可溶性Ⅰ型胶原蛋白对移植肝细胞凋亡的抑制作用

目的　研究可溶性Ⅰ型胶原蛋白对自体移植肝细胞凋亡的抑制作用及相关机制。方法　建立自体肝细胞脾内移植大鼠模型,按肝细胞处理的不同分为肝细胞悬液不处理组（A组）、拮抗型抗整合素β1单克隆抗体及Ⅰ型胶原蛋白处理组（B组）以及Ⅰ型胶原蛋白处理组（C组）,应用     

丙型肝炎病毒核心蛋白通过活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白（HCVc）对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3（stat3）通路及上皮间质转化（EMT）的影响。 方法将含HCVc基因序列的重组质粒pEGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞HepG2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat3、磷酸化stat3（p-stat3）及EMT指标蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的表达,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。 结果划痕实验及Transwell实验结果显示,过表达HCVc可增强HepG2细胞的迁移和侵袭能力;stat3通路抑制剂AG490处理可抑制HepG2细胞的侵袭能力。RT-PCR和Western blotting结果显示,过表达HCVc后,HepG2细胞中p-stat3、Vimentin及Snail在表达升高,E-cadherin表达下降;AG490处理可下调p-stat3、Vimentin及Snail表达,增强E-cadherin表达。 结论HCVc可活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化,增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。     

巨脾切除加自体脾腹膜后移植术治疗儿童重型β-地中海贫血的临床研究

目的　研究巨脾大部分切除加自体脾腹膜后移植术对儿童重型 β 地中海贫血的治疗效果及可行性分析。方法　经临床确诊的重型 β 地中海贫血并巨脾患儿 2 7例 ,其中男 1 2例 ,女 1 5例 ,年龄 4～ 1 4岁 ,平均 (6 .7± 1 .6)岁。对 1 995～ 1 999年的 1 5例患儿施行巨脾全切除术 (对照组 ) ,2 0 0 0～ 2 0 0 2年的 1 2例患儿施行脾大部分切除加自体脾腹膜后移植术 (实验组 ) ,随访半年以上者 2 4例 ,将两组的Hb平均值、血清抗体水平、99mTc 脾扫描、输血量及术后并发症等临床疗效观察进行对照分析。结果　①术前两组Hb平均值皆约为 60 g/L左右 ,术后 1周、1个月、3个月、6个月、1年Hb先升高后呈下降趋势 ,但实验组与对照组Hb平均值差异无显著性意义 (P >0 .0 5) ;②术后 1周、3个月实验组IgM水平分别为 (0 .54± 0 .1 3)g/L和 (0 .62± 0 .1 5)g/L ,对照组为 (0 .2 2± 0 .0 5)g/L和 (0 .2 8± 0 .0 7)g/L ,实验组明显高于对照组 (P <0 .0 5) ,而IgG水平差异无显著性意义 (P >0 .0 5) ;③对照组发生OPSI(切脾后全身凶险性感染 ) 1例 ,死亡 1例 ,实验组发生切口感染、呼吸道感染等的机率明显低于对照组 ;④实验组有 6例术后 1年行99mTc 脾扫描可见脾组织显影。结论　①脾切除术对儿童重型 β 地中海贫血有     

腹腔镜辅助下改良Soave术治疗儿童先天性巨结肠

我院小儿外科于去年9月开展了腹腔镜辅助下儿童无天性巨结肠根治术(改良Soave术),随访近1年效果满意。现报道如下。临床资料该例患儿为5岁男性,因腹胀、便秘4年余入院。其间常需用开塞露或灌肠等治疗。就诊于本院后经钡灌肠和直肠粘膜活检确诊为先天性巨结肠症(常见型)。术前肠道等准备工作与传统方法无异。手术操作:气管内插管麻醉下取仰卧头低足高位,插入导尿管。于脐下插入气腹针注入CO2气体鼓腹(压力12mmHg,流量2.5L/min,然后于左上、右上、右下腹分别作3个小切口,穿刺插入3把5.5mm直径的Trocar,经Trocar分别插入5mm直径的腹腔镜和操…     

腹痛、发热伴腹水——查房选录(217)

１　病历摘要 患儿男,３．５岁,广东肇庆人。因腹痛１０日于１９９８年４月１６．日入院。患儿入院前２周出现发热,次日热退,但出现腹痛,位于脐周,呈阵发性绞痛,伴进食后呕吐及腹胀,入院前８日开始排“紫菜汤”样烂便,伴恶臭。曾在外院住院治疗,发现有渗出性腹水;经治疗后呕吐渐止,腹痛减轻,腹胀却逐渐加重。拟“腹水原因待查”收入院。患儿既往史、家族史无特殊,按时预防接种。体查：体温３７．３℃,脉搏１３０次／分,呼吸３０次／分,血压１１ｋＰａ／７ｋＰａ,体重１２．５ｋｇ．腹围５３．５ｃｍ。神情,营养欠佳,疲…     

miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

 目的： 通过miRNA-122 (miR-122)转染胚胎干细胞（ESCs）源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法：采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV>miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果：丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论：丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。     

先天性巨结肠的腹腔镜治疗体会

【摘要】 目的 探讨腹腔镜技术在小儿先天性巨结肠治疗中的应用。方法 对12例先天性巨结肠患儿行腹腔镜Swenson手术,其中短段型3例,普通型8例,长段型1例。结果 12例患者均在腹腔镜下完成手术,无中转开腹病例。手术切除痉挛段和扩张段病变肠管送病理检查,其中最短者约15cm,最长者约60cm。术后病理均显示符合先天性巨结肠诊断。所有病例均未出现吻合口漏、尿潴留、肛周感染等并发症。术后随访3-12个月,所有病例排便功能恢复良好,而且无失禁和便秘症状。结论 腹腔镜先天性巨结肠根治术创伤小、术后恢复快,手术安全,效果满意。     

热诱导调控序列的合成及其热诱导特性的研究

目的 探讨合成热诱导性的HSP70启动子调控序列,并鉴定加热条件下诱导其下游报告基因表达的特性。方法 利用PCR方法,以肝癌细胞株HepG2基因组为模板,体外合成热休克蛋白70（HSP70）启动子序列。利用双酶切法构建HSP70启动子调控的含EGFP报告基因的真核表达载体pcDNA-HSP70-EGFP。以脂质体为载体,体外转染肝癌细胞株HepG2,在不同的温度下（37℃、39℃、41℃、43℃、45℃）加热不同时间（0、15、30、45、60min）后,利用流式细胞术检测报告基因EGFP表达强度,从而判定温度及时间对HSP70启动子热诱导活性的影响。结果 合成的HSP70启动子序列测序结果与GeneBank 中AL671762所提供序列完全一致。低温加热后EGFP在HepG2细胞中的表达强度不同程度增强,在43℃/30 min 时最为明显,为未加热组的3.3倍。结论 成功合成可热诱导的HSP70启动子序列;HSP70启动子在低温加热下能明显增强其下游外源基因的表达,为进一步研究肿瘤热疗-基因治疗提供了实验基础。     

人肝细胞核因子4α重组慢病毒载体的构建与鉴定

【摘要】〓目的〓构建肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4 alpha, HNF4A)的过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究HNF4A的功能和作用机制奠定基础。方法〓利用PCR法扩增人类基因组DNA中HNF4A的cDNA序列,并将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组PCDH-CMV-HNF4A-EF1a-GFP-puro表达载体、pCMV-VSV-G 和pCMV-dR8.91三质粒共转染到HEK-293T细胞,收集上清,将获得的病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK-293T细胞,并利用绿色荧光蛋白检测病毒滴度。将重组慢病毒感染原代培养人皮肤成纤维细胞HFFs,并利用荧光定量PCR检测HNF-4A的表达。结果〓重组慢病毒表达载体PCDH-CMV-HNF4A-EF1a-GFP-puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功,并得到滴度为1×108 TU/mL的病毒液。病毒感染人皮肤成纤维细胞后HNF4A表达显著增强。结论〓通过优化载体构建方法成功构建人HNF4A的重组慢病毒载体并可在HFFs内显著过表达HNF4A,为HNF4A的研究提供更高效稳定的基因载体。     

沙培林和平阳霉素注射治疗婴儿血管瘤临床对比研究

目的探讨平阳霉素、沙培林用于血管瘤注射治疗的疗效。方法将1月到1岁的120个小儿增生期血管瘤随机分为瘤体内注射平阳霉素组和注射沙培林组各60例，观察治疗效果和并发症。结果平阳霉素组的有效和显效率明显优于沙培林组（P〈0．05），两组的并发症除发热（P〈0．005）外，其余并发症均无统计学意义（P〉0．05）。结论瘤体内注射沙培林和平阳霉素治疗血管瘤均是有效，但以平阳霉素的疗效较佳。