金黄色葡萄球菌肠毒素B 的中和性全人源抗体制备北大核心CSCD

目的:制备靶向金黄色葡萄球菌外分泌蛋白肠毒素B(SEB)的中和性全人源单克隆抗体,为SEB诱发的中毒性休克综合征(SEBILS)提供新的治疗方法。方法:以金黄色葡萄球菌COL基因组为模板,利用PCR技术扩增seb基因,进一步构建原核表达载体pET28a-seb,并克隆至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达目的蛋白,通过Ni2+柱亲和纯化获得SEB蛋白;利用SEB诱导的小鼠SEBILS模型检测SEB活性;进一步通过噬菌体展示技术筛选SEB结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,扩增该抗体的可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体;利用SPR检测其亲和力,通过SEBILS模型验证抗体活性。结果:获得了高纯度重组SEB蛋白,且具有很好的活性;筛选出两株全人源靶向SEB的单克隆抗体YG11-1和YG11-2,SPR结果表明YG11-1、YG11-2的亲和力相当(其KD值分别为16.59 nmol/L和21.35 nmol/L),且YG11-1和YG11-2均能有效抵抗SEB诱导的小鼠中毒性休克综合征,降低小鼠的死亡率,YG11-2(200μg/只)时保护率能够达到100%。结论:本研究获得了具有良好活性的重组SEB蛋白,并制备了抗SEB两株全人源单克隆抗体,为研制SEB中毒治疗制剂提供了新的选择。     

腓动脉穿支螺旋桨皮瓣在小腿足踝创面修复中的应用

目的探讨腓动脉穿支螺旋桨皮瓣在小腿足踝皮肤软组织缺损创面修复中的应用。 方法2018年10月至2020年4月,采用腓动脉穿支螺旋桨皮瓣修复小腿足踝创面29例,其中车祸伤19例,机器绞伤7例,皮肤肿瘤3例。术前采用便携式超声多普勒探测仪定位穿支位置,根据创面设计腓动脉穿支螺旋桨皮瓣,皮瓣切取面积8 cm×4 cm～20 cm×8 cm,转移修复创面。随访观察受区及供区的外形及足踝功能,评价临床应用的美学效果。 结果术后皮瓣均成活,患者均获随访,随访时间6～18个月,平均11个月。小腿供瓣区无凹陷、破溃,小腿外形无改变,留有线状瘢痕,不影响整体外观,皮瓣质地良好、色泽正常,皮瓣与周围皮肤无明显色差。 结论腓动脉穿支螺旋桨皮瓣血供可靠,不牺牲主干血管,不需取皮植皮,是修复小腿足踝中小面积皮肤软组织缺损的良好皮瓣之一。     

抗相思子毒素抗体的嵌合改造与功能评价北大核心CSCD

目的:制备并评价针对相思子毒素(Abrin)的具有中和活性的特异性人源化嵌合抗体。方法:从鼠源单抗中钓取抗体可变区轻重链序列4条,两两配对载入人源化IgG1表达载体pFRT-KIgG1,经表达、纯化等步骤得到4株人源化嵌合抗体;间接ELISA测定嵌合抗体与Abrin的结合力;ForteBio测定嵌合抗体与Abrin的亲和力;体外细胞学实验鉴定抗体的中和功能;无细胞体系评价抗体是否阻碍Abrin抑制荧光酶合成;选择6~8周雌性BALB/c小鼠,腹腔注射Abrin和不同浓度抗体,观察抗体的体内保护效应;流式细胞术分析抗体是否阻断Abrin与细胞的结合。结果:ELISA和ForteBio结果显示,4株嵌合抗体中仅H1L1嵌合抗体与Abrin的结合[EC_(50)=(0.1212±0.0040)μg/ml和亲和力(亲和常数3.97×10^(-10)M)]与母本抗体[EC_(50)=(0.15825±0.00235)μg/ml,亲和常数5.59×10^(-10)M]相似;体外细胞保护试验显示,H1L1[EC_(50)=(3.7455±0.0575)ng/ml]约为母本抗体[EC_(50)=(1.5825±0.5335)ng/ml]中和作用的42%;无细胞体系荧光素酶合成试验显示,H1L1[EC_(50)=(0.6729±0.0755)μg/ml]与母本抗体[EC_(50)=(1.0365±0.0045)μg/ml]接近,均能逆转Abrin抑制蛋白合成的作用;BALB/c小鼠体内中和保护实验结果显示,H1L1与10D8均能提供良好的体内保护作用;流式细胞术分析发现,H1L1并不能通过抑制Abrin黏附或进入细胞抑制其毒性。结论:4株嵌合抗体中,仅H1L1是轻、重链正确配对且拥有良好中和活性的候选抗体,有潜在的用于Abrin中毒救治的开发价值,应用前景良好。     

软脂酸对INS-1胰岛细胞TXNIP表达的影响

目的:2型糖尿病患者体内持续高水平的游离脂肪酸会损伤胰岛β细胞。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是内源性的硫氧还蛋白(Trx)抑制蛋白。已知高糖刺激可引起TXNIP表达上调,促进胰岛β细胞凋亡,而游离脂肪酸对TXNIP的影响尚不明确。本实验旨在研究软脂酸对TXNIP表达的影响及机制。方法:在使用不同浓度和不同作用时间的软脂酸充分预实验的基础上,确定使用添加0.5 mmol/L软脂酸的RPMI-1640培养基培养INS-1胰岛细胞24 h,测定细胞TXNIP的表达变化、细胞凋亡情况及可能的调控因子变化。结果:与对照组相比,软脂酸组TXNIP的mRNA水平和蛋白表达量均明显增高(P0.01),软脂酸组凋亡明显高于对照组(P0.01)。软脂酸组的核因子κB(NF-κB)蛋白磷酸化水平升高(P0.01),使用不同的NF-κB抑制剂PDTC和SN50均可阻断软脂酸诱导的TXNIP表达上调。结论:饱和脂肪酸软脂酸可通过增加NF-κB磷酸化而上调TXNIP的表达,从而诱导INS-1胰岛细胞凋亡。     

HIF-1α、ALDH1 和Hedgehog 信号通路协同促进三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性研究

目的:探讨HIF-1α、ALDH1 和Hedgehog 信号通路在三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性及其临床意义。方法:采用免疫磁珠法从三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231 细胞中分选出ALDH1+乳腺癌干细胞和ALDH1-乳腺癌细胞,采用qRT-PCR 方法比较HIF-1α和Hedgehog 信号传导通路主要分子SHH、PTCH1、SMO、GLI1 在这两种细胞中的表达差异;采用免疫组化方法了解HIF-1α和ALDH1 在三阴性乳腺癌组织中的表达以及与干细胞信号传导通路Hedgehog 的相互关系。结果:HIF-1αmRNA、SMO mRNA 和GLI1 mRNA 在ALDH1+乳腺癌干细胞中的表达均明显高于ALDH1-乳腺癌细胞,差异具有显著统计学意义(P 均<0.05)。在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为90.0% 和70.0%,ALDH1 的阳性表达率分别为93.3%和66.7%,差异均具有显著统计学意义(P 均<0.05)。在三阴性乳腺癌组织中HIF-1α和ALDH1 的表达呈正相关(r =0.53,P<0.01)。HIF-1α的表达与三阴性乳腺癌的淋巴结转移和TNM 分期有关(P 均<0 .05),ALDH1 的表达与组织学分级和TNM 分期有关(P 均<0.05)。HIF-1α与Hedgehog 信号通路分子SHH(r = 0.584,P<0.01)、SMO(r=0.467,P<0.01)和GLI1(r =0.439,P<0.05)的表达呈正相关,ALDH1 与SHH(r =0.426,P<0.05)和GLI1(r =0.394,P<0.05)的表达呈正相关。结论:HIF-1α和Hedgehog 信号通路在ALDH1+ 乳腺癌干细胞中活化,HIF-1α、ALDH1 与Hedgehog信号传导通路可能相互协同激活癌症干细胞从而促进三阴性乳腺癌的恶性进展。     

儿童青少年自杀及相关问题

郑毅 教授 2000年WHO的资料表明，全球每年约有100万人死于自杀，每40s就有1人死于自杀，每3s就有1人自杀未遂，在所有国家中自杀是15～34岁人群死亡的前3位原因之一。以100000人为单位计算自杀率：美国2000年男性17．1，女性4．0；法国1999年男性26．1，女性9．4；日本2000年男性35．2，女性13．4；中国1999年男性13．0．女性14．8；印度1998年男性12．2，女性9．1；俄罗斯2002年男性69．3，女性11．9。     

固本平喘活血汤治疗肺心病缓解期378例远期疗效临床研究

笔者于1987年～1994年对肺心病378例患者进行了7年缓解期治疗随访，取效满意，现报道如下。     

潜阳育阴颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化的影响

目的：通过观察潜阳育阴颗粒对肾小管上皮细胞表型的影响，探讨其对肾间质纤维化的干预作用。方法：将肾小管上皮细胞(HK-2)用不同质量浓度的转化生长因子(TGF)-β₁(0、5、10、15、20、25μg·L^-1)刺激24 h，用倒置相差显微镜观察细胞形态及生长状态，结合蛋白免疫印迹法(Western blot)结果选取最合适的TGF-β₁质量浓度20μg·L^-1用于后续实验。将HK-2细胞分为6组，分别为空白组、TGF-β₁组(质量浓度为20μg·L^-1)、潜阳育阴颗粒低、中、高剂量组(0.5、1、2 g·L^-1)、缬沙坦组(1×10-5 mol·L^-1)。细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒检测各组细胞活性；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell法检测细胞侵袭能力；Western blot检测纤维黏连蛋白(FN)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimen...     

前列腺特异膜抗原与泌尿系肿瘤

自从前列腺特异膜抗原(PSMA)被发现后,其在前列腺癌的诊治方面取得了重大的进展.近年来的研究发现,除了在前列腺组织(包括前列腺癌)中表达以外,PSMS还在多种非前列腺组织及肿瘤组织中表达,尤其在泌尿系统肿瘤中的研究引人注意.PSMA的绝对组织特异性受到了挑战,但同时它也为人们对其他泌尿系肿瘤的诊治提供了新的研究方向.