抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:研制抗DR5单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法:以纯化的DR5免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用,以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果:获得4株可分泌抗DR5mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1;腹水mAb效价为1×10-4~5×10-6;亲和常数为1×109水平,4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论:获得4株抗DR5的mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。     

抗人DR5功能性抗体mDRA．6诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand,TRAIL）及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性。我们研制了抗人死亡受体5（deathreceptor,DR5）功能性单克隆抗体（mDRA-6）,本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨。方法：mDRA．6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNAladder：Mr丌法检测细胞存活情况;AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况：观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA．6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase．PARP）、BH3相关结构域死亡激动剂（BH3 interacting domain death agonist,Bid）、短缩的Bid（truncated Bid,tBid）、细胞色素C（cytochromec,CytoC）等活化裂解的情况。结果：琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型：mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量-效关系。2．0μg／mLmDRA-6作用Jurkat细胞0．25h、0．5h、1h、2h．其凋亡率分别为16．2％、28．3％、69．2％、78．2％;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡,抑制率为77．9％,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54．2％、8．7％,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象．PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid,CytoC大量释放,而Caspase．10酶原无明显改变、无活化片段出现。结论：mDRA．6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的。     

560例白癜风病因分析

白癜风是一种常见的皮肤病 ,为后天性色素脱失性皮肤粘膜病变。为探讨影响白癜风形成的因素 ,我们回顾性分析了 5 6 0例白癜风患者的临床资料。1　资料与方法1.1　临床资料19992 0 0 2年 5 6 0例白癜风患者 ,均来自河南大学男科学研究所专家门诊、河南大学淮河医院及开封市第一人民医院皮肤科。1.2　调查方法根据病史及临床症状确诊和分型[1] 。我们设计了完整的随访记录表格 ,通过患者口述和临床症状进行记录。在第一次就诊时让患者进行病史回顾 ,详细进行了表格的填写。具体内容 :①发病季节。②有无家族史。③伴发疾病。④诱发原因。⑤首…     

阿霉素对HL-60、K562细胞表面DR5表达的影响

目的:观察白血病细胞HL-60、K562细胞表面DR5表达水平及阿霉素对其DR5表达的影响。方法:利用抗DR5单克隆抗体,流式细胞仪测定HL-60、K562细胞表面DR5表达量及1×10-4g/L的阿霉素作用细胞10h,HL-60、K562细胞表面DR5表达水平。结果:HL-60、K562细胞表面DR5表达量分别为58.66%、14.92%;1×10-4g/L阿霉素作用10h,HL-60、K562细胞表面DR5表达分别增至86.89%、15.98%。结论:阿霉素提高HL-60、K562细胞表面DR5表达量。     

检测DR5双抗体夹心 ELISA方法的建立及应用

目的:建立检测DR5双抗体夹心ELISA方法,通过检测慢性乙型肝炎患者血清可溶性DR5水平,探讨其在肝炎发病机理中的作用。方法:采用本室制备的鼠抗DR5的单抗YM366ED作为包被抗体,鼠抗DR5的单抗YM366EC标记HRP,建立检测sDR5的ELISA,并测定52例慢性乙型肝炎和30例正常人血清sDR5浓度。结果:建立了检测人sDR5的夹心ELISA法,方法的变异系数小于5%,回收率85%以上。慢性乙型肝炎患者血清sDR5浓度明显高于正常对照组。结论:成功地建立了一种可用于检测血清sDR5的双抗体夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具。血中sDR5在慢性乙型肝炎发病过程中可能起着重要作用,检测病人血中sDR5水平可作为慢性乙型肝炎疾病活动性指标。     

康复洗液治疗阴道炎180例临床分析

目的 :观察康复洗液治疗阴道炎的疗效。方法 :将 2 75例病人随机分为 2组 ,180例为治疗组 ,用康复洗液治疗 ,95例为对照组用洁尔灭洗液治疗 ,10d为 1疗程。结果 :二组治愈率及复发率比较均有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :应用康复洗液治疗阴道炎效果好 ,未发现副作用。     

抗DR5单抗增强顺铂诱导HeLa细胞凋亡作用的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)主要通过死亡受体5(death recep- tor,DR5)诱导肿瘤细胞凋亡。本文旨在探讨顺铂对HeLa细胞表面DR5分子表达影响及抗DR5单抗mDRA-6对顺铂诱导HeLa细胞凋亡增强作用。用间接免疫荧光染色结合流式细胞术分析DR5分子表达;MTT法检测HeLa细胞毒作用;用AnnexinV/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果:正常HeLa细胞表面DR5表达量为30.01%,顺铂不能上调HeLa细胞表面DR5表达;mDRA-6可以明显提高顺铂对HeLa细胞的细胞毒作用,且存在剂量效应关系。IC_(50)值约为12.5μg/ml。研究结果表明,mDRA-6能够明显增强顺铂对HeLa细胞的细胞毒及细胞凋亡作用。     

抗人DR5单克隆功能抗体mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase路径机制研究

目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞诱导凋亡的Caspase分子机制.方法:琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6作用后Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞生长抑制作用的剂量.效果关系;Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术定量分析mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用;观察Caspase-10、9、8、3等抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspaw-10、9、8、3、Bid(tbid)、Cyto c等活化裂解的情况.结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的生长抑制作用且呈量-效关系,Annexin V-FTTC/PI双染流式细胞术检测显示,mDRA-6在2.0 μg/ml浓度作用Jurkat细胞0.23、0.5、1、2小时,其凋亡率分别为16.17%、28.25%、69.23%、78.23%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA.6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.85%,Caspase-3和Cas-pase-9抑制剂的抑制率分别为54.20%、8.74%,而Caspase-lO的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、3、9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,Bid激活降解为tbid,Cyto c大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现.结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是激活了死亡受体信号传导途径上游的Caspase-8引起的,该细胞凋亡机制涉及Caspase-3、Caspase-9及Bid(tbid)、Cyto c等分子,而同样是凋亡的上游信号Caspase-10没有参与此凋亡过程.本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础.     

对白色念珠菌鉴定方法的对比研究

目的 :通过改进培养基成份及培养条件以达到快速鉴定白色念珠菌之目的。方法 :用人血清、脱脂奶粉、鲜牛奶培养基及玉米琼脂培养基培养白色念珠菌 ,在 37℃水浴培养 30min、60min和 90min。结果 :其芽管和厚膜孢子形成百分率各不相同 ,在牛奶培养基中芽管及厚膜孢子形成率高且迅速 ,与其它方法相比差异显著 (P <0 .0 1) ,特异性亦高。结论 :用牛奶培养基鉴定白色念珠菌简便、快速、特异且培养基易制备。     

反复自然流产患者血清sIL-2R水平分析

目的 :探讨不明原因反复自然流产 (RSA)患者在不同时期血清sIL - 2R水平。方法 :采用双抗体夹心ELISA法测定了 2 6例非孕期RSA患者 ,2 2例孕期RSA患者 ,8例出现先兆流产的孕期RSA患者 ,2 0例正常妊娠的孕妇与2 1例正常经产妇血清中sIL - 2R水平。结果 :出现先兆流产组血清sIL - 2R水平显著高于其它组 (P <0 .0 1) ,其余 4组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :血清sIL - 2R水平升高与先兆流产有关 ,RSA患者孕期血清sIL - 2R水平升高应警惕再次发生流产的可能。