大萼香茶菜甲素对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 探讨大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)对白血病细胞系HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的MA处理HL-60细胞,锥虫蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的影响;以细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annex-in-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA诱导HL-60细胞的分化作用;用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas表达和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△Ψm)的变化.结果 HL-60细胞经MA作用后,MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞增殖,24、48、72 h的IC50值分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;形态学出现典型的凋亡细胞特征,亚G1期细胞和Annexin-V/PI标记阳性细胞显著升高;细胞发生部分分化,CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多;MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,线粒体膜电位(△Ψm)下降.结论 MA能抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、提高线粒体膜通透件和下调线粒体膜电位等有关.     

四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡及其分子机制研究

本研究探讨四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位（ΔΨm）,用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明：ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性。随ZGDHu-1作用浓度的增加,ΔΨm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调。结论：ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。     

血小板糖蛋白与高血压、脑梗死关系的临床研究

目的通过测定高血压、脑梗死患者血小板糖蛋白（CD62，CD63，PAC-1）和纤维蛋白原（FIB）指标，旨在为临床治疗高血压、脑梗死提供有用的参考指标。方法采用流式细胞术（FCM），对85例高血压脑梗死患者，42例正常血压脑梗死患者、35例原发性高血压患者血小板糖蛋白CD62P，CD63，PAC-1进行检测。利用Acl-Advanee血凝仪测定了FIB。结果高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组与原发性高血压组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAC-1及FIB均显著高于正常对照组（均P〈0．001），且高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAC．1及FIB均明显高于高血压组（均P〈0．001）。高血压脑梗死组与正常血压脑梗死组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAG-1及FIB均无明显差异。血小板糖蛋白及FIB大梗死灶组〉中梗死灶组〉小梗死灶组，各组之间均有明显差异（P均〈0．01）。血小板糖蛋白CD62P、CD63、PAC-1与FIB呈正相关结论脑梗死、高血压患者均存在血小板活化，脑梗死患者血小板活化与病情及梗死灶大小有关。血小板糖蛋白的检测对高血压患者的病情分析和脑梗死的预防以及早期诊断和治疗具有重要的意义。     

高血压患者血管内皮标志物与内皮依赖性血管舒张功能的关系

目的探讨高血压患者血管内皮标志物与内皮依赖性血管舒张功能的关系。方法用放射免疫分析法和酶联荧光免疫测定法检测56例高血压患者和32例正常对照组血浆内皮素(ET-1)和血管性假血友病因子(vWF),并用高分辨彩色多谱勒超声仪检测肱动脉内皮依赖性血管舒张功能。56例高血压患者按危险度分层,分为低/中危险度30例,高/极高危险度26例;其中50例用药物治疗后复查血浆ET-1、vWF和肱动脉内皮依赖性血管舒张功能。结果高血压组血浆ET-1、vWF水平显著高于正常对照组[(53.3±16.2)pg/mlvs(42.5±8.5)pg/ml,(158.2±28.6)%vs(130.6±35.2)%],高/极高危组明显高于低/中危组(P<0.001);高血压组肱动脉反应性充血诱导下血管内径舒张率较正常对照组明显减弱[(7.5±4.2)%vs(12.3±4.3)%],高/极高危组明显高于低/中危组(P<0.001),低/中危组也较正常对照组明显减弱(P<0.05)。经抗高血压药物治疗后,血浆内皮标志物和内皮依赖性血管舒张功能明显改善。相关分析显示,血浆内皮标志物和内皮依赖性血管舒张功能存在显著的负相关关系(P<0.01)。结论高血压患者存在血浆vWF、ET-1水平升高和内皮依赖性血管舒张功能障碍,且与靶器官的损伤相关;血浆内皮细胞标志物可反映内皮依赖性血管舒张功能。     

丁胺卡那霉素对血小板聚集和凝血功能的抑制作用

目的 观察丁胺卡那霉素对血小板聚集和凝血功能试验的抑制作用,探讨其对止血功能的影响及相关作用机制.方法 将不同浓度丁胺卡那霉素分别与献血者富血小板血浆和乏血小板血浆作用,分为4组:0 mg/L组、30 mg/L组、91 mg/L组和910 mg/L组.以血小板聚集分析仪检测ADP诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板P-选择素、GPⅡb/Ⅲa及Fg-R表达水平,以血液凝固分析仪测定PT、APTT、TT及Fg水平.以前述4种浓度丁胺卡那霉素以及62.5 U/ml肝素钠和109 mmoL/L柠檬酸钠分别与新鲜全血作用,测定CT及血浆Ca2+浓度.分别检测10例急性下呼吸道感染患者在丁胺卡那霉素常规剂量治疗前和治疗后30 min ADP诱导的血小板最大聚集率、P-选择素、GPⅡb/Ⅲa及Fg-R表达水平,并测定PT、APTT、CT和血浆Ca2+浓度.结果 30 mg/L组血小板最大聚集率、P-选择素和Fg-R分别为(65.8±3.9)%、(9.2±1.0)%和(12.6±1.7)%,显著低于0 mg/L组的(88.0±4.6)%、(16.1±1.3)%和(31.0±2.5)%,差异均有统计学意义(t值分别为9.442、8.432和9.993,P均＜0.01);30 mg/L组APTT(80.5±6.8)s和CT(857±66)s明显高于0 mg/L组的(33.0±3.6)s和(447±35)s,差异均有统计学意义(t值分别为11.312和13.211,P均＜0.01);丁胺卡那霉素浓度与血小板最大聚集率呈显著负相关,与聚集的抑制率呈显著正相关,与APTT呈显著正相关[r值分别为-0.832、0.939和(＞0.870),P均＜0.05];30 mg/L组,91 me/L组和910 mg/L组呈剂量依赖性抑制P-选择素和Fg-R表达及使CT增加[F组间=21.44、26.24和(＞29.81),P均＜0.01].0 mg/L组、30mg/L组、91 mg/L组和910 mg/L组PT值分别为(14.7±1.9)s、(15.2±1.7)s、(15.6±1.5)s、(22.1±2.1)s,差异有统计学意义(F=8.21,P＜0.05),而GPⅡb/Ⅲa、TT、Fg以及血浆Ca2+浓度在4组间差异无统计学意义(P均＞0.05).丁胺卡那霉素治疗后患者血小板最大聚集率(51.6±10.1)%、P-选择素(6.8±1.8)%和Fg-R(20.1±5.8)%明显低于治疗前的(66.8±11.4)%、(10.9±3.1)%和(28.5 ±7.4)%,APTT(49.8±5.9)s和CT值(660±59)s则明显高于治疗前的(26.9±3.8)s和(410±45)s,差异均有统计学意义(t值分别为5.456、8.875、7.423、10.012和11.322,P均＜0.01).治疗前、后GPⅡb/Ⅲa、PT和Ca2+浓度变化无统计学意义(P＞0.05).结论 丁胺卡那霉素通过抑制血小板纤维蛋白原受体活化和释放反应途径抑制血小板聚集,可能通过抑制内源凝血系统因子途径而抑制凝血功能,从而对止血功能有抑制作用;应用丁胺卡那霉素抗感染治疗可能有发生出血的危险.     

氟康唑对光滑假丝酵母菌及线粒体膜电位的影响

目的观察氟康唑对光滑假丝酵母菌作用后存活率、细胞周期、活性氧(ROS)和线粒体膜电位的变化,初步探讨其作用机制。方法采用NCCLS M27-A微量稀释法和ATBF3法测定临床分离的光滑假丝酵母菌对氟康唑的最低抑菌浓度(MIC)值;光滑假丝酵母菌氟康唑敏感株与光滑假丝酵母菌氟康唑耐药株与不同浓度氟康唑共同培养后,流式细胞术(FCM)分析荧光探针碘化丙啶(PI)标记存活率、DNA-Prepkit试剂盒标记细胞周期、荧光探针双氢罗丹明(DHR)标记ROS和荧光探针四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)标记线粒体膜电位的变化。结果氟康唑敏感株MIC在2μg/ml,氟康唑耐药株MIC128μg/ml;氟康唑作用后,氟康唑耐药株存活率、细胞周期、ROS和线粒体膜电位均无明显变化;而氟康唑敏感株存活率明显下降,ROS和线粒体膜电位明显升高,呈一定的剂量依赖关系;大部分光滑假丝酵母菌阻滞于G2-M期,并出现subG1凋亡峰。结论光滑假丝酵母菌过多ROS的产生和线粒体膜电位去极化可能是氟康唑诱导光滑假丝酵母菌凋亡的重要机制。     

四嗪二甲酰胺体外对慢性B淋巴细胞白血病细胞增殖的影响及其机制探讨

四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1),其化学名称为N,N'-二(间甲基苯)-3,6-二甲基-1,4二氢-1,2,4,5-四嗪-1,4-二甲酰胺,是胡惟孝等[J]合成的一种具有显著的抗肿瘤活性的化合物[2],初步实验结果表明ZGDHu-1是一种蛋白酶体抑制剂[3].我们通过检测ZGDHu-1作用后慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)细胞凋亡情况并观察其对NF-κB表达的影响,探讨ZGDHu-1对B-CLL细胞的作用机制.     

Bcl-2与肿瘤关系的研究进展

Ｂｃｌ－２是细胞凋亡调控基因,它的异常表达与肿瘤的发生、发展关系密切。本文着重介绍了Ｂｃｌ－２在细胞凋亡的调控作用及与肿瘤的关系。     

硝普钠抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究

目的：观察外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠对K562细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用：方法：将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养，观察其作用时间效应和剂量效应；用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K562细胞增殖的抑制作用；用DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照组。结果：NO能抑制K562细胞生长，并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系．大部分细胞阻滞于G0／G1期；K562细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变，DNA片断化，亚G1峰检出并显著增加，Annexin V／PI和DNA片段原位末端标记表达增加等均证实NO能诱导K562细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论：NO通过阻滞G0／G1期细胞显著抑制K562细胞的增殖，并有很强的致凋亡作用。     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。