独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息学分析及原核表达

目的从独行菜Lepidium apetalum中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达。方法根据独行菜转录组数据中La PMK基因序列设计特异性引物,克隆得到La PMK基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达La PMK融合蛋白。结果 La PMK基因ORF全长为1 518 bp(Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸。生物信息学分析结果显示La PMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域。系统进化树结果显示La PMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92%的序列相似性,亲缘关系较近。构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达La PMK融合蛋白。结论克隆了La PMK基因,建立其稳定的原核表达体系,为La PMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究La PMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础。     

怀菊花提取物对皮质酮诱导的抑郁模型的保护作用及机制研究

目的 通过皮质酮诱导的小鼠抑郁症模型和肾上腺嗜铬细胞瘤PC-12细胞损伤模型,研究怀菊花提取物的抗抑郁作用。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀（5 mg/kg）组和怀菊花提取物低、中、高剂量（1.67、3.33、6.67 g/kg）组,模型组和各给药组连续21 d sc皮质酮（20 mg/kg）,造模同时ig相应药物,给药结束后进行糖水偏好实验、悬尾实验和旷场实验;采用ELISA法检测小鼠血清中皮质酮及神经递质水平;采用Western blotting检测海马组织中环磷腺苷效应元件结合蛋白（cyclic adenosine monophosphate-response element binding protein,CREB）通路关键蛋白表达。皮质酮诱导PC-12细胞建立细胞损伤模型,采用流式细胞术检测怀菊花提取物对细胞凋亡及活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平的影响;采用In-Cell Western法检测凋亡相关蛋白及CREB通路关键蛋白表达。结果 怀菊花提取物能够显著改善小鼠的糖水偏好率（P＜0.05、0.01）,增加小鼠的站立次数（P＜0.05、0.01）,减少小鼠悬尾实验的不动时间（P＜0.01）,显著降低血清中皮质酮水平（P＜0.01）,升高血清中5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）、多巴胺（dopamine,DA）、乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）水平（P＜0.05、0.01）,上调海马组织中CREB、磷酸化CREB（phosphorylated CREB,p-CREB）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）蛋白表达水平（P＜0.05、0.01）。怀菊花提取物显著抑制皮质酮诱导的PC-12细胞凋亡率及细胞内ROS水平（P＜0.01）,抑制凋亡相关蛋白表达（P＜0.01）,上调CREB通路关键蛋白表达（P＜0.01）。结论 怀菊花提取物可能通过调节CREB通路、抑制神经细胞凋亡,从而改善抑郁。     

白术各化学拆分组分及其配伍对大鼠肾病综合征的影响

目的确定白术治疗肾病综合征的最佳有效组分及其与桑白皮配伍的最佳比例,并初步探讨其有效组分发挥疗效的机制。方法采用阿霉素大鼠肾病模型,以大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TCH)、大鼠血清肌酐(Cre-S)和尿素氮(BUN)的水平为评价指标筛选白术治疗肾病综合征的最佳有效部位以及配伍的最佳比例;采用ELISA法检测各化学拆分组分的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平,观察各化学拆分组分HE染色的肾组织切片,初步探讨其有效组分发挥疗效的机制;通过检测尿量、精氨酸加压素(AVP)、水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白1(AQP1)的水平,初步探讨其配伍疗效后优于单味药的作用机制。结果给药3 w后,低剂量(2.8 g·kg~(-1))组大鼠24h尿蛋白、Cre-S、BUN、TG、TCH、Alb水平均有明显改善(P0.05),为最佳给药剂量;白术多糖组分组大鼠24h尿蛋白、Cre-S、BUN、TG、TCH水平均有明显改善(P0.05),为最佳有效组分;同时白术多糖组分能够降低IL-6和TNF-α水平,升高SOD水平,改善肾组织损伤;桑白皮加白术的最佳配伍比例1∶1,与单味药桑白皮组相比,1∶1配伍组能够显著提高大鼠尿量、降低AVP和AQP2水平(P0.05)。结论白术治疗肾病综合征的最佳有效组分为多糖组分。可能是通过抗氧化抗炎改善肾组织损伤,从而发挥疗效;同时桑白皮与白术最佳配伍比例为1∶1,二者合用能够降低AVP相关水平,增强利尿的作用。     

中医药院校生物化学教学方法的探讨

文章介绍了在生物化学教学过程中,综合运用激疑式、病例式、合作式和导学式教学法等多种教学方法,体现了启发式教学的指导思想,突出了学生的主体地位,从而增强了学生的思维积极性和学习自主性,提高了学生的思考能力和创新能力。     

不同产地卷柏药材中总黄酮的含量测定

目的研究不同产地卷柏中总黄酮的含量测定方法。方法以阿曼托双黄酮为对照品,绘制标准曲线,将卷柏95%乙醇回流提取液,在337 nm波长下测定吸收度。结果总黄酮含量为1.52%,平均回收率为99.90%,RSD=1.35%（n=6）,线性范围1.92～11.52μg.m l-1,r=0.999 8。结论该法测定卷柏总黄酮含量,简单、迅速、准确,可用于卷柏的质量控制。     

正交设计优选卷柏中总黄酮的提取工艺研究

目的 优选卷柏中总黄酮的提取工艺.方法 采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定总黄酮和阿曼托双黄酮.以提取量为考察指标,用正交设计方法 优选最佳提取工艺.结果 以总黄酮提取量为考察指标,其优选工艺为A1B2C2D2;以阿曼托双黄酮提取量为考察指标,其优选工艺为A1～3 B1～3 C2D2.综合考察采用A1B2C2D2为最佳提取工艺,即药材加10倍量的95%乙醇,回流提取2次,每次2h.结论 优选得到的工艺稳定可行,可作为卷柏的提取工艺.     

GC-MS/MS方法测定卷柏中66种农药残留

目的:建立同时分析测定卷柏中66种农药残留的GC-MS/MS方法.方法:样品经乙腈提取,采用分散固相萃取净化管净化,氮吹浓缩,定容后过滤.采用GC-MS/MS联用法测定卷柏中的农药残留量.结果:在实验条件下,66种农药组分能很好地分离检测,在相应的测定范围4.8～250 ng·mL-1内线性关系良好,相关系数均大于0....     

卷柏属植物化学成分与药理活性

综述了近10年来卷柏属植物化学成分、药理活性等方面的研究进展。     

杜仲补天素胶囊改善环磷酰胺诱导的小鼠生精障碍研究

目的采用环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)诱导的小鼠生精障碍模型,探究杜仲补天素胶囊(Duzhong Butiansu Capsule,DBC)的生殖保护作用及其机制。方法采用昆明种小鼠ipCP(60mg/kg)制备生精障碍模型,连续5d,第8天起ig给予DBC高、低剂量(1.388、0.694 g/kg)干预4周,给药结束后检测各组小鼠体质量、脏器指数变化,HE染色检测睾丸病理结构变化,ELISA法测定血清睾酮(T)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;Western blotting及免疫组化法分析睾丸组织中转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)与磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)表达。结果与模型组比较,DBC对小鼠体质量下降有极显著干预作用,能够增加睾丸、附睾及肾脏指数,改善睾丸病理形态损伤,增加精子数、提高精子活力、降低精子畸形率,提高T水平,降低LH、FSH水平,降低MDA含量,提高SOD、GSH-Px活性,提高Nrf2、HO-1、NQO1、HDAC2与p-PKC蛋白的表达水平(P0.05、0.01)。结论 DBC能够改善CP诱导的小鼠生精障碍,其机制可能与调节氧化应激相关的Nrf2/抗氧化作用元件(ARE)信号通路有关。     

地黄苷D对皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的 研究从地黄Rehmannia glutinosa中分离得到的地黄苷D对皮质酮诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12细胞）的保护作用及机制。方法 以500μmol/L皮质酮处理PC-12细胞24 h建立损伤模型，同时给予氟西汀和地黄苷D进行干预，采用MTT法检测细胞存活率；采用流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及线粒体膜电位水平；采用In-Cell Western法检测细胞内凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达；采用高内涵细胞成像系统检测细胞内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）蛋白表达。结果 地黄苷D明显提高皮质酮诱导的PC-12细胞存活率（P<0.05、0.01...