正常人骨髓间充质干细胞体外对K562细胞生长及分化抗原表达的影响

目的 探索正常人骨髓间充质干细胞(MSCs)对K562细胞增殖及表面分化抗原表达的影响.方法 分别将K562细胞悬浮培养及与MSCs黏附培养,绘制K562细胞生长曲线;用流式细胞术检测K562细胞周期及表面分化抗原的表达.结果 与悬浮培养比较,与MSCs黏附培养的K562细胞增殖受抑,G0/G1期细胞增加(P<0.05),G2/M期细胞增加(P<0.05),而S期细胞减少(P<0.05);但悬浮培养与黏附培养在细胞分化抗原的表达上没有明显的影响.结论 K562细胞与MSCs黏附培养可以抑制K562细胞的生长,但对其分化没有明显的影响.     

供鼠细胞经氟达拉滨处理后移植对aGVHD的影响

目的 探讨临床注射用氟达拉滨对大鼠同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)后造血重建及急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 建立大鼠Allo-BMT模型,以清洁级Wistar大鼠为供鼠,清洁级SD大鼠20只随机分为A、B、C三组,受鼠接受全身照射(TBI)6.0Gy作为清髓性预处理.4h后,A组输注生理盐水作为对照组,B组经尾静脉输注供鼠骨髓及脾混合单个核细胞,C组经尾静脉输注用氟达拉滨体外培养24h的供鼠骨髓及脾混合单个核细胞.移植后每天观察三组受鼠造血恢复情况及aGVHD的发生情况.结果 移植后B、C组大鼠的外周血像平均恢复时间分别为(18.50±1.05)和(15.17±1.47)d(P＜0.05).A组大鼠的血像持续降低至死亡.临床aGVHD评分,B组明显高于C组[(7.33±1.63) vs. (4.67±1.23)分,(P＜0.05)].肝脏和结肠病理分级比较,B组以Ⅳ～Ⅴ级、C组以Ⅱ～Ⅲ级aGVHD病理变化为主,两组差异显著(P＜0.05).结论 大鼠Allo-BMT模型中,经氟达拉滨体外培养的供鼠细胞能显著减轻受鼠的aGVHD.     

米托蒽醌为主的化疗方案对CD34+高表达白血病的疗效观察

目的进一步探讨米托蒽醌(MTZ)在急性白血病(AL)化疗中的作用特点，提高临床对难治性白血病的化疗疗效和AL的完全缓解(CR)率和无病生存率(FDS)。方法57例CD34 抗原高表达的AL患，随机选择3种常规化疗方案(MA／MAE、DA／DAE、HA／HAE)，联合化疗1～2个疗程后分别比较缓解率、骨髓抑制及其它毒副作用；同时骨髓白血病细胞体外培养72h，进行药物杀伤效应实验，分别比较MTZ、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)在体外对白血病细胞不同分化阶段的抑制作用。结果以MTZ为主的MA／MAE方案有效率最高，急性髓系白血病(AML)为80．0％(24／30)，比DA／DAE和、HA／HAE方案高28．8％和56．9％；急性淋巴细胞白血病(ALL)的COMP方案有效率为92．6％(25／27)，比CDOP方案高27．4％。药物抑制试验显示MTZ对分化较早期阶段的CD34^ 白血病细胞的抑制显高于DNR和HHT。结论MTZ具有较强的抗白血病活性，临床骨髓抑制明显和较少产生耐药，可能与其主要作用于白血病细胞的分化较早阶段有关。     

脐血输注在血液科疾病中的应用

作者应用脐血治疗血液科疾病扣例，现将结果报告如下。1材料与方法脐血来源于无任何遗传性、家族性疾病史，乙肝两对半及丙肝抗体阴性，无产科并发症的足月妊娠健康产妇。当胎儿娩出后断脐，应用密闭式采血法，采集量扣～200Tnl，有核细胞数0．47X10儿～4．6＼10'几均数1．4／1矿地上0．96X10，IL，交叉配血相合后于采集后24h内输给患者，接受输血患者均为住院者，经外周血，骨髓象、病理等有关检查明确诊断。再障组22例（慢性18例，重型再障3例，纯红再障1例）；肿瘤组（包括白血病）28例，总共扣例中男朋例，女20例，年龄3～69岁，平均3…     

活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

多发性骨髓瘤患者T细胞共刺激分子表达和调节性T细胞检测及意义

目的通过检测多发性骨髓瘤患者外周血T细胞共刺激分子CD28表达及CD4^＋CD25^high调节性T细胞（Tregs）水平,探讨其免疫功能状态及临床意义。方法采用流式细胞术检测38例多发性骨髓瘤患者及20例健康志愿者外周血T细胞亚群cD。表达和CD4^＋CD25^high Tregs水平。分别采用透射免疫比浊法、溴甲酚绿法及速率法测定患者血清β2-微球蛋白（β2--MG）、白蛋白（Alb）及乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果与正常对照组相比,多发性骨髓瘤患者外周血CD4＋T细胞百分率降低、CD8^＋T细胞百分率升高、CD4／CD8比值降低（P〈0．05或P〈0．01）,进一步研究发现CD4^＋和CD8^＋T细胞CD28表达均较对照组明显下降,而CD4^＋CD25^high Tregs百分率显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。CD4^＋和CD8^＋T细胞CD28表达在进展期明显低于稳定期（P均〈0．01）,而CD4^＋CD25^high Tregs在稳定期和进展期间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。多发性骨髓瘤患者CD4^＋T细胞CD28表达、CD8^＋T细胞C28表达均与其血清β2-MG水平呈负相关,而与Alb水平呈正相关（P〈0．05,P〈0．01）,CD4^＋CD25^high Tregs与Alb水平呈负相关（P〈0．05）。结论多发性骨髓瘤患者存在T细胞亚群共刺激分子CD28表达缺陷和CD4^＋CD25^high Tregs扩增,并与病情进展及预后存在一定相关性。     

特发性血小板减少性紫癜患者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞凋亡率的研究

目的:通过检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率,探讨T淋巴细胞凋亡在特发性血小板减少性紫癜(ITP)免疫发病机制中的作用。方法:应用流式细胞仪检测ITP患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率;分离ITP患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),分成A、B 2组,A组加入白介素2(IL-2),B组加入IL-2和地塞米松共培养,分别于24和48 h收获细胞,应用流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率。结果:①ITP患者组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显低于正常对照(均P<0.01);②细胞培养24 h时ITP患者组A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率间均差异无统计学意义(均P>0.05),而48 h时B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的凋亡率均明显高于A组(P<0.05或0.01);正常对照组24和48 h B组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率均明显高于A组(均P<0.05);③ITP患者组细胞培养24 h后A、B 2组间CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞凋亡率的差值均明显低于正常对照组(P<0....     

癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的生物学特性研究

目的 :探讨癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的生物学特性 ,以便更好地应用于临床。方法 :用低浓度白细胞介素 2 (IL - 2 )诱导培养癌性胸水TIL ,按常规法计数TIL细胞增殖量 ,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀伤细胞活性。结果 :经低浓度IL - 2 (10 0IU/ml)诱导培养TIL 2 1d后 :TIL增殖倍数为2 130± 1140 ,大于 10 0 0倍占 72 %。CD3 无显著性变化 (P >0 .0 5 ) ,CD4 、CD8有显著性差异 (P <0 .0 1) ,而CD4 /CD8比值高达 3.5 3± 0 .82 ,并且在 2 1d时TIL具有较高的细胞毒性。结论 :癌性胸水TIL体外诱导培养3周时TIL具有较强的生物活性 ,此时进行胸水治疗可取得可靠的疗效。     

间充质干细胞的免疫调节功能及其在GVHD中的作用

间充质干细胞是一种具有高度自我更新特性的成体干细胞,拥有多向分化、支持适血、免疫调节和加速移植物植入等能力。现就闻充质干细胞对免疫细胞的调节作用及其在预防和抑制移植物抗宿主病中的应用前景作一综述。     

红细胞生成素受体在白血病细胞上的表达及意义

目的:探讨红细胞生成素受体(EPO-R)在白血病细胞上的表达及其意义,以及重组人EPO(rhEPO)对急性白血病细胞增殖的影响. 方法:应用独特型EPO-R单克隆抗体,通过流式细胞仪技术检测30例急性白血病(AL)患者的白血病细胞EPO-R的表达,用细胞周期DNA分析法研究rhEPO单独对AL细胞增殖的影响.结果:30例AL患者白血病细胞均有EPO-R表达,EPO-R表达率(4.6±4.2)%明显低于作为对照组,P＜0.05.18例AL患者的白血病细胞体外经rhEPO作用后未出现明显的增殖,与对照组比较,无显著性差异(P＞0.05).结论:EPO-R在AL细胞中均有表达,但表达水平较低.rhEPO体外不刺激AL细胞的增殖.EP0-R在AL中的作用、生物学特性及与预后的关系还有待于深入研究.