程序及其安装程序.结果:该程序应用于临床,检测了10万份样本,运行稳定,数据全部成功存储入库/表,中文语音清晰,使用简单快捷.结论:计算机与检验分析仪联机,可有效地对检测数据进行灵活的管理,同时清晰的中文发音,杜绝了报告单发放处的拥挤现象,为门诊检验提供一个井然有序的就医环境,亦有利于报告单规范化. 相似文献
65.
目的:探讨联合检测血清胃泌素释放肽前体(ProGRP)和组织多肽特异性抗原(TPS)在小细胞肺癌(SCLC)诊断中的临床意义。方法:采用ELISA法测定93例SCLC患者、63例肺良性疾病患者和62例正常对照组的ProGRP和TPS水平,并对其结果进行比较。结果:SCLC组患者血清ProGRP,TPS水平[(436.4±765.8)ng/ml、(367.8±518.7)U/L]显著高于肺良陆突扁组[(21.7±9.5)ng/ml、(101.1±45.1)U/L]和正常对照组[(17.3±9.5).g/ml、(85.6±37.4)U/L](P〈0.01),SCLC组患者血清ProGRP、TPS水平Ⅲ、Ⅳ期显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P〈0.01),ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性分别为67.5%和59.4%,特异性分别为97.6%和82.4%。Ⅲ、Ⅳ期(79.6%,83.7%)ProGRP和TPS诊断SCLC的敏感性均明显高于Ⅰ、Ⅱ期(50%,52.9%)。联合检测ProGRP和TPS敏感性和特异性分别为81.9%和80%。治疗前ProGRP和TPS水平[(604.4±637.3)ng/ml、(538.3±650.5)U/L]分别是治疗后[(141.5±179.1)ng/ml、(275.2±269.9)U/L]的4.27倍和1.96倍,治疗前ProGRP、TPS和治疗后比较有显著差异(P〈0.05),治疗效果明显。结论:ProGRP作为一种新的SCLC肿瘤标志物,对SCLC诊断敏感、特异,ProGRP比TPS具有更高的特异性,同时检测,起到优势互补的作用,有助于提高SCLC早期的阳性检出率,减少漏诊率,对判别病情变化及疗效有重要作用。 相似文献
66.
医院内污水中噬菌体的分离及其生物学特性观察 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:通过噬菌体特性观察,为了解噬菌体吸附特异性及溶苗机理的分子生物学机制奠定物质基础.方法:利用标准苗株从污水中分离特异性噬菌斑,纯化增殖后得到其相应噬苗体.经过高滴度噬菌体与其非特异性宿主菌的混合培养,筛选出宿主谱特异性发生突变的具有宽噬性的噬菌体.结果:从污水中分离出12种特异性噬菌体,发现了可裂解同一菌属的不同菌种的宽噬噬菌体,改变了噬菌体专-宿主谱这一特性.结论:针对同一菌属中不同菌种的宽噬噬菌体具有较高的稳定性及裂菌滴度,为探索噬菌体寄生的基因控制及特异吸附的分子生物学机制奠定了基础,将人工改造噬菌体,使之成为新型的杀菌生物制剂成为可能。 相似文献
67.
前列腺癌放射免疫治疗的实验研究 总被引:21,自引:0,他引:21
为评价放射免疫治疗对前列腺癌治疗效果的作用,用131I标记人精浆蛋白(γSm)单克隆抗体对前列腺癌荷瘤裸鼠模型放射免疫治疗。35只荷瘤裸鼠分对照组、腹腔给药组、瘤内给药组、分次给药组及非特异抗体组5组。比较各组移植物的体积,生长抑制率及动物生存时间。结果:131IγSm对人前列腺癌裸鼠移植物有较强的抑制作用,在同样剂量下瘤内给药抑制效果优于其它方法给药,肿瘤生长抑制率为85.7%。结论:131IγSm放射免疫治疗可作为前列腺癌治疗的新方法 相似文献
68.
目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。 相似文献
69.
目的 建立37 ℃γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的参考方法,并对酶校准品定值,探讨血清GGT测定结果 的准确性与可比性.方法 依据国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)推荐的参考测量程序建立GGT酶催化活性参考方法,用参考方法 测定GGT(ERM AD452/IFCC)参考品,验证参考方法 的准确度,并对其精密度进行方法 学评价,同时用参考方法 对制备的酶校准品进行准确定值,按照NCCLS EP9-A方案分别比较40例人血清用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 GGT结果,计算常规方法 与参考方法 的相关系数及相对偏倚.结果 用参考方法 测定ERM -AD 452 GGT参考品结果 113.6 U/L,在其给定的(114.1±2.4)U/L范围内.初步建立的37 ℃ GGT参考方法 总CV<1%.用酶校准品校正的非配套常规方法 、配套常规方法 、理论K值常规方法 和参考方法 比较,相关性均良好,r2分别为0.999 8、0.999 6和0.999 5,与配套常规方法 、理论K值常规方法 相比较,酶校准品校正的非配套常规方法 与参考方法 的相对偏倚明显降低,在10%以下.结论 GGT参考方法 基本建立,采用参考方法 为酶校准品定值,可以提高血清GGT测定结果 的准确度和可比性. 相似文献
70.
PSMA-IRES-FCY1-TK真核表达载体的构建及在前列腺癌细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)启动子调控表达的FCY1/TK双自杀基因表达载体,并观察单、双自杀基因对前列腺癌细胞LNCaP的杀伤作用.方法: 通过PCR方法扩增出基因组DNA中PSMA启动子,利用基因重组的方法,替换真核表达载体pIRES中的CMV启动子.测序正确后,再将自杀基因FCY1和HSV-TK分别克隆于载体pIRES的两个多克隆位点,构建真核表达载体pPSMA-IRES-FCY1-TK.将该载体转染LNCaP细胞,用RT-PCR的方法检测其转录,用MTT法检测前体药物5-氟胞嘧啶、丙氧鸟苷单一或联合使用对转染后的LNCaP细胞的杀伤作用.结果: PCR扩增出长1400 bp的PSMA启动子片段,经克隆至pIRES后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank(Accession Number AF007544)报道的一致.pPSMA-IRES-FCY1-TK经脂质体转染LNCaP细胞后,RT-PCR检测到FCY1和TK基因在该细胞中均有转录.MTT法检测表明5-FC与GCV联合使用,其细胞生长抑制率明显高于单独使用5-FC,GCV(P<0.05). 结论: pPSMA-IRES-FCY1-TK的双自杀基因体系对前列腺癌细胞LNCaP细胞的杀伤作用,明显优于单自杀基因体系. 相似文献