临床常用蛇毒类凝血酶制剂对凝血指标的影响

目的观察临床常用蛇毒类凝血酶(SVTLE)制剂对凝血指标的影响,为临床判断可能发生的出血风险作出提示。方法选取2017年1—10月空军军医大学附属西京医院泌尿外科患者102例(泌尿外科组)和耳鼻咽喉头颈外科患者80例(耳鼻喉科组)。泌尿外科组患者均为泌尿系统相关疾病术后使用注射用白眉蛇毒血凝酶止血的患者,耳鼻喉科组均为突发性耳聋使用巴曲酶注射液改善微循环的患者。比较泌尿外科组与耳鼻喉科组治疗前后凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物(FDP)的变化。结果泌尿外科组注射用白眉蛇毒血凝酶治疗后Fib水平较治疗前降低,FDP水平较治疗前升高(P0.05)。耳鼻喉科组巴曲酶注射液治疗后Fib水平较治疗前降低,FDP水平较治疗前升高(P0.05)。结论 SVTLE制剂可对Fib与FDP水平产生影响,应及时检测用药患者的凝血指标,观察其变化,避免因低纤维蛋白血症引起的出血。     

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率，CD4^＋与CD8^＋细胞百分率，CD4^＋／CD8^＋比值及CD19^＋和CD19^＋CD23^＋的表达水平，以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1，Th2的细胞百分率（13．15%±6．23%及4．57％±3．10％）均显著高于对照组（7．14％±5．09％及2．03％±0．95％），患儿组CD4^＋细胞百分率亦较对照组为高（P〈0．05）；CD8^＋，CD4^＋／CD8^＋比值均与正常对照组之间无统计学差异（P〉0．05），CD19^＋与CD19^＋CD23^＋的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群，表现为Th1扫Th2细胞百分率均增加，Th1和Th2细胞免疫反应增强，而B淋巴细胞状况无明显改变。     

5种结核分枝杆菌Rpf样蛋白的活性鉴定及促生长作用

目的探讨结核分枝杆菌5种Rpf样蛋白(RpfA、RpfB、RpfC、RpfD、RpfE)的生物学活性及其促生长作用。方法根据GenBank中结核分枝杆菌H37Rv基因组核酸序列分别设计5种Rpf样蛋白特异性引物序列,采用PCR技术扩增目的片段,克隆、表达及纯化结核分枝杆菌的5种Rpf样蛋白,应用获得的Rpf样蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的促生长活性观察。结果成功获得了纯化的五种Rpf重组蛋白,其浓度分别为374.76μg/mL、300μg/mL、116.27μg/mL、306.9μg/mL、349.8μg/mL;促生长效果观察,其中RpfC无明显的促生长活性,RpfE的促生长活性最明显;A、B和D均有一定程度的促进这三种菌生长增殖的作用。结论Rpf样蛋白具有促进结核分枝杆菌增殖的作用,有可能成为一种新型的培养基添加剂,为结核菌的快速培养及相关研究奠定基础。     

多媒体教学在实验诊断教学中的应用体会

实验诊断学是一门涉及多专业学科的边缘性学科,也是以应用基础医学、医用电子学等理论技术为临床医学服务的桥梁课程。它以生理学、解剖学、生物化学及分子生物学等基础医学为基础,又和临床各个学科紧密联系,内容丰富,涉及面广泛,传统的教学方式已经不能满足学生的需要,许多学生反映学习该课程有困难。作为一种先进的教学手段,多媒体技术将在实验诊断学的教学过程中占据越来越重要的地位。在多媒体教学应用于实验诊断学教学实践中,笔者有以下体会：     

结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达

目的 克隆表达结核分枝杆菌促Rv1009基因,序列测定正确后进行融合、表达.方法 采用热启动聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入pGEX 4T-2载体中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,目的基因经IPTG诱导,表达Rv1009基因蛋白.结果 经PCR扩增在1300bp处发现一条目的片段,获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009基因蛋白,经诱导后高效表达分子量为64KD的外源蛋白,与预期分子量大小一致,凝胶自动扫描分析,在A600值为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达3 h时融合蛋白表达量即达峰值,占菌体总蛋白的22.8%.结论 构建了结核分枝杆菌Rv1009基因重组表达载体,获得了RPF样融合蛋白的高效表达,为今后深入研究奠定了基础.     

基于PCR-RDB法对陕西地区HCV基因型别的研究

目的 探讨聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)在陕西地区丙型肝炎病毒基因分型中的应用.方法 选取陕西地区610例丙型肝炎患者,利用PCR-RDB法进行丙肝病毒基因型检测,并使用SPSS对检测结果进行统计学分析. 结果 610例丙肝患者检出1b型273例(44.75％),2a型286例(46.89％),3a型30例(4.92％),3b型11例(1.80％),6a型10例(1.64％);各基因型间的患者性别比例的差异具有统计学意义(P＜0.05);与其他基因型别相比,HCV 3a型患者年龄水平最低,差异显著(P＜0.05). 结论 陕西地区丙肝病毒以2a、1b型为主,患者性别及年龄与所感染HCV型别有关联性;PCR-RDB技术在丙型肝炎病毒基因分型中的应用有利于HCV分型在临床上的推广.     

血清胃蛋白酶原、促胃液素对胃癌的诊断价值

目的研究血清胃蛋白酶原Ⅰ(PG I)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)及促胃液素(GS)与胃癌发生的关系,探讨检验血清PGⅠ,PGⅡ,GS对胃癌的诊断价值。方法采用免疫放射分析法(IRMA)和放射免疫分析法(R IMA)检测36例胃癌患者、23例胃良性病、11例萎缩性胃炎和34例正常人血清蛋白酶原、促胃液素水平并进行比较。结果胃癌患者血清PGⅠ,PGⅡ的水平显著低于胃良性病和正常人组(P<0.05),而血清GS水平显著高于胃良性病和正常人组(P<0.05),其中不同分化程度间差异不明显(P>0.05),术后血清PGⅠ,PGⅡ,GS水平显著低于术前水平(P<0.05),复发组的水平显著高于术后未复发组(P<0.05)。结论检测血清PGⅠ,PGⅡ,GS对胃癌的诊断及区别胃良性病具有较高的临床价值。     

一例基因252delAsn纯合缺失所致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症的家系分析

目的对1个近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(coagulation factor FⅫ,FⅫ)缺陷症家系进行临床表型和基因变异分析,探讨其分子致病机制。方法提取基因组DNA,Sanger测序法测定F12基因所有外显子及侧翼序列;采用ClustalX-2.1-win及MutationTaster软件分析变异位点氨基酸的保守性及对蛋白质功能的影响。结果 Sanger测序结果显示先证者F12基因第9外显子存在g.6753-6755delACA纯合缺失变异,导致p.252delAsn;先证者父亲、母亲和弟弟均存在p.252delAsn杂合缺失变异;先证者妹妹为正常野生型。结论 p.252delAsn纯合缺失变异是该近亲婚配家系遗传性FⅫ缺陷症的分子发病机制。     

细胞因子诱导的imDCs鉴定及免疫学功能研究

目的:分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)的免疫学功能,诱导同种异体复合组织移植局部免疫耐受性。方法:采用细胞因子诱导培养黏附法,取大鼠骨髓前体细胞,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合白细胞介素-4细胞因子诱导下培养7 d,收集贴壁细胞光学显微镜观察imDCs的形态学特征,用质量分数2%锥虫蓝染色检测活性细胞率;应用流式细胞仪分析imDCs表面标志分子;MTT比色法测定imDCs与同种异体T淋巴细胞混合培养后T淋巴细胞的增殖能力。结果:制备诱导培养的imDCs具有形态不规则、表面粗糙层叠状皱褶、胞质突起短而多、树枝样分叉明显等典型形态特征;活性细胞率高达93%;表面较特异标志分子OX62为(61.08±4.86)%,OX62阳性细胞表达CD80、CD86、组织相容性复合体-Ⅱ表达率分别为(3.56±0.73)%、(5.38±1.09)%、(6.45±0.74)%,均为较低表达;imDCs对同种异体T淋巴细胞基本无刺激增殖能力。结论:用细胞因子诱导培养黏附法取骨髓前体细胞,可较快分选出活性和纯度较高、数量足够的imDCs,为同种异体复合组织移植诱导免疫耐受防止排斥反应的研究奠定良好的基础。     

前列腺酸性磷酸酶(PAP)单克隆抗体制备及临床应用

我国前列腺癌的发病率逐年增高,居泌尿生殖系肿瘤的首位,所以对于前列腺癌的早期诊断及治疗应引起重视。应用抗前列腺酸性磷酸酶单克隆抗体(PAP-McAb)免疫化学法测定血清中PAP对前列腺早期诊断有较大价值,本法特异性强,敏感度高,方法简便可靠,回收率为95％,组内和组间变异系数分别为