大鼠模型中糖尿病导致氯吡格雷治疗后血小板高反应性的机制研究

目的在大鼠模型中探讨糖尿病对氯吡格雷治疗后血小板高反应性(HTPR)的影响及其可能的影响机制。方法造模成功的雄性SD大鼠45只,随机分为空白组11只、氯吡格雷组11只、糖尿病组11只和糖尿病+氯吡格雷组(实验组)12只,普通饲料饲养8周,采用灌胃法给予氯吡格雷,糖尿病模型采用链脲佐菌素(STZ)一次性注射法建立。流式细胞术检测CD62P水平和细胞质内Ca2+水平,ELISA法检测同型半胱氨酸(Hcy)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血栓素A2(TXA2)、前列环素(PGI2)及NO等水平,RT-PCR和Westernblot检测细胞色素450(CYP450)、蛋白激酶C(PKC)及P2Y12受体基因和蛋白表达。结果糖尿病组和实验组血糖、Hcy、MDA、TXA2、hs-CRP水平、P2Y12基因和蛋白及PKC蛋白表达显著高于空白组和氯吡格雷组(P<0.01);PGI2、SOD及NO、ADP诱导的血小板聚集抑制率(ADP-IR)、CYP450蛋白表达显著低于空白组和氯吡格雷组(P<0.01)。实验组ADP-IR显著低于糖尿病组[(45.64±13.31)%vs(80.14±4.30)%,P<0.01]。糖尿病组CD62P、细胞质内Ca2+水平明显高于其他组(P<0.01);且实验组明显高于空白组和氯吡格雷组(P<0.05,P<0.01);氯吡格雷组细胞质内Ca2+水平显著低于空白组(P<0.05)。各组PKC和CYP450基因表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ADP-IR与SOD和TXA2水平呈负相关(P<0.05,P<0.01);CD62P水平与细胞质内Ca2+水平呈正相关(P<0.01)。ADP-IR与CD62P水平呈负相关(r=-0.3567,P=0.015)。结论糖尿病导致氯吡格雷HTPR的机制为血小板功能异常、血小板表面受体表达上调及氯吡格雷活化相关酶系表达减少。     

利伐沙班治疗老年血栓性疾病患者的疗效和安全性

目的探讨利伐沙班治疗老年人血栓性疾病的有效性和安全性。方法回顾性研究,连续入选解放军总医院第二医学中心2012年10月至2017年11月服用利伐沙班的老年住院患者301例,年龄60~102岁(86.5±8.4)岁。根据患者适应证、肌酐清除率、缺血和出血风险等综合评估制定抗凝方案,分为利伐沙班2.5~5.0 mg/d组72例、10.0 mg/d组205例、15.0~20.0 mg/d组24例。检测应用利伐沙班前后的肝、肾功能及凝血指标,记录观察期间的致死性出血、心源性死亡、全因死亡及非致死性出血和缺血事件。结果纳入患者利伐沙班剂量(9.3±3.0)mg/d,最小剂量2.5 mg/d。随访(14.9±13.9)个月,最长随访48个月。利伐沙班治疗后发生颅内出血1例、心源性死亡3例(1.0%)、全因死亡20例(6.6%)。累积发生率为25.2%,其中55.0%(11例)因肺炎、多脏器功能衰竭死亡;非致死性出血事件40例(13.3%),累积发生率为42.4%;缺血事件7例(2.3%),累积发生率为16.0%,其中非致死性心肌梗死2例,脑梗死3例,下肢静脉血栓栓塞2例。与用药前比较,凝血指标中凝血酶原时间延长、纤维蛋白原(FIB)升高,D-二聚体降低(P<0.05)。结论与既往文献报道比较,高龄老年血栓性疾病患者应用偏低剂量利伐沙班抗凝治疗安全有效,但需综合评估患者出血缺血风险,选择合适剂量的利伐沙班,个体化用药。     

卡巴胆碱对烧创伤后肠道功能障碍影响的研究

目的观察肠道内给予卡巴胆碱对兔肠部分缺血再灌注(I/R)损伤及重度烧伤患者肠道功能障碍的影响。方法将50只大白兔制成肠部分I/R损伤模型后,随机分为肠部分I/R损伤组(25只)、卡巴胆碱组[25只,于肠系膜上动脉(SMA)阻断后1h肠内注入3g/L卡巴胆碱(3μg/kg)]；另取25只设为假手术组,仅分离SMA,不阻断；取5只作为正常对照组,不致伤,处死后留取标本待测。检测兔SMA阻断前后及肠道内给予卡巴胆碱后肠黏膜的血流量。各致伤组均在处理后2、4、6、8、24、48、72h留取静脉血测定其血浆二胺氧化酶(DAO)活性及D-乳酸和D-木糖含量。并行葡聚糖蓝排出实验,以检测胃肠道吸收功能。同时选择大面积烧伤[烧伤总面积(84±12)%TBSA]患者8例,在患者肠呜音＜2次/min或腹胀明显时,口服1g/L卡巴胆碱(15μg/kg),观察给药后每分钟肠鸣音次数及腹胀情况。结果SMA阻断后肠部分I/R损伤组肠黏膜血流量为(48±6)PU,较正常对照组[(102±5)PU]明显减少,而肠道内注入卡巴胆碱后1h血流量增至(77±3)PU。肠缺血后肠部分I/R损伤组血浆DAO活性及D-乳酸含量开始升高,处理后24h达峰值[(4．63±0．27)U/ml、(7．9±2．4)mg/L],以后逐渐下降,但仍高于正常对照组[(0．89±0．14)U/ml、(2．0±1．1)mg/L,P＜0．05]。卡巴胆碱组的变化基本同肠部分I/R损伤组,但变化幅度较小；而假手术组则无明显变化(P＞0．05)。在给予D-木糖后2h,肠部分I/R损伤组血浆D-木糖含量显著降低,但处理后6h肠部分I/R损伤组及卡巴胆碱组明显升高,以后逐渐下降；假手术组略有波动。SMA处理后2h肠部分I/R损伤组葡聚糖蓝未见排出,处理后6h其运动距离逐渐增加,但处理后24h其运动距离仍明显短于正常值(P＜0．05),48～72h基本恢复正常；卡巴胆碱组注入葡聚糖蓝后即可见其排出,其运动距离明显增加,处理后6h达峰值(43±6)cm,以后逐渐缩短接近正常(28±3)cm。给药前患者肠呜音较弱(1．6±1．1)次/min,给药后10 min明显增强为(6．9±1．7)次/min,30 min时为(8．3±2．4)次/min,给药后1h患者肠鸣音仍较活跃,为(6．1±1．3)次/min。给药后2h患者腹胀明显减轻,其中有6例患者开始排便。结论肠内给予卡巴胆碱可增加兔肠黏膜血流量,改善其肠道运动、吸收、屏障功能；大面积烧伤患者口服卡巴胆碱,可改善其肠道功能障碍。     

高龄老年餐后低血压的临床特点及防治策略的研究

目的探讨高龄老年餐后低血压(PPH)的临床特点及相关因素,为临床防治提供理论依据。方法选择行24h动态血压监测的老年患者349例,按年龄分为普通老年组163例(65～79岁),高龄老年组186例(≥80岁);普通老年组高血压115例,非高血压48例,高龄老年组高血压154例,非高血压32例。每隔15min记录1次餐后血压变化,同时记录饮食、身高、体重、基础疾病及服用药物等资料。结果 349例患者PPH总检出率为59.3%,早餐和中餐PPH检出率明显高于晚餐(33.8%和32.1%vs 21.5%,P<0.05);高龄老年组PPH检出率明显高于普通老年组(63.4%vs 54.6%,P<0.05)。高血压患者PPH检出率明显高于非高血压患者(65.1%vs 40.0%,P<0.01)。年龄、高血压、降压药物与PPH检出率呈正相关(P<0.05)。PPH多于餐后15～30min血压开始下降,30～60min下降至PPH诊断标准,PPH持续时间30～120min,下降幅度20～40mm Hg(1mm Hg=0.133kPa)。结论老年人进餐后血压呈下降趋势,以早餐后检出率最高。患高血压及服用降压药物会增加PPH检出率。高龄老年PPH发生率明显高于普通老年者,餐后血压下降幅度亦高于普通老年,应加强预防和干预。     

卡巴胆碱对脂多糖刺激巨噬细胞释放炎症细胞因子的影响及其受体研究

目的在体外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激大鼠腹腔巨噬细胞炎症模型中观察拟胆碱药卡巴胆碱对炎症细胞因子释放的影响,并研究其受体途径。方法采集大鼠腹腔巨噬细胞,先给予M样胆碱能受体拮抗剂阿托品或N样胆碱能受体α7亚基特异性拮抗剂α-银环蛇毒素,15min后给予卡巴胆碱或N样胆碱能激动剂烟碱,15min后再给予LPS刺激,4～6h后取细胞培养上清液,ELISA法检测促炎细胞因子TNF-α、IL-6水平和抗炎细胞因子IL-10水平。大鼠腹腔巨噬细胞制作细胞爬片,用高浓度烟碱和卡巴胆碱处理15min后加入异硫氰酸荧光素标记的α-银环蛇毒素(FITC-α-Bgt),在激光扫描共聚焦显微镜下观察结果并摄片。结果卡巴胆碱与烟碱均能抑制LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放,对IL-10的释放无影响。阿托品预处理后,卡巴胆碱与烟碱对TNF-α、IL-6释放的抑制作用无明显变化(P>0.05);α-银环蛇毒素预处理后,卡巴胆碱与烟碱对两种促炎细胞因子释放的抑制作用明显减弱(P<0.01)。激光共聚焦显微镜结果显示烟碱和卡巴胆碱处理后,FITC-α-Bgt与细胞的结合被减弱。结论卡巴胆碱在LPS刺激大鼠腹腔巨噬细胞模型中具有抗炎作用,此作用不能被阿托品阻断,可以被α-银环蛇毒素拮抗。表明卡巴胆碱的抗炎作用与烟碱相似,都是通过N样胆碱能受体α7亚基实现的。     

抗血小板药物研究进展

目前,急性冠脉综合征标准治疗方案是应用双联抗血小板药物基础上联合抗凝药物,即阿司匹林联合血小板二磷酸腺苷(ADP)受体P2Y12阻滞剂联合肝素类或戊糖类药物,对于一些高危患者还需适当加用血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂。缺血性疾病的二级预防也要求使用一定时期的双联抗血小板药物治疗,之后终生服用合适剂量的阿司匹林或氯吡格雷。然而,抗血小板药物的应用是一把"双刃剑",在发挥治疗作用的同时也存在很大的潜在出血风险,如脑卒中及严重内脏出血等,因此,选择应用抗血小板药物时,应权衡利弊、综合分析,在争取获得最优治疗效果的同时,最大限度减少出血等不良反应的发生。     

阿尔茨海默病患者血清中Apelin13和FKBP5的表达水平及临床意义

目的 探究阿尔茨海默病（AD）患者血清中Apelin13和FK506结合蛋白51(FKBP5)的表达水平及意义。方法 选取93例AD患者（AD组）,同时选取同年龄层体检的90例健康者（对照组）。比较2组血清Apelin13、FKBP5mRNA水平差异。Pearson相关分析Apelin13、FKBP5 mRNA与简易精神状态量表（MMSE）评分的相关性。采用受试者工作特征（ROC）曲线评估Apelin13、FKBP5 mRNA对AD患者重度认知功能障碍的诊断价值。结果 AD组患者MMSE评分、血清Apelin13水平较对照组降低,而FKBP5 mRNA水平较对照组升高（均P<0.01）。轻、中及重度组AD患者血清中Apelin13水平依次降低,而FKBP5 mRNA水平依次升高（均P<0.05）。二元Logistic回归分析显示,较高的MMSE评分、Apelin13是AD发生的保护因素,而较高的FKBP5 mRNA是AD发生的危险因素（均P<0.05）。AD患者MMSE评分与血清FKBP5 mRNA水平呈负相关,而与Apelin13水平呈正相关（均P<0.05）...     

基于DNA杂交CD式微流控芯片筛查苯丙酮尿症方法的建立

目的 建立一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片技术,用于PKU基因突变快速筛查.方法 设计并加工一种具有12个微通道的CD式微流控芯片,芯片采用PDMS-玻璃双层结构,分别含有微通道和水凝胶结合探针区.探针区包括R243Q、V245V和空白对照.将PAH外显子7扩增产物加入芯片的进样孔,在离心力的作用下进入杂交微通道区.芯片在离心机中交替旋转或暂停从而进行杂交反应.杂交后将芯片置于荧光显微镜下观察结果并分析荧光信号.评价该方法检测特异性、检测限及重复性.对30例疑似PKU孕妇DNA标本进行检测,并将检测结果与测序比较.结果 利用基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片只需1.5μl样品,杂交时间为15 min,杂交检测限为0.7 ng/μl.对于PKU患者组与健康对照组,芯片检测结果与测序结果一致.挑选不同批次的5张芯片及每张芯片内5个微通道重复检测同一V245V突变PKU患者DNA标本,结果均为阳性,说明重复性较好.对30例疑似PKU孕妇标本进行检测,筛查出4例携带V245V突变,1例携带R243Q突变.结论 建立了一种基于往复流的DNA杂交CD式微流控芯片检测PKU基因突变的方法,该方法简便、快速、高灵敏,可以用于PKU产前筛查.     

肾炎性肌纤维母细胞瘤临床病理观察

目的 探讨肾炎性肌纤维母细胞瘤的临床病理学特征.方法 报道1例罕见的肾炎性肌纤维母细胞瘤,结合文献对其临床表现、组织形态、免疫组化特点及治疗和预后等进行分析.结果 患者女性,41岁.左侧腰部间歇性胀痛1月余,CT示"左肾占位",行左侧肾切除术.大体见中上极肾实质内有一3 cm×3 cm×2 cm大小灰白色质韧肿瘤,无包膜,与周围界限欠清.镜下见肿瘤主要由梭形细胞组成,梭形细胞呈束状交错排列.伴有大量慢性炎细胞浸润,以淋巴细胞和浆细胞为主,局部见较多泡沫细胞.免疫表型SMA和Vim( ).随访半年未见复发.结论 肾炎性肌纤维母细胞瘤是一种非常罕见的肿瘤,临床表现以腰痛和/或血尿为主要症状,确诊需依靠病理检查及免疫组化.鉴别诊断包括肾的肉瘤样癌、Wilms瘤以及腹膜后炎性纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、纤维瘤病等.手术切除预后良好.     

血必净注射液对烧伤患者血管内皮细胞的保护作用研究

目的：观察血必净注射液对烧伤患者血管内皮细胞的保护作用。方法：将30例烧伤患者随机分为治疗对照组和血必净组,选取15名健康者作为正常组。治疗对照组患者给予液体复苏、抗生素、营养支持和手术等综合治疗。血必净组给予综合治疗的同时,加用血必净注射液100ml静滴,每日2次。两组患者分别在人院当天及治疗第2、5、7天检测血中血栓调节蛋白和循环内皮细胞数量,并与正常组比较。结果：人院时治疗对照组及血必净组患者血栓调节蛋白和循环内皮细胞数量显著高于正常组（P〈0．01）。血必净组血栓调节蛋白和循环内皮细胞数量在治疗第5、7天明显低于对照组（P〈0．05）;第7天血必净组血栓调节蛋白和循环内皮细胞数量接近正常组。结论：血必净注射液对烧伤患者血管内皮细胞有保护作用。