四嗪二甲酰胺抑制T淋巴细胞活化的实验研究

目的 研究四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对植物血凝素(PHA)刺激的T淋巴细胞体外活化的影响,初步探讨其免疫抑制作用.方法 从健康人外周血分离淋巴细胞,经PHA刺激诱导淋巴细胞活化,ZGDHu-1单独或联合环孢霉素A(CSA)作用24 h、48 h,检测各组T淋巴细胞的增殖、凋亡情况.采用流式细胞仪检测CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+、CD8~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、CD8~+ Fas~+.用Annexin V/PI染色结合流式细胞术,分析淋巴细胞早期凋亡.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清IL-2和转化生长因子-β1(TGF-β1).结果 ZGDHu-1能明显降低PHA活化的CD3~+ CD69~+、CD3~+ CD25~+、CD4~+ CD25~+和CD3~+ Fas~+、CD4~+ Fas~+、Annexin V~+/PI~-,并降低活化T淋巴细胞的IL-2分泌及促进TGF-β1的分泌,联合CSA应用效果更明显.结论 ZGDHu-1能抑制T淋巴细胞活化,降低T淋巴细胞凋亡,和CSA联合具有一定的协同效应.     

血小板活化检测在肾病综合症患者中的意义

[目的]通过测定肾病综合症(NS)患者血小板糖蛋白及血清脂质、凝血指标,旨在为临床治疗NS提供有用的参考指标。[方法]利用流式细胞术检测了45例NS患者(其中伴静脉血栓者9例,无静脉血栓者36例)的血小板糖蛋白(CD62P、CD63),同时用仪器法测定了Plt、TC、HDL、LDL、TG、PT、APIT、TT、Fib。[结果]NS患者CD62P、CD63、Plt、TC、LDL、TG、Fib显著高于正常对照组,且CD62P、CD63、Plt、TC、LDL、Fib等伴静脉血栓者显著高于无静脉血栓者;但NS患者HDL、APTT明显低于正常对照组,PT、TT变化并不明显。血小板CD62P百分率与P1t、PT、APTT、Fib成正相关,CD63百分率与P1t、APTT、Fib成正相关,且血小板CD63与CD62P之间呈正相关性。[结论]NS患者血小板糖蛋白测定,对NS病情分析和预防静脉血栓有重要的临床参考价值。     

木瓜蛋白酶体外对血小板聚集的抑制作用

目的：以洗涤血小板为模型,观察木瓜蛋白酶在体外对血小板聚集的抑制作用,以探讨其抗血栓作用的可能机制。方法：将不同剂量木瓜蛋白酶与洗涤血小板作用,以血小板聚集分析仪检测ADP、花生四烯酸（AA）、胶原和凝血酶诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板膜纤维蛋白原受体（FIB-R）和P-选择素表达水平,以SDS-PAGE分析血小板肌动蛋白聚合体的变化。检测ADP诱导的原发性高血压（PH）及急性心肌梗死（AMI）患者血小板最大聚集率和FIB-R表达水平。结果：木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制血小板聚集,降低血小板最大聚集水平,血小板聚集水平与木瓜蛋白酶剂量呈负相关（P〈0.01）。木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制ADP诱导的血小板FIB-R表达,降低FIB-R表达水平（P〈0.01）。木瓜蛋白酶降低ADP诱导的血小板膜P-选择素表达水平和抑制肌动蛋白聚合体增加（P〈0.01）。木瓜蛋白酶抑制PH及AMI患者血小板聚集和FIB-R表达（P〈0.01）。结论：木瓜蛋白酶通过抑制活化血小板膜纤维蛋白原受体的表达,并抑制肌动蛋白聚合以及释放反应从而剂量依赖性地抑制血小板的聚集反应,有抗血栓形成作用。     

外周血CD64表达对鉴别诊断小儿急性上呼吸道感染的价值

目的应用流式细胞仪测定小儿急性上呼吸道感染患儿外周血中性粒细胞CD64表达水平．用于鉴别诊断细菌性感染和病毒性感染。方法随机抽取59例本院住院小儿急性上呼吸道感染患儿，根据白细胞计数，中性粒细胞分类及病原学和血清学检查等分为两组，其中细菌性上感31例，病毒性上感28例，测定CRP及CD64水平，并与正常对照组比较：同时根据白细胞数量分为白细胞高值组和白细胞低值组，观察两组之间的CD64水平。结果31例细菌性上感CD64表达量明显高于正常对照组（P〈0．01），CRP阳性27例，阴性4例．阳性率88％，而28例病毒性上感CD64表达量与正常对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；CRP阳性6例，阴性22例，阳性率22％：同时白细胞高值组CD64表达量明显高于正常对照组（P〈0．01），而白细胞低值组与正常对照组比较差异无显著性（P〉0．05）。结论小儿急性上呼吸道感染患儿外周血中性粒细胞CD64表达水平与CRP、白细胞数量呈正相关，测定外周血CD64可用于鉴别细菌性感染和病毒性感染。     

四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制，将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养，用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法，观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin V/PI双标记、Hoechst 33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2，bax，p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明，ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力，呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G₂-M期；出现DNA片段化，亚G₁峰显著增加，Annexin V+/PI-表达升高，Hoechst 33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10，20及40 mg·kg^-1剂量给裸鼠体内用药14 d后，移植瘤生长抑制率分别为43.7%，56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后，bcl-2基因和蛋白有所下调，但主要是上调bax基因和蛋白，导致bax/bcl-2比值明显增高，p53基因和蛋白表达也上调，均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长，体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖，其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。     

IL-6及其mIL-6R、sIL-6R在子宫内膜异位症患者腹腔液中的表达及意义

目的 探讨子宫内膜异位症（内异症）患者腹腔液白细胞介素6（IL-6）及其膜结合受体（mIL-6R）、可溶性受体（sIL-6R）在内异症发病机制中的意义.方法 47例经腹腔镜手术的内异症患者根据r-AFS分期分为A组（Ⅰ～Ⅱ期：19例）和B组Ⅲ～Ⅳ期：28例）,以22例同期腹腔镜手术的卵巢良性囊肿、子宫畸形患者为对照组,CD126-PE荧光抗体标记mIL-6R,流式细胞法检测腹腔液中CD126＋细胞的表达;同时应用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测腹腔液中IL-6及sIL-6R的含量.结果 A组和B组腹腔液中IL-6及mIL-6R的表达显著高于对照组（均P〈0.05）,两者的升高保持一致性,但无明显的直线相关关系,而B组患者腹腔液中sIL-6R含量显著高于A组和对照组（均P〈0.05）.结论 内异症患者腹腔液中升高的IL-6可能首先通过与同样表达增强的mIL-6R结合而影响疾病发生与发展;同时内异症患者腹腔液sIL-6R含量显著升高,协同参与了内异症的发展,并且可能与疾病的严重程度相关;而内异症患者腹腔液中大量mIL-6R的水解脱落可能是显著升高的sIL-6R主要的产生来源.     

2型糖尿病血小板-白细胞聚集体的临床意义

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者外周血的血小板-白细胞聚集体(PLA)、CD62p的变化,并探讨其与空腹血糖的关系。方法采用流式细胞术检测T2DM患者单核细胞、粒细胞的CD61表达百分率即血小板-单核细胞聚集体(PMA),血小板-粒细胞聚集体(PNA)和CD62p。结果T2DM组、有微血管病变的DM组、无微血管病变的DM组的PMA,PNA、CD62p均显著高于健康人对照组(P均<0.01);有微血管病变的DM组的PMA、PNA、CD62p明显高于无微血管病变的DM组(P均<0.01)。T2DM患者的PMA、PNA、CD62p与高血糖有明显的正相关性(r=0.44,0.58,0.55,P均<0.05)。结论PMA、PNA、CD62p的测定对于糖尿病微血管病变的研究与临床应用有一定意义。     

活化血小板、白细胞粘附分子与急性缺血性脑血管病关系

在动物实验中已发现，脑缺血急性期，血小板表面P-选择素(CD62p)、凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，TBP)、血小板源内皮细胞粘附分子(CD31)、白细胞表面细胞间粘附分子(ICAM-1)和血管细胞粘附分子(VCAM-1)等表达增加，参与脑缺血发病。但在脑缺血患者急性期血中血小板和白细胞表面的上述分子物的变化尚不清楚，我们采用流式细胞术检测活化血小板、白细胞粘附分子，     

四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究

目的:观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果:ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力,10 ng.ml-1ZGDHu-1作用HL-60细胞24~72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率分别为(7.3±0.3)%、(15.8±1.0)%和(21.3±1.2)%,均显著高于对照组(P<0.01);48 h、72 h的IC50分别为180、180 ng.ml-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;出现典型的细胞形态改变,DNA片端化,经50~1 000 ng.ml-1的ZGDHu-1作用后,SubG1由(3.2±1.6)%上升至(67.7±5.9)%,与对照组(0.7±0.5)%比较,具有显著性差异(P<0.05),Annexin-V/PI标记升高,TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10~100 ng.ml-1ZGDHu-1作用3 d后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas表达增强,而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加,ΔΨm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论:ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力,低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化,高浓度时促进细胞凋亡,其机制可能与Bax表达上调,线粒体膜电位下降等有关。