RP-HPLC法测定卷柏中腺苷的含量

为研究卷柏的质控指标成分，选用SHIM—PACK CLC—ODS柱，流动相为水—甲酵（100：2)；检测波长260nm；室温下，建立了卷柏中腺苷含量测定的反相高效液相色谱法，并对不同产地卷柏腺苷的含量进行测定。结果：线性范围为1—8μg，相关系数r＝0．9993，平均回收率为96．70％，RSD为0．93％。结论：本法灵敏、简便、准确。     

桑白皮各化学拆分组分对阿霉素肾病大鼠水钠潴留的影响

目的:探讨桑白皮各化学拆分组分对阿霉素肾病大鼠水钠潴留的影响及其作用机制。方法:采用一次性尾静脉注射阿霉素(6.5 mg·kg~(-1))建立阿霉素肾病模型,造模7 d后开始ig给药,连续给药21 d。实验期间于第7,14,21,28天留取尿液,检测大鼠尿量,24 h尿蛋白,尿钠及尿渗透压。给药3周后,测定各组大鼠血液渗透压、电解质及血液中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),白蛋白(ALB),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),抗利尿激素(AVP)的含量,同时计算肾脏指数,并检测肾脏中抗利尿激素V2受体(AVPV2R),水通道蛋白-2(AQP2)的水平及Na+-K+-ATP酶的活性等指标,蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测肾脏AQP2的表达。结果:桑白皮水煎液能够降低阿霉素肾病大鼠的尿蛋白含量,改善低蛋白血症与高脂血症,并且以低剂量(476 mg·kg~(-1))效果最好;各化学拆分组分中桑白皮30%乙醇洗脱组分能够显著降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白,TC,TG,AVP,AVPV2R,AQP2含量,降低Na+-K+-ATP酶活性及肾脏指数(P0.05,P0.01),能够明显增加阿霉素肾病大鼠ALB,尿量,尿钠及尿渗透压(P0.05,P0.01)。结论:桑白皮水煎液能够显著改善阿霉素肾病大鼠的各项病理症状,其30%乙醇洗脱组分为最佳有效部位,且其改善阿霉素肾病大鼠水钠潴留的机制可能与调节血浆AVP,肾脏AVPV2R,AQP2表达及Na+-K+-ATP酶活性有关。     

麻黄水煎液及拆分组分对肾阳虚水肿大鼠的影响

目的:研究麻黄及各拆分组分对肾阳虚水肿模型大鼠的影响,探讨功效与药性之间的关系,并初步讨论其作用机制。方法:用氢化可的松联合盐酸多柔比星复制肾阳虚水肿大鼠模型,即造模第1,8天分别尾静脉注射盐酸多柔比星(4,3.5 mg·kg~(-1)),与此同时,连续15 d腹腔注射氢化可的松注射液(3.75 mg·kg~(-1)·d-1)进行造模。造模结束后,将造模成功大鼠分为模型组,桂附地黄丸组(1.4 g·kg~(-1)),麻黄水煎液低(1.17 g·kg~(-1)),中(2.34 g·kg~(-1)),高(4.68 g·kg~(-1))剂量组,麻黄生物碱(0.020 g·kg~(-1)),非生物碱(0.105 g·kg~(-1)),醇沉(0.132 g·kg~(-1)),挥发油(0.933 3×10-3m L·kg~(-1))组,同时设立正常组,各组大鼠分别给予相应的药物(10 m L·kg~(-1)),正常组和模型组给予同等体积生理盐水,连续灌胃给药28 d。给药结束后,大鼠代谢笼法检测24 h尿量;考马斯亮蓝G-250染料结合法(CBB法)检测各组大鼠24 h尿蛋白;酶联免疫吸附法(ELISA)测定检测血清环磷酸腺苷(c AMP),环磷酸鸟苷(c GMP),三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4),雌二醇(E2),睾酮(T)含量;蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测肾脏水通道蛋白1(AQP1),水通道蛋白2(AQP2)含量。结果:麻黄水煎液和生物碱拆分组分能够显著性增加大鼠24 h尿量,血清c AMP,T3,T4和E2的水平(P0.05,P0.01);麻黄水煎液和生物碱组分能够显著性降低大鼠24 h尿蛋白,c GMP,T的含量以及肾脏AQP1和AQP2的表达(P0.05,P0.01)。结论:麻黄具有显著的利水消肿功效,生物碱为最佳有效组分,且其利水消肿机制可能与降低肾脏AQP1和AQP2的表达有关。     

薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究

目的：对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选,探讨其作用机制。方法：首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选;以质粒pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞株为模型,采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术,评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果：薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加（P<0.01）,且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖（P<0.01）; ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,分别由ERα和ERβ介导时,与正常组相比,薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加,在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖,首次发现薏苡仁具有雌激素样作用,且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。     

SLP-2 siRNA对裸鼠胃癌移植瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨SLP-2siRNA对裸鼠胃癌移植瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法:设计合成化学修饰的SLP-2siRNA,将胃癌细胞SGC-7901接种于裸鼠皮下建立裸鼠胃癌移植瘤模型,随机分为转染SLP-2siRNA组、阴性对照组和空白对照组,于肿瘤局部分别多点多次注射化学修饰SLP-2siRNA、阴性对照siRNA及生理盐水.检测3组移植瘤细胞增殖及凋亡状况,RT-PCR及免疫组织化学技术检测移植瘤细胞内SLP-2mRNA及蛋白的表达.结果:与两对照组相比,注射化学修饰的SLP-2siRNA后,裸鼠胃癌移植瘤细胞生长速度减慢、移植瘤体积减小(P=0.009,P=0.003).抑制瘤率分别为26.74%和30.15%,细胞凋亡无明显变化(P>0.05),肿瘤细胞内SLP-2mRNA及蛋白的表达量降低.结论:SLP-2siRNA可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长,但对细胞凋亡无影响,提示SLP-2基因参与促进胃癌细胞增殖.     

卷柏中穗花杉双黄酮降血糖作用

目的:采用糖尿病小鼠模型,研究卷柏中穗花杉双黄酮(AMT)的降血糖活性,并进行量效关系考察.方法:雄性昆明种小鼠,一次性ip 180 mg·kg-1链脲佐菌素(STZ),建立糖尿病模型.以穗花杉双黄酮30,60,120,240,480 mg· kg-1ig给药治疗2周.给药期间测量小鼠摄食量、饮水量;给药2周后,检测空腹血糖(FBG),口服葡萄糖耐量(OGTT),血清胰岛素,观察胰腺HE染色切片,初步判断穗花杉双黄酮有效剂量.结果:穗花杉双黄酮30,60,120,240,480 mg· kg-1均能不同程度降低糖尿病小鼠饮水量、摄食量,FBG,改善OGTT,升高胰岛素水平;对胰岛组织还有一定修复作用.结论:穗花杉双黄酮可改善糖尿病小鼠血糖紊乱,调节胰岛素分泌,修复胰岛组织,最佳剂量为60 mg· kg-1.     

从卷柏中提取雌激素类成分的实验研究

目的：对不同提取方法所得的卷柏各提取物进行雌激素活性筛选,探索卷柏中雌激素类活性物质的提取方法;明确卷柏发挥雌激素作用的活性成分的极性。方法：采用小鼠子宫增重实验,将卷柏分别以70%乙醇回流所得总部位经聚酰胺柱分离;95%乙醇回流药渣经水提取;药渣水提物去除多糖等所得的卷柏各组分进行雌激素活性筛选。运用HPLC指纹图谱技术对卷柏95%醇提物、药渣水提物进行分析。结果：70%乙醇回流所得的卷柏总部位、药渣水提物高剂量、药渣水提物去多糖组与空白组比,均能显著性增加小鼠子宫系数(p＜0.01),卷柏其余各组与空白组相比无明显作用(p＞0.05);HPLC指纹图谱显示卷柏95%醇提物中穗花杉双黄酮为其主要成分,而药渣水提物中基本不含穗花杉双黄酮。结论：95%乙醇回流药渣水提法与聚酰胺柱分离法相比,前者更适合于卷柏雌激素活性物质的提取分离;卷柏中发挥雌激素作用的活性成分主要为水溶性除多糖物质;HPLC指纹图谱结果提示,穗花杉双黄酮不是卷柏发挥雌激素作用的成分。     

卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢的影响

目的 研究卷柏提取部位 (A、B、C、D) 对去卵巢大鼠血清雌二醇水平及骨代谢生化指标的影响,并初步探讨其作用机制。方法 采用6月龄雌性 Wistar 大鼠 70 只,按体质量随机分为假手术组、模型组、阳性对照组和4个卷柏不同提取部位用药组,每组 10 只。除假手术组外,其余各组切除双侧卵巢建立模型。手术1周后开始给药,连续给药 26 周后处死大鼠。用放射免疫法检测雌二醇 (E2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清骨钙素 (BGP)、降钙素 (CT) 水平,用常规生化法检测血清碱性磷酸酶 (ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 活性。结果 大鼠去除卵巢以后,E2、CT 水平明显降低,ALP、TRAP、BGP、TNF-α水平明显升高。给药26周后,用药组 ALP、TRAP、BGP、TNF-α水平比模型组明显降低 (P＜0.01);E2、CT 水平明显升高 (P＜0.01)。结论 卷柏提取物对去卵巢大鼠骨代谢有一定的调节作用,能够提高血清雌激素水平,提示卷柏提取物对骨质疏松症有一定预防和治疗作用。     

中药学专业《分子生物学基础》课教学初探

分子生物学是生命科学的前沿学科,对中医药研制、新药开发有重要影响,因此我们对中药学专业《分子生物学基础》课的教学方法、教学内容及实验安排做了必要的调整,以便学生更好的适应未来药学发展的需要。