细胞荧光素酶报告基因试验受CpG岛甲基化状态影响

Objective To investigate the effects of methylation status of CpG islands of endogenous E-cadherin (CDH1) gene on the promoter activity of corresponding genes in reporter assays. Methods The methylation statuses of CpG island of CDHI in 8 different cell lines were detected by methylation-specific PCR. CDH1 protein was analyzed by Western blotting. Two sets of pGL3 reporter vectors with different genotypes/haplotypes of the CDH1 promoter were constructed [pGI3-A(-73)/-C(-73)pGL3-H1/-H4]and used to transfect these cell lines. The differences between these promoter reporter vectors were analyzed by t-test. Results (1) CDH1 CpG island was unmethylated in AGS, MCF7, MKN74, and PC-3 cell lines,expressed in MCF7, MKN74, and PC-3 ,but not in AGS. Expression of CDH1 was silenced by methylation in HeLa, BGC823, A549, and RKO cell lines. (2) In the four CDH1 -unmethylated MCFT, M KN74, PC-3, and AGS cell lines ,the promoter activities of pGI3-C(-73)(as 0. 78±0. 10,0. 17±0.01,0. 11±0. 01,1.19±0. 18)were significantly higher than those of pGL3-A(-73)(as 0. 30±0. 08,0. 07±0. 01,0. 07±0. 01,0. 39±0. 04) (t values are -6. 298, -12. 349, -8. 128, -7.388, and P<0. 01). However, in the four C DH1 -methylated HeLa, BGC823, A549, and RKO cell lines, the promoter activity of pGL3-C(-73)(as 0. 09±0. 02,0. 13±0. 02,0. 05±0. 01,0. 01±0. 00) was significantly lower than that of pGL3-A(-73)(as 0. 16±0. 01,0.25±0.01,0. 11±0.03,0.03±0.00) (t valued at 5.958,11. 189,3. 661,13. 866,and P<0.05). (3) In the unmethylated MKN74 and methylated RKO cell lines, the promoter activities of pGI3-H1/-H4 were obviously and contrarily different(as 1.57±0. 23/0. 94±0. 06 and 0. 38±0. 02/0. 50±0. 04 ,t values were 4. 577 and -4. 915 ,P values were 0. 010 and 0. 003). Conclusion The methylation status of CpG island of the target gene in the tested cell lines affects the promoter activity in Reporter Assay significantly. The most active one may be the most suppressive one.     

引物延伸-变性高效液相色谱法检测去甲基化活化16型乳头状瘤病毒

目的 建立1种检测16型乳头状瘤病毒(HPV16)7862nt上CpG位点非甲基化的方法.方法 培养宫颈癌SiHa和CaSki细胞系,提取基因组DNA,通过亚硫酸氢钠修饰将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,PCR法预扩增包含该位点的HPV序列,针对该CpG位点5'端序列设计并合成延伸引物,再在同时含ddTrP和ddCTP的体系中进行延伸反应,用变性高效液相色谱法同时分离检测2种延伸产物.结果 在SiHa细胞的延伸产物中仅能够检测到代表未甲基化位点的ddTTP延伸产物(保留时间6.7 min),而在CaSki细胞的延伸产物中不仅能够检测到ddTTP的延伸产物,还能检测到代表甲基化位点的ddCTP的延伸产物(保留时间6.3 min).结论 所建立的引物延伸-变性高效液相色谱联合检测法能够同时检出感染细胞中非甲基化活化和甲基化失活的HPV病毒拷贝,灵敏度达1/500(0.2%).     

江苏省宜兴地区丙型肝炎病毒F蛋白抗体检测

目的检测江苏省宜兴地区丙型肝炎（丙肝）患者血清丙肝病毒（HCV）-F抗体及其分布。方法利用基因重组获得的HCV—F／GST蛋白作为抗原，包被酶联反应板，ELISA间接法检测120例丙肝患者、15例乙肝患者、3例戊肝患者及10份正常人血清HCV—F抗体，结合丙肝患者的临床资料及疾病特征，统计分析HCV—F抗体的分布情况及与HCV感染的关系。结果120例丙肝患者血清HCV—F抗体阳性82例，阳性率68％，而15例乙肝、3例戊肝患者及10份正常人血清标本均未检出阳性；资料分析显示HCV—F抗体阳性率与HCV患者年龄、临床类型之间差异有统计学意义，51岁以上年龄组的HCV—F抗体阳性率是20～50岁组的6．675倍（95％CI：2．407～19．071），并且随着病程进展，阳性率也随之增高（OR=2．749，95％CI：1．470～5．141）。结论江苏省宜兴地区HCV感染者血清中存在HCV—F抗体，并可能与病程相关。     

颅脑CT轴位扫描头部摆位经验点滴

颅脑CT检查多用横断（即轴位）层面，有时加用冠状层面。横断面检查时患者仰卧于检查床上，头部伸入扫描架的孔内。扫描所用基线多用听眶上线（orbitomeatal line，OML，即眶上嵴与耳屏上缘的连线，可以最少的检查层面包括最大的检查部分）或听眦线（canthomeatal line，CML，即外眼眦与耳屏上缘的连线，检查眼眶、视神经），为使每一层面图像两侧对称，[第一段]     

长春新碱载体红细胞对小鼠S-（180）肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨长春新碱载体红细胞对昆明小鼠S180肿瘤的抑瘤作用.方法:用昆明种小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,将48只荷瘤小鼠随机分为长春新碱组、长春新碱载药红细胞组、未载药红细胞组和阴性对照组4组,每组各12只.分别经尾静脉注射长春新碱、长春新碱载药红细胞、洗涤红细胞及生理盐水,1次/3 d,共5次.所有治疗结束次日处死小鼠并称重,称瘤质量,计算各组瘤体平均质量及肿瘤抑瘤率.结果:长春新碱载药红细胞组的体质量增长幅度为(36.31±1.51) g,明显大于长春新碱组的(31.32±3.55) g(P＜0.01).长春新碱载药红细胞组平均瘤质量最轻,为(0.33±0.05)g,明显低于阴性对照组的(0.57±0.05) g(P＜0.05),该组抑瘤率达42.42%,是长春新碱组17.49%的2.43倍;未载药红细胞组瘤质量较阴性对照组大,抑瘤率呈负值,为-13.76%.结论:长春新碱载体红细胞体内抗肿瘤活性显著,有较强抑瘤作用,为临床肿瘤治疗提供新思路和可行方法.     

血必净治疗慢性阻塞性肺疾病并呼吸衰竭临床研究

机械通气是治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期合并呼吸衰竭的重要手段,但对基础肺功能状况较差的重度COPD 病人来说,如何进行顺利撤机,减少呼吸机依赖一直困扰着临床医生.采用静脉滴注血必净注射液对接受呼吸机治疗的COPD并Ⅱ型呼吸衰竭患者进行治疗,取得良好疗效,现报道如下.     

肺癌双眼转移1例

患者,女,48岁,2006年2月因刺激性干咳伴低热1个月入院,胸片见左肺门阴影,全身PET/CT示左肺上叶纵隔旁型肺癌,左肺上叶肺内转移及左侧肺门、纵隔多发淋巴结转移,双侧大脑多发转移.     

依法执法,促进结防工作可持续发展

近来，有些地方的卫生执法人员在执法监督中认为结防所持公共卫生执业医师执照的防痨医师没有处方权。这种看法已对结核病防治工作产生了极大的影响．同时也涉及到我国数万专业防痨医师依法享有的合法权利。这种看法的实质是疾病预防控制机构的公卫医师不能够从事诊断，治疗活动。笔者认为这种看法是没有法律依据的，现从法律角度谈谈个人的看法．供讨论。     

无水乙醇在滑囊炎治疗中的应用

滑囊炎的常见病因为损伤、类风湿、痛风、感染等，是一种常见多发病。其治疗常用消炎、止痛、注射醋酸氢化可的松，如无效则采用手术切除滑囊等。近10年来，笔者对62例滑囊炎采用囊内注射95％乙醇治疗，效果满意。现报告如下。     

职业病诊断争议一例报告

某患者因长期接触汞蒸气而出现肝功能异常和尿汞增高，被当地职业病诊断机构诊断为“慢性轻度中毒性肝病”。现将其职业病诊断与鉴定情况报告如下。