环境胁迫影响药用真菌生长及生理生化机制的研究进展

为探究环境胁迫条件对药用真菌生长及生理生化机制的影响,本文就近年来食用及药用真菌在环境胁迫条件的生长代谢变化规律进行系统总结,旨在为药用真菌质量形成机制研究、药用真菌分子育种研究以及提高药用真菌产量和质量提供依据。同时,环境胁迫也可诱导药用真菌产生独特的生物代谢途径,为其提供了产生具有活性的新化合物的潜力,也可为利用药用真菌进行药物开发奠定基础。     

快速PCR法鉴别鱼腥草与百部还魂的方法研究

目的 建立鉴别鱼腥草Houttuynia cordata与百部还魂Gymnotheca chinensis的特异性PCR方法。方法 采集不同产地的鱼腥草与百部还魂样品各8份,所有样品提取总DNA。通过对其mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物,建立特异PCR鉴别方法,并通过加入SYBR Green I染料法对2种中药进行快速检测。另外,构建多重PCR体系,只经一个PCR反应,就能对鱼腥草与百部还魂进行快速分子鉴定。结果 所构建特异PCR与多重PCR体系均能产生鱼腥草185 bp的特异鉴别条带,百部还魂389 bp的特异鉴别条带,SYBR Green I染料可进行快速检测方法。结论 建立的鱼腥草与百部还魂2种中药的快速PCR鉴别方法简便、可靠。     

BBM基因对西洋参愈伤组织生长及人参皂苷含量的影响

Baby Boom(BBM)基因是植物细胞全能性的关键调节因子,在胚胎发育再生、细胞增殖、愈伤组织快速生长、促进分化等方面起着重要的作用。由于西洋参遗传转化体系存在转化不稳定、转化效率低、转化周期长等问题,该研究拟利用基因枪法将玉米BBM基因转入到西洋参愈伤组织中,以研究其对愈伤组织的生长以及人参皂苷含量的影响,为建立高效的西洋参遗传转化体系奠定基础。经草铵膦抗性筛选及PCR分子鉴定共获得4个不同转化事件的西洋参转基因愈伤组织,对野生型和转基因愈伤组织在相同时间内的生长状态、生长速率进行比较;利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对转基因愈伤组织中人参皂苷成分含量进行测定。结果表明,转BBM基因西洋参愈伤组织的生长速率显著高于野生型,人参皂苷Rb₁、Rg₁、Ro及Re的含量均显著高于野生型。该研究初步明确了BBM基因具有提高西洋参愈伤组织的生长速率及人参皂苷含量的作用,为进一步建立稳定、快速、高效的人参属物药用植物遗传转化体系提供依据。     

五倍子配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法。方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:退火温度为53℃,循环36次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考。     

地龙的多重位点特异性PCR鉴别

目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。     

基于DRGs数据的中医医院住院医疗服务收入占比影响因素分析△

目的：研究影响住院病例医疗服务收入占比达标率的因素。方法：选取2021年1月-6月在某医院住院的患者病历,以全市同类医院DRG组平均水平作为目标值,通过logistic回归分析内外科住院病例医疗服务收入占比达标的影响因素。结果：外科病例医疗服务收入占比达标率为33.56%,内科病例达标率为31.92%。影响达标率的因素有年龄、住院天数、DRG权重、耗材费用达标情况、医技费用达标情况、药品费用达标情况、是否手术/介入、中医非药物治疗费、手术介入费。外科科室控制耗材费用（OR：6.97（5.18,9.38）,P < 0.01）、内科科室控制医技费用（OR：5.29（4.36,6.42）,P < 0.01）将有助于病例医疗服务收入占比达标。结论：外科科室应加强耗材使用管理,管控成本;内科科室应规范检查检验行为,降低例均费用。作为中医医院,应发挥中医药特色优势,鼓励开展中医非药物治疗。基于DRG的标杆比较法具有一定客观性和可推广性。     

对照提取物用于当归药材质量控制的研究

为提高当归药材的质量标准,解决部分对照品稀缺问题,进行了以对照提取物为对照的当归药材质量控制研究。采用色谱分离技术制备对照提取物,并对其中3个指标成分阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H进行标定,建立了以对照提取物为对照的当归药材UPLC含量测定方法,并采用t检验对以对照提取物和对照品为对照的测定结果进行比较,结果基本一致,该方法可用于当归药材质量控制,且经济实用,本研究初步验证了其可行性。     

快速筛选高纯合度天麻PCR-RFLP鉴定方法

目的 建立一种快速筛选高纯合度天麻种质材料的方法，为其纯系育种和杂交育种奠定基础。方法 以本课题组前期天麻全基因组测序和群体重测序为基础，利用单核苷酸多态性（SNP）位点开发20个限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）标记，并采用聚合酶链式反应（PCR）-RFLP法对15份天麻种质的20个RFLP标记进行限制性内切酶实验，根据20个RFLP标记位点酶切条带数目，计算15份天麻种质的纯合度，进而对天麻种质纯合度进行评估；在此基础上，利用基因组重测序技术对评估结果进行验证。结果 利用PCR-RFLP法筛选获得10份纯合度>95%的种质材料，其中3份种质材料的纯合度为95%，7份种质材料的纯合度为100%；利用基因组重测序法筛选获得9份纯合度>95%的种质材料，其中8份种质材料与PCR-RFLP法检测结果一致。结论 该文所建立的用于筛选高纯合度天麻种质的PCR-RFLP法精确度为80%，准确率为89%。该方法实验操作简便、检测效率高，且成本显著低于基因组重测序技术，为天麻纯系育种提供了技术支撑，也为其他中药材品种选育研究提供了借鉴。     

地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性，建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据地龙氧化酶亚基1（COⅠ）基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间，并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R，分别采集地龙及其混伪品，建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系，对该方法进行耐受性和适用性考察。结果 退火温度为62 ℃，循环次数为36次，地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后，可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分，准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原，也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。     

天麻动力相关蛋白GeDRP1E基因的克隆及功能初探

基于天麻转录组数据,设计特异引物,克隆天麻DRP1E (dynamin-related protein 1E)基因,命名为GeDRP1E (GenBase登录号为C＿AA018577.1),借助ExPASy、ClustalW、MEGA等软件对基因进行生物信息学分析利用拟南芥、马铃薯遗传转化体系获得转基因植株,并对转基因拟南芥株高、结实率,转基因马铃薯微型薯的块茎长、宽、重量和淀粉含量等农艺性状进行检测和分析,初步解析GeDRP1E基因的功能。结果显示,GeDRP1E基因ORF全长1 899 bp、编码632个氨基酸残基,相对分子质量为69.90 kDa,分子式为C₃₀₇₉H₄₉₇₃N₈₈₃O₉₃₃S₁₉;理论等电点为7.27,不稳定系数为43.34,亲水性平均指数为-0.259,预测属于不稳定亲水性蛋白。GeDRP1E不存在跨膜结构,无信号肽,定位于细胞质。系统进化树显示,GeDRP1E与其他种类植物DRP1E蛋白之间具有较高的同源性,其中与铁皮石斛DcDRP1E (XP＿02...